补骨脂是中医、维吾尔医常用药材,均用其治疗白癜风[1-3]。临床报道和基础研究均发现补骨脂及其复方具有肝毒性[4-5],其安全性值得关注。本研究对补骨脂水提取物进行小鼠灌胃给药急性毒性及亚急性毒性试验,探讨其毒性作用特点,为其合理应用和药物开发提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 药品与动物 1.1.1 动物100只昆明小鼠,♀、♂各半,体质量(20±2) g,购自新疆实验动物研究中心,许可证号:SCXK(新)2011-0001,饲养于新疆维吾尔医药研究所毒理学研究室。
1.1.2 药物与仪器补骨脂(产地:安徽,批号:20151027,购自新疆齐康哈博维药有限责任公司),全自动生化分析仪:7100型,日立公司;全自动血液分析仪:XT-2000iv,Sysmex corporation,JAPAN。
1.2 方法 1.2.1 补骨脂提取用水煎煮后,旋成浸膏(aqueous extract of Psoralea corylifolia,AEPC),按2015版中国药典测定含量[2],含补骨脂素2.78 mg·g-1、补骨脂酚12.72 mg·g-1和异补骨脂素1.91 mg·g-1。用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液配制使用。
1.2.2 急性毒性试验溶媒对照组(0.5%CMC-Na)、AEPC 18.6 g·kg-1·d-1组,每组20只小鼠,♀、♂各半。补骨脂药材每天临床最大用量为6 g~10 g[2],依成人体质量60 kg相当于临床用剂量的925倍。常规方法进行急性毒性试验[6]。
1.2.3 亚急性毒性试验设溶媒对照组(0.5% CMC-Na)、AEPC低、高剂量组(分别为0.8、1.6 g·kg-1,为临床剂量的40、80倍),每组20只,♀、♂各半。常规方法进行亚急性毒性试验[6]。测定体重、血液学、血液生化学、脏器重量级系数,肝脏HE染色观察组织形态变化。
1.2.4 统计方法实验数据用x±s表示,采用PEMS统计软件进行t检验。
2 结果 2.1 急性毒性试验溶媒对照组未见异常反应,AEPC组小鼠出现活动减少、呼吸急促、倦怠、竖毛、仰卧、步态不稳、震颤等症状,30min内全部死亡,肉眼可见肝脏充血,组织病理学检查可见肝细胞轻度水肿。
2.2 亚急性毒性试验与溶媒对照组比较,AEPC组一般观察未见明显变化。AEPC高剂量组给药d 14体质量明显升高(P<0.05-P<0.01),♂肝脏重量明显升高(P<0.01)、脾脏重量明显升高(P<0.05),♀肝脏系数、胸腺重量明显升高(P<0.05)(Tab 1),其余脏器重量及系数与对照组比较未见明显改变。AEPC组♂高剂量组WBC、PCT明显升高(P<0.05),低、高剂量组RBC、HGB、HCT明显升高(P<0.05),LYMPH(%)明显升高(P<0.05-P<0.01)(Tab 2);♀动物高剂量组RBC、HGB、PLT、PCT明显升高(P<0.05~<0.01),低剂量组EO(%)有一定降低(P<0.05)(Tab 3);AEPC组血液生化学未见与药物毒性相关的改变。组织病理学检查溶剂对照组未见异常。AEPC组高剂量组肝细胞出现轻中度水肿,主要在中央静脉周围。
Gender | Group | D 14 | Liver weight/g | Spleen weight/g | Thymusweight/g | Liver coefficient |
male | Control | 36.2±5.0 | 1.7281±0.2664 | 0.1391±0.0568 | 0.1834±0.2819 | 4.8648±1.1078 |
AEPC-low dose | 37.3±1.7 | 1.9493±0.2135 | 0.1281±0.0610 | 0.0954±0.0236 | 5.2165±0.2135 | |
AEPC-high dose | 39.6±2.6* | 2.2068±0.2344** | 0.1017±0.0119* | 0.1082±0.0176 | 5.6218±0.5073 | |
female | Control | 30.6±3.3 | 1.4459±0.2427 | 0.1071±0.0476 | 0.1150±0.0316 | 4.7557±0.4873 |
AEPC-low dose | 30.7±1.3 | 1.5144±0.2087 | 0.0975±0.0170 | 0.1433±0.0294 | 4.9305±0.6263 | |
