血栓形成一般是指血液在变流状态下，导致止血机制过度激活的一种病理性的机体反应[1]。血栓形成是心、脑血管疾病的病理基础，因此抑制血栓的形成有助于减少心、脑血管病变的发生[2]。三七为五加科植物三七[Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen]的干燥根和根茎。其主要功效为化瘀止血、消肿定痛，现代药理研究表明三七具有止血、保护心脑组织、降血脂等作用[3]。注射用血栓通 (冻干) 是由三七主根提取三七总皂苷制成的静脉注射剂，具有活血祛瘀、通脉活络的功效。其主要成份为三七总皂苷，其中二醇三七皂苷 (以下简写为二醇苷) 有人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd，三醇三七皂苷 (以下简写为三醇苷) 包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、三七皂苷R1[4-5]。本文旨在探讨注射用血栓通对体外血栓形成的影响，并考察其主要成分二醇苷和三醇苷配比对体外血栓形成影响，为血栓通的临床应用、明确作用物质基础提供实验依据。
1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物健康♂ SPF级SD大鼠80只，体质量290~310 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供 (科学研究用SPF级SD大鼠，合格证号：11400700091178)。
1.1.2 药品、试剂与仪器注射用血栓通 (冻干)：广西梧州制药 (集团) 股份有限公司生产 (批号：14090715)，注射用赖氨匹林 (来比林)：国药集团国瑞药业有限公司生产 (批号：14090083)，二醇苷、三醇苷由广西梧州制药股份有限公司提供。体外血栓形成仪:中国中医研究院西苑医院监制。
1.2 方法 1.2.1 分组及给药 1.2.1.1 注射用血栓通对体外血栓形成的影响8周龄SD大鼠适应环境3 d后，按照体质量随机分为5组：对照组、来比林组、注射用血栓通共3组 (高、中、低剂量组)，每组7只。适应环境后开始给药，连续给药3 d。来比林及注射用血栓通用注射用生理盐水配制，高剂量组血栓通注射液100 mg·kg-1，中剂量组血栓通注射液50 mg·kg-1，低剂量组血栓通注射液25 mg·kg-1；来比林组90 mg·kg-1；进行尾静脉注射 (iv)，对照组注射等量的生理盐水。
1.2.1.2 二醇苷及三醇苷不同配比对体外血栓形成的影响8周龄SD大鼠适应环境3 d，然后按照体质量随机分为8组：对照组、来比林组、注射用血栓通组、二醇苷:三醇苷不同配比 (相同浓度按体积配比)5组 (3 :0、2 :1、1 :1、1 :2、0 :3)，每组8只。适应环境后开始给药，连续给药3 d。来比林及注射用血栓通用注射用生理盐水配制，三七皂苷用注射用生理盐水溶解后，过0.22 μm微孔滤膜，进行尾静脉注射 (iv)。注射用血栓通组100 mg·kg-1, 来比林组90 mg·kg-1, 不同配比三七皂苷组100 mg·kg-1，对照组注射等量的生理盐水
1.2.2 体外血栓形成方法末次给药30 min后，采用10%的水合氯醛 (3 mL·kg-1) 麻醉，沿腹中线开腹，用干棉球剥离小肠及筋膜，使下腔静脉暴露。用一次性注射器穿刺下腔静脉取血2.5 mL，按照Chandler体外法[6]，立刻将血注入旋转环内，注入的血量充满旋转环1/2以下 (1 mL), 迅速密封，置体外血栓形成仪上，37℃旋转15 min，倾出血栓，生理盐水洗涤，测量长度，吸干表面液体称量湿重，再将血栓条置64℃烘箱恒温烘烤1 h，恒重后称其干重。
1.2.3 统计学方法数据采用x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析，然后用Newman-Keuls检验进行两组之间的比较。
2 结果 2.1 注射用血栓通对体外血栓形成的影响通过对体外血栓形成仪上形成的静脉血栓进行分析，统计其长度、湿重、干重和单位含水量 (Tab 1)。从表中可以看出各个剂量的血栓通均能明显降低血栓形成的长度 (P＜0.01)，其作用和来比林无明显差异；高剂量和低剂量的血栓通还可以明显降低形成血栓的湿重和干重 (P＜0.01)，其作用略优于来比林，高剂量作用更为明显；但是各组血栓的含水量之间无明显差异。
| Group | Dose/mg·kg-1 | Length/mm | Wet weight/mg | Dry weight/mg | Water content/mg·mm-1 |
