红花黄色素是从红花花瓣提取出的一种含多种水溶性查尔酮成分的混合物，具有抗血小板、抗氧自由基、抑制炎症因子等作用，注射用红花黄色素广泛用于心绞痛和脑梗死的治疗[1]，但其对药物代谢酶的影响尚未见报道。以下我们对其对药物代谢酶基因表达的影响进行研究。
1 材料与方法 1.1 给药方法♂ SPF级SD大鼠 (180~200 g，广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCK桂2009-0002)，分为5组，每组10只；按4、8 mg·kg-1(人临床静脉注射等效剂量) 和16 mg·kg-1腹腔注射红花黄色素 (浙江永宁药业股份有限公司)，空白组给生理盐水；1日1次，连续7 d；阳性组苯巴比妥钠 (上海新亚药业有限公司) 于d 3给药，腹腔注射80 mg·kg-1，每天1次，连续4 d。给药结束后断头处死大鼠，取出肝脏，备用。
| Groups | CYP2B1 | CYP3A1 | CYP3A2 | GSTA2 | UGT2B1 |
| Control | 0.94±0.29 | 1.11±0.23 | 9.61±2.33 | 2.37±0.75 | 0.19±0.05 |
| Phenobarbital | 40.40±5.82** | 4.74±1.08** | 28.86±6.49** | 7.37±1.26** | 1.48±0.35** |
| **P < 0.01 vs control group | |||||
数据以x±s表示，采用SPSS 17.0软件进行统计。
2 结果 2.1 苯巴比妥钠对大鼠肝脏药物代谢基因表达的影响与空白组进行比较，苯巴比妥钠组CYP2B1、3A1、3A2、GSTA2和UGT2B1基因表达均明显上调 (P < 0.01)。阳性对照组成立。见Tab 1。
2.2 注射用红花黄色素对大鼠肝脏药物代谢酶基因表达的影响与空白组比较，红花黄色素中剂量8 mg·kg-1(P < 0.05)、高剂量16 mg·kg-1(P < 0.01) 明显上调CYP1A1，低剂量4 mg·kg-1组可明显抑制CYP1A2(P < 0.01)，中剂量明显诱导CYP2C11(P < 0.05)，低和高剂量均可抑制CYP4A1(P < 0.01)，各剂量组对CYP2B1、2E1、3A1、3A2，GSTA2、M1和P1，UGT1A1和2B1的基因表达均没有影响 (P>0.05)。见Tab 2。
| Genes | Control | 4 mg·kg-1 | 8 mg·kg-1 | 16 mg·kg-1 |
| CYP1A1 | 0.0096±0.0028 | 0.0058±0.0030 | 0.013±0.0041* | 0.018±0.0058** |
| CYP1A2 | 1.20±0.23 | 0.68±0.16** | 1.24±0.26 | 1.38±0.38 |
| CYP2B1 | 0.94±0.29 | 0.75±0.30 | 0.71±0.34 | 0.79±0.31 |
| CYP2C11 | 3.20±0.58 | 3.33±0.66 | 3.99±0.85* | 3.51±0.73 |
| CYP2E1 | 8.98±1.79 | 9.90±2.09 | 9.47±1.45 | 8.65±1.17 |
| CYP3A1 | 1.11±0.23 | 1.13±0.30 | 1.14±0.29 | 1.08±0.24 |
| CYP3A2 | 9.61±2.33 | 9.81±2.13 | 9.90±2.23 | 9.60±2.38 |
| CYP4A1 | 1.43±0.47 | 0.77±0.11** | 1.04±0.20 | 0.62±0.21** |
| GSTA2 | 2.37±0.75 | 2.26±0.51 | 2.41±0.56 | 2.81±0.58 |
| GSTM1 | 3.77±0.69 | 4.05±0.82 | 3.92±0.65 | 3.88±0.53 |
| GSTP1 | 0.10±0.01 | 0.10±0.15 | 0.11±0.16 | 0.10±0.13 |
| UGT1A1 | 2.73±0.35 | 3.20±0.66 | 2.79±0.53 | 2.83±0.53 |
| UGT2B1 | 0.19±0.05 | 0.21±0.77 | 0.23±0.61 | 0.26±0.10 |
| *P < 0.05, **P < 0.01 vs control group | ||||
细胞色素P450(cytochrome P450) CYP1A1、1A2、2B1、2C11、4A1主要参与内源性物质如脂肪酸、类固醇激素和花生四烯酸等的合成和代谢[4]。我们的实验发现注射用红花黄色素可上调1A1和2C11、抑制1A2和4A1，提示该药可能会对体内一些内源性物质的代谢产生影响，这可能是红花黄色素的药理作用机制之一。CYP2E1的底物为小分子的毒物以及药物，临床上60%的药物经CYP3A代谢[4-5]。但红花黄色素对CYP2E1、3A1、3A2都没有明显的影响。
GST (glutathione S-transferase) 和UGT (UDP-glucuronyltransferase) 属于Ⅱ相酶系[6-7]，GST主要的成员有GSTA2、P1、M1等[6]，能催化GSH跟一系列亲电子类的化合物相结合，对体内亲电子类的内、外源性的物质起到解毒作用。UGT重要的成员有UGT1A1和2B1等，能够催化大多数药物、致癌物以及内源性物质如胆红素和类固醇的代谢解毒[7]。我们的实验结果显示，红花黄色素对GST (A2、P1和M1) 和UGT (1A1和2B1) 均无明显影响。
| [1] | 袁靖, 陈卫东. 红花黄色素在心脑血管系统疾病治疗中的应用进展[J]. 医学研究生学报, 2015, 28 (5): 557-60. Yuan J, Chen W D. Clinical application of safflower yellow in treatment of cardiovascular and cerebral vessels diseases[J]. J Med Postgr, 2015, 28 (5): 557-60. |
| [2] | Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2[J]. Methods, 2001, 25 (4): 402-8. doi:10.1006/meth.2001.1262 |
| [3] | 杨秀芬, 樊星花, 石卫州, 等. 血府逐瘀汤对大鼠肝组织内CYP, UGT和GST基因表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19 (23): 159-64. Yang X F, Fan X H, Shi W Z, et al. Effect of xuefu zhuyu decoction on gene expression of CYPs, UGTs and GSTs in liver tissues of rats[J]. Chin J ExpTradit Med Form, 2013, 19 (23): 159-64. |
| [4] | Guengerich F P. Cytochrome P450s and other enzymes in drug metabolism and toxicity[J]. AAPS J, 2006, 8 (1): E101-11. doi:10.1208/aapsj080112 |
| [5] | 马增春, 梁淼, 赵佳伟, 等. 四物汤及其有效成分对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响[J]. 中国药理学通报, 2015, 31 (9): 1319-23. Ma Z C, Liang M, Zhao J W, et al. Effects of Si-wu decoction and its active components on cytochrome p450 in rats[J]. Chin Pharmacol Bull, 2015, 31 (9): 1319-23. |
| [6] | Higgins L G, Hayes J D. Mechanisms of induction of cytosolic and microsomal glutathione transferase (GST) genes by xenobiotics and pro-inflammatory agents[J]. Drug Metab Rev, 2011, 43 (2): 92-137. doi:10.3109/03602532.2011.567391 |
| [7] | Ishii Y, Nurrochmad A, Yamada H. Modulation of UDP-glucuronosyltransferase activity by endogenous compounds[J]. Drug Metab Pharmacokinet, 2010, 25 (2): 134-48. doi:10.2133/dmpk.25.134 |