AEPC-high dose | 33.8±1.7** | 1.8023±0.1405** | 0.0964±0.0226 | 0.1545±0.0350* | 5.3569±0.5969* | |
*P<0.05,**P<0.01 vs control group |
Hematological index | Solvent Control | AEPC-low dose | AEPC-high dose |
WBC/×109·L-1 | 5.00±2.92 | 6.65±1.87 | 7.87±2.45* |
RBC/×1012·L-1 | 8.01±3.04 | 9.83±0.82* | 10.32±0.67* |
HGB/g·L-1 | 126.2±47.9 | 157.9±15.4* | 166.3±8.9* |
HCT/% | 39.2±15.0 | 49.5±4.2* | 51.6±2.9* |
PLT/×109·L-1 | 1012±550 | 1318±228 | 1329±152 |
PCT/% | 0.668±0.383 | 0.896±0.144 | 0.912±0.118* |
MCV/fL | 48.7±2.4 | 50.4±2.8 | 50.1±1.8 |
MCH/pg | 16.3±2.0 | 16.1±0.9 | 16.1±0.4 |
MCHC/g·L-1 | 334.2±41.0 | 318.9±7.8 | 322.3±7.2 |
NEUT/% | 23.1±15.2 | 24.0±11.0 | 17.2±4.1 |
LYMPH/% | 43.6±25.6 | 63.4±12.6* | 70.5±5.1** |
MONO/% | 10.79±8.32 | 9.96±4.30 | 9.48±3.35 |
EO/% | 2.48±2.06 | 2.61±0.98 | 2.88±0.77 |
RET/% | 7.76±9.82 | 5.48±1.85 | 4.20±1.37 |
*P<0.05,**P<0.01 vs control |
Hematological index | Solvent Control | AEPC-low dose | AEPC-high dose |
WBC/×109·L-1 | 7.23±2.30 | 9.60±4.69 | 8.44±2.89 |
RBC/×1012·L-1 | 9.45±1.08 | 9.90±0.75 | 10.19±0.56* |
HGB/g·L-1 | 150.0±25.2 | 159.2±12.4 | 167.2±13.1* |
HCT/% | 46.3±5.5 | 48.5±3.9 | 50.2±4.2 |
PLT/×109·L-1 | 870±170 | 1033±208 | 1211±131** |
PCT/% | 0.581±0.120 | 0.682±0.149 | 0.769±0.079** |
MCV/fL | 49.0±2.0 | 49.1±3.4 | 49.2±2.4 |
MCH/pg | 15.8±1.3 | 16.1±1.1 | 16.4±0.8 |
MCHC/g·L-1 | 322.0±22.4 | 328.2±10.7 | 333.6±10.9 |
NEUT/% | 13.8±2.5 | 10.6±8.7 | 13.1±6.1 |
LYMPH/% | 74.2±4.8 | 46.3±36.4 | 64.9±25.5 |
MONO/% | 8.59±2.96 | 7.97±8.04 | 8.37±7.07 |
EO/% | 3.46±1.26 | 1.75±1.62* | 2.49±2.28 |
RET/% | 3.56±1.61 | 3.14±0.64 | 3.53±0.80 |
*P<0.05,**P<0.01 vs control. |
研究结果显示,补骨脂水提取物对小鼠RBC、HGB、HCT(%)、PCT、PLT具有明显的升高作用,♀♂小鼠均有升高,有一定的剂量相关性,判断补骨脂水提取物对小鼠血液学有一定影响,可能与其功能主治相关。AEPC高剂量组肝脏重量及系数明显升高,肝脏组织病理学光镜检查AEPC高剂量组肝细胞出现水肿,主要在中央静脉周围,AEPC临床人用剂量的80倍对小鼠具有一定的肝毒性。
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