| Control | - | 45.6±13.79 | 132.9±40.81 | 52.0±30.81 | 2.4±0.42 |
| LBL | 90 | 21.6±7.98** | 88.2±44.38 | 29.7±19.54** | 3.0±0.84 |
| XST | 100 | 20.4±3.26** | 64.7±11.00** | 17.9±5.63** | 2.1±0.55 |
| 50 | 24.3±8.22** | 82.9±18.45 | 32.4±20.40 | 2.6±0.49 | |
| 25 | 22.5±8.32** | 63.4±17.58** | 27.5±6.43** | 1.7±0.92 | |
| **P＜0.01 vs control | |||||
从Tab 2中可以看出，除二醇苷:三醇苷为3 :0比例的配比明显增加了血栓形成的长度、湿重及干重 (P＜0.01)；其余各个配比均能明显降低血栓形成的长度 (P＜0.01)；二醇苷:三醇苷为0 :3比例配比，不仅明显降低血栓形成的长度，也明显减轻了其湿重和干重 (P＜0.01)，并且效果优于阳性药来比林和注射用血栓通；各组血栓的含水量无明显的差异。
| Group | Dose/mg·kg-1 | Length/mm | Wet weight/mg | Dry weight/mg | Water content/mg·mm-1 |
| Control | - | 41.6±22.10 | 159.7±91.40 | 51.5±5.46 | 2.7±0.51 |
| LBL | 90 | 23.4±1.63** | 113.7±12.49** | 23.7±5.07** | 3.9±0.64 |
| XST | 100 | 19.3±4.31** | 84.6±8.9** | 16.7±3.55** | 3.5±0.37 |
| PDS :PTS | |||||
| 3 :0 | 100 | 68.2±15.92** | 284.4±101.82** | 90.3±28.1** | 2.9±0.45 |
| 2 :1 | 100 | 23.8±4.22** | 130.5±68.35 | 30.2±7.08 | 4.2±0.75 |
| 1 :1 | 100 | 22.2±4.86** | 113.8±54.44 | 33.5±10.60 | 3.7±0.63 |
| 1 :2 | 100 | 25.5±3.89** | 129.4±48.45 | 30.2±8.56 | 3.8±0.46 |
| 0 :3 | 100 | 14.8±4.03** | 67.3±17.09** | 15.6±3.81** | 3.5±0.55 |
| **P＜0.01 vs control | |||||
血栓的形成包括血液流变学的改变和相关因子的变化，本实验通过体外血栓形成仪，在塑料环中注入血液模拟体内血液流动状态，由于血液流变学发生变化，血液凝固性增加，以这种形式形成的静脉血栓相似于体内血栓的形成。在近些年的实验和临床都已经证实了注射用血栓通具有抑制血小板和红细胞的过度聚集，溶解血栓，并能抑制IL-1、IL-6、TNF-α等的作用[7-8]。也有研究证明，注射用血栓通可以在体外不同程度抑制ADP、AA、PAF诱导的家兔血小板聚集[9]。我们的的实验表明，注射用血栓通能降低体外血栓形成的长度、湿重及干重，表现出良好的抑制血栓形成作用。
血栓通主要成分为三七二醇皂苷和三七三醇皂苷，在注射用血栓通中的含量大约为1 :2。已有研究显示，三醇苷能抑制大鼠血栓素A2释放，从而抑制血管收缩、血小板聚集和血栓形成[10]，而其二醇苷及不同配比对血栓形成的影响未见报道。本文研究二醇苷和三醇苷及其不同配比之间对体外血栓形成的影响。结果发现，二醇苷明显增加体外静脉血栓的长度、湿重及干重；而三醇苷组明显降低体外静脉血栓的长度、湿重及干重，两者的作用相反；二者不同配比之间均能抑制血栓的形成，但各个配比之间没有明显的差异。这为阐明血栓通抗血栓形成的药效物质基础提供了实验依据。
| [1] | 许军, 王阶, 温林军. 三七总皂苷干预血栓形成研究概况[J]. 云南中医中药杂志, 2003, 4(5): 46-7. Xu J, Wang J, Wen L J. Notoginseng total saponin intervention in thrombosis research[J]. Yunnan Tradit Chin Med Mater Med, 2003, 4(5): 46-7. |
