本课题组前期实验发现流感病毒A/FM/1/47 (H1N1) 引起小鼠死亡或体重百分数降低，此次实验采用金莲花粗提物灌胃的方法，确定金莲花粗提物的抗病毒作用对小鼠的肺脏的保护作用。
1 材料与方法 1.1 病毒株亚洲甲型鼠肺适应株A/FM/1/47 (H1N1)，中国预防医学科学院病毒学研究所提供。血凝滴度1 :512，Reed Muench法测定对小鼠的半数致死量(LD50)10-3.68。
1.2 主要试剂及仪器金莲花粗提物(由本课题组其他成员提取获得)，JJ200型电子天平，常熟双杰测试仪器厂。
1.3 动物分组及给药ICR小鼠80只，♀♂各半，体质量14 g~16 g，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，动物许可证号：SCXK(京)2011-0004, 随机分为对照组(Control组)、金莲花粗提物灌胃组(TGC组)、病毒感染模型1~3组(Ⅵ 1~3组)、治疗1~3组(Ⅵ+TGC 1~3组)，每组10只。Control组和TGC组用50 μL生理盐水滴鼻，其他小鼠分别取50 ul病毒滴鼻感染，1~3组感染病毒的滴度分别为101LD50，100LD50，10-1LD50。各组小鼠于病毒感染1 h后进行给药：TGC组和Ⅵ+TGC 1~3组灌胃金莲花提取物，其它以生理盐水灌胃，剂量均为0.2 mg每g体重每日，连续给药7 d。♀♂分笼正常饲养。
1.4 药物抗病毒作用研究计算病毒感染Ⅵ 1~3组小鼠的平均体重变化百分比±标准差(SEs)、白细胞计数、肺组织变化、计算脏器指数。
2 统计学方法实验数据采用SAS8.0软件进行统计学分析。以x±s表示，两两组间比较用T检验法分析。
3 结果接种病毒后，与Control组和TGC组相比，Ⅵ 1~3组和Ⅵ+TGC 1~3组小鼠精神状态明显变差，蜷缩、竖毛、饮食量减少，取材时Ⅵ 1~3组和Ⅵ+TGC 1~3组小鼠肺组织有明显充血，表明病毒感染小鼠模型造模成功。药物治疗明显提高感染病毒小鼠体重百分数、降低白细胞数量、降低小鼠肺指数，结果如Tab 1~3所示。
| Group | d 5 | d 8 |
| Control | 17.20%±0.1144 | 12.45%±0.0387 |
| TGC | 14.63%±0.0141* | 11.65%±0.02 |
| Ⅵ 1 | -7.00%±0.0469*# | -2.03%±0.0723*# |
| Ⅵ+TGC 1 | -4.42%±0.0638* | -0.20%±0.079* |
| Ⅵ 2 | -2.24%±0.0689*# | -1.53%±0.0563*# |
| Ⅵ+TGC 2 | 0.62%±0.0766* | 2.89%±0.1155* |
| Ⅵ 3 | -1.66%±0.0546*# | -0.66%±0.0597* |
| Ⅵ+TGC 3 | 0.22%±0.0373* | 0.03%±0.0545* |
| *P＜0.05 vs control; #P＜0.05 vs Ⅵ+TGC | ||
| Group | Time | |
| d 1 | d 7 | |
| Control | 1.95±1.20915 | 2.13±1.10574 |
| TGC | 1.25±0.50381 | 1.41±0.074246* |
| Ⅵ 1 | 3.68±0.98376*# | 3.31±0.265165*# |
| Ⅵ+TGC 1 | 2.90±0.15910* | 2.74±0.265165* |
| Ⅵ 2 | 3.67±0.24130*# | 3.70±0.848528*# |
| Ⅵ+TGC 2 | 1.84±0.33676* | 4.26±0.904213* |
| Ⅵ 3 | 4.71±1.02619*# | 3.85±0.228042*# |
| Ⅵ+TGC 3 | 2.85±0.15114* | 3.77±2.956590* |
| *P＜0.05 vs control; #P＜0.05 vs Ⅵ+TGC | ||
| Group | Liver | Lung | Kidney |
| Control | 0.056±0.002 | 0.006±0.000 | 0.007±0.000 |
| TGC | 0.055±0.001 | 0.006±0.001 | 0.007±0.001 |
| Ⅵ 1 | 0.057±0.002 | 0.023±0.005*# | 0.007±0.001 |
| Ⅵ+TGC 1 | 0.058±0.002 | 0.017±0.005* | 0.008±0.000 |
| Ⅵ 2 | 0.058±0.003 | 0.023±0.001*# | 0.008±0.000 |
| Ⅵ+TGC 2 | 0.057±0.001 | 0.016±0.002* | 0.007±0.000 |
| Ⅵ 3 | 0.053±0.007 | 0.014±0.002* | 0.007±0.001 |
| Ⅵ+TGC 3 | 0.057±0.003 | 0.013±0.002* | 0.009±0.002 |
| *P＜0.05 Control; #P＜0.05 Ⅵ+TGC | |||
甲型流感病毒是最致命的流感病毒亚型[1-2]，不仅导致肠道损伤，影响患者食欲[3]，还能引起小鼠糖基化突变并导致肺实质和肺充血[4]，并引发白细胞发挥对流感病毒感染和细菌继发感染的易感性的直接作用而发生数目的先升高后降低[5]。金莲花抗炎、抗病毒等作用能够抑制炎症早期毛细血管通透性的亢进、渗出和水肿症状，并能抑制炎症中期白细胞游走，增强单核巨噬细胞吞噬功能[6]。本实验结果显示金莲花粗提物灌胃能明显改善小鼠食欲，提高抗病毒能力，并明显改善病毒引起的肺充血等肺部疾病，但金莲花对小鼠肺脏抗炎作用的具体机制将于下一步实验进行研究。
(致谢: 本实验在北京中医药大学基础医学院生物教研室完成，在此表示感谢！ )
| [1] | Mi L, Xiang Z, Sha H, et al. Antigenic patterns and evolution of the human influenza A(H1N1) Virus[J]. Sci Rep, 2015, 5: 14171. doi:10.1038/srep14171 |
| [2] | 赵铁华, 邓淑华, 杨鹤松, 等. 半枝莲总黄酮抗甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究[J]. 中国药理学通报, 2014, 30(1): 147-8. Zhao T H, Deng S H, Yang H S, et al. Effect of total flavonoids of Scutellariabarbata against influenza A virus H1N1 infection of[J]. Chin Pharmacol Bull, 2014, 30(1): 147-8. |
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| [4] | Nedzad M, Adrian J R, Aleksandr S L, et al. Influenza vaccination accelerates recovery of ferrets from lymphopenia[J]. PLoS One, 2014, 9(6): e100926. doi:10.1371/journal.pone.0100926 |
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| [6] | 杨静伟, 张贵君, 吴明侠. 中药金莲花药效组分抗炎镇痛作用研究[J]. 中国药物评价, 2013, 30(4): 210-3. Yang J W, Zhang G J, Wu M X. The Chinese globe flower active components to study the anti-inflammatory and analgesic effects of[J]. China Drug Evaluat, 2013, 30(4): 210-3. |