2. 重庆桑禾动物药业有限公司，重庆 401519
2. Chongqing Honoroad Animal Health Co. Ltd, Chongqing 401519, China
玛卡(Lepidium meyemii)是十字花科独行菜属的一年生草本植物根茎，原产于秘鲁海拔3 500米以上的高原地区[1]。本文旨在探索云南产黄玛卡对骨质疏松的治疗作用，并进一步筛选玛卡抗骨质疏松的有效部位。
1 材料与方法 1.1 试剂与仪器云南鹤庆产黄色玛卡；维甲酸、依替磷酸钠(大连美仑生物公司)；血清钙试剂盒、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)试剂盒、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。全波长酶标仪(伯乐生命医学公司)；紫外可见分光光度计UV-1800(上海美普达公司)；荧光显微镜ECLIPSE(尼康公司)；原子吸收分光光度计Z-5000(日立)。
1.2 实验动物3月龄昆明小鼠，♀，体质量28 g~35 g，SPF级。购于重庆市中药研究院实验动物中心，许可证号：SYXK(渝)2009-0002。
1.3 方法80只昆明小鼠随机分组，10只为空白组(Normal)，每天仅灌胃生理盐水。其他70只上午灌胃维甲酸100 mg·kg-1，连续58 d。d 31，70只小鼠分为7组，下午分别灌胃生理盐水、依替磷酸钠60 mg·kg-1、玛卡乙醇浸膏(ethanolic extract, EE)、玛卡水溶部位(aqueous extract, AE)、正丁醇部位(n-butanol soluble part, BP)、乙酸乙酯部位(ethyl acetate soluble, EAP)、石油醚部位(petroleum ether soluble part, PEP)，玛卡治疗组给药剂量相当于玛卡干粉2 g·kg-1。灌胃生理盐水作为模型组(negative congtrol, NCK)，灌胃依替磷酸钠作为阳性组(positive control, PCK)。测定血清钙、TRAP、AKP含量，肝、脾、心、卵巢等器官的脏器系数，骨磷骨钙含量和骨显微结构[2]。
1.4 统计学处理实验数据用x±s表示，采用SPSS 20.0软件分析，多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)。
2 结果 2.1 玛卡提取物对小鼠脏器系数的影响NCK组小鼠的脾脏系数明显高于Normal(P＜0.01)，卵巢系数明显低于Normal(P＜0.05)，PCK能改善维甲酸所致卵巢萎缩，但对其他脏器无明显影响。AE可以明显改善维甲酸所致脾肿大和卵巢萎缩(P＜0.05)，BP能明显改善维甲酸所致脾肿大(P＜0.05)，其他玛卡提取物对脏器系数无明显改善作用。
2.2 玛卡提取物对小鼠血清生化指标的影响与Normal组相比，NCK的血清钙、AKP、TRAP差异都有显著性(P＜0.05)。EE能明显升高模型动物的血清钙水平，降低模型动物的AKP水平(P＜0.05)。AE能明显改善模型动物的血清钙、AKP和TRAP的水平(P＜0.05)，其他玛卡提取组对模型动物的血清钙、AKP和TRAP水平未见明显影响。见Tab 1。
| Group | Ca/ mmol·L-1 | AKP/King unit·(100 mL)-1 | TRAP/ U·L-1 |
| Normal | 1.73±0.21 | 14.83±1.72 | 35.66±3.53 |
| NCK | 1.50±0.15# | 20.50±1.72# | 40.22±3.49# |
| PCK | 1.71±0.24* | 17.75±1.32 | 36.21±3.78* |
| EE | 1.69±0.21* | 15.82±1.51* | 37.09±3.82 |
| AE | 1.70±0.29* | 15.05±0.85* | 36.41±4.39* |
| BP | 1.59±0.16 | 20.19±1.39# | 36.89±3.28 |
| EAP | 1.60±0.11 | 19.82±1.73# | 37.68±3.16 |
| PEP | 1.55±0.08# | 18.83±1.44 | 38.28±3.75 |
| #P＜0.05 vs normal; *P＜0.05 vs NCK | |||
Tab 2结果显示，NCK小鼠的骨钙和骨磷含量明显低于Normal。而PCK能明显增高模型小鼠的骨磷含量，但对骨钙的作用不明显。EE、AE和EAP能明显提高模型小鼠的骨钙水平，EE和BP对模型小鼠的骨磷含量有明显提高(P＜0.05)。
| Group | Femoral calcium/mg·g-1 | Femur phosphorus/mg·g-1 |
| Normal | 483.62±20.89 | 184.27±6.03 |
| NCK | 449.98±36.44## | 175.63±10.40# |
| PCK | 464.35±22.49 | 185.74±8.15* |
| EE | 472.93±19.47* | 184.31±9.37* |
| AE | 473.33±11.64* | 182.61±2.95 |
| BP | 463.07±29.78 | 187.26±5.38* |
| EAP | 480.15±22.48* | 183.10±7.27 |
| PEP | 467.23±24.23 | 180.56±5.41 |
| #P＜0.05, ##P＜0.01 vs normal; *P＜0.05 vs NCK | ||
与Normal相比，NCK的股骨骨密度、骨小梁数目和骨小梁厚度明显降低，而骨小梁间距明显增大，证明维甲酸确能致小鼠骨质疏松。AE可明显提高模型小鼠的骨密度、骨小梁数目和厚度，且减小骨间距；BP能明显提高骨小梁数目(P＜0.05)。
3 讨论结果显示，EE可以提高骨质疏松模型小鼠的血清钙、AKP水平、骨钙和骨磷含量。而AE可改善模型小鼠的脾脏和卵巢系数、血清指标、腰椎显微结构、骨钙含量、骨密度。BP可明显改善模型小鼠的脾脏系数、骨显微结构、骨磷含量。EAP能明显提高骨钙含量；PEP对维甲酸所致骨质疏松症状没有明显改善作用。AE对骨质疏松症状的改善效果最好，表明玛卡中抗骨质疏松的有效成分是高极性成分，主要集中在水溶性部位。
植物多酚和甾醇[3-4]曾被提出是抗骨质疏松的有效成分，但植物甾醇属于低极性成分，主要存在于石油醚部位，故不是玛卡的抗骨质疏松有效成分。有人提出多酚类化合物通过降低骨吸收、增加成骨细胞活性而发挥骨保护作用[5]，故本文支持多酚是玛卡抗骨质疏松的有效成分，但尚需进一步研究。
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| [2] | 陈景峰, 罗世英, 崔燎. 丹参素对糖皮质激素诱导骨丢失大鼠胫骨近端骨密度和骨微结构的影响[J]. 中国药理学通报, 2015, 31(12): 1681-7. Chen J F, Luo S Y, Cui L. Effect of tanshinol on bone mineral density and microstructure of proximol tibias in rats with bone loss induced by glucocorticoid[J]. Chin Pharmacol Bull, 2015, 31(12): 1681-7. doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.12.011 |
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