| [2] | 吴小平, 刘放. 抗血小板聚集药物研究进展[J]. 西北药学杂志, 2009, 24(4): 327-30. Wu X P, Liu F. Platelet aggregation in drug research are reviewed[J]. Nor Pharm J, 2009, 24(4): 327-30. |
| [3] | 冯陆冰, 潘西芬, 孙泽玲. 三七的药理作用研究进展[J]. 中国药师, 2008, 11(10): 1185-7. Feng L B, Pan X F, Sun Z L. Research progress of notoginseng[J]. Chin Pharm, 2008, 11(10): 1185-7. doi:10.3969/j.issn.1008-049X.2008.10.023 |
| [4] | M a, W G, Mizutani M, Malterud K E. Saponins from the roots of Pananx Notoginseng[J]. Phytochemistry, 1999, 52: 1133-9. doi:10.1016/S0031-9422(99)00364-7 |
| [5] | Li X Y, Wang G J, Sun J G. Pharmacokinetic and absolute bioavailability study of total panax notoginsenoside, a typical multiple constituent traditional Chinese medicine (TCM) in rats[J]. Biol Pharm Bull, 2007, 30(5): 847-51. doi:10.1248/bpb.30.847 |
| [6] | 宁可永, 李贻奎, 高会丽, 李连达. 薯蓣皂苷元对大鼠体内外血栓形成及血液黏度的影响[J]. 中药新药与临床药理, 2008, 19(1): 3-5. Ning K Y, Li Y K, Gao H L, Li L D. Effects of methyl protodioscin on in vivo and in vitro thrombosis and blood viscosity in rats[J]. Tradit Chin Drug Res Clin Pharm, 2008, 19(1): 3-5. |
| [7] | 闫农, 张树新, 张琳, 刘淑媛. 血栓通注射液治疗缺血性脑血管病的疗效观察[J]. 中国中西医结合急救杂志, 2001, 8(2): 120-1. Yan N, Zhang S X, Zhang L, Liu S Y. Observation on curative effects of Xueshuantong injection on ischemic cerebrovascular disease[J]. Chin J Integr Tradit West Med Intensive Crit Care, 2001, 8(2): 120-1. |
| [8] | 张福康, 陆再华, 杨妍华. 三七总皂苷对细胞免疫炎症因子作用的研究进展[J]. 中国药师, 2001, 14(9): 1349-50. Zhang F K, Lu Z H, Yang Y H. Notoginseng total saponin on the research progress of cellular immune inflammatory factor[J]. Chin Pharm, 2001, 14(9): 1349-50. |
| [9] | 王炎炎, 朱慧超, 李来来, 肖扬. 注射用血栓通体外对家兔血小板聚集的影响[J]. 中草药, 2014, 45(18): 2669-72. Wang Y Y, Zhu H C, Li L L, Xiao Y. Effects of Xueshuantong injection on platelet aggregation in rabbits in vitro[J]. Chin Tradit Herb Drugs, 2014, 45(18): 2669-72. doi:10.7501/j.issn.0253-2670.2014.18.018 |
| [10] | 苏雅, 赵益桂, 张宗鹏, 岳南. 三七三醇皂苷对动物血小板功能及血栓形成的影响[J]. 中草药, 1996, 27(11): 666-9. Su Y, Zhao Y G, Zhang Z P, Yue N. The TNS affect platelet function and thrombosis[J]. Chin Tradit Herb Drugs, 1996, 27(11): 666-9. |