2. 湖南中医药大学 中医诊断学湖南省重点实验室，湖南 长沙 410007
2. Hunan Provincial Key Laboratory of Diagnostics in Chinese Medicine, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410007, China
RSV(respiratory syncytial virus,呼吸道合胞病毒)感染介导的Th1/Th2、Th17/Treg失衡诱导儿童支气管哮喘的发生发展[1-2]。五虎汤是由麻黄、杏仁、石膏、甘草、细茶叶组成的治疗小儿哮喘的经典名方。前期研究表明，五虎汤抑制哮喘患儿CD80、CD86及IL-4、IL-5表达，促进IL-2表达[4]。因此，本文拟采用RSV诱导联合OVA(ovalbumin,卵清白蛋白)致敏复制幼年大鼠哮喘模型，研究五虎汤对Th1/Th2、Th17/Treg 介导IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17炎性细胞因子影响，明确其治疗病毒诱发哮喘的作用机制。
1 材料与方法 1.1 受试药物五虎汤由本院药剂科提供。制备方法：6倍水先煎麻黄30 min ，去上沫，纳杏仁、石膏、甘草，细茶叶煎1 h，连续提取2次，分别浓缩至含4.752、2.376、1.188 g生药·kg-1。
1.2 仪器、试剂及病毒酶标仪，318C+型，上海沛欧分析仪器有限公司；低温台式高速离心机，HR/T 16M型，赫西仪器装备有限公司。IL-10、IL-12、IFN-γ及IL-17ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司提供，批号：EK0418、EK0520、EK0978、EK1527)。RSV，武汉大学医学部病毒研究所提供。
1.3 动物分组及给药SPF级SD大鼠60只，♂/♀，体质量(60±10)g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号：SCXK(湘)2013-0004]。参照文献[5]，制备RSV诱导OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后，分层随机分为五虎汤高、中、低剂量组、哮喘模型组及阳性对照组，每组10只。五虎汤高、中及低剂量组po给予4.752、2.376、1.188 g·(kg·d)-1药液，空白对照组、哮喘模型组分别po等容积双蒸水，阳性对照组po地塞米松片2.4 mg·(kg·d)-1，2次/d，持续14 d。
1.4 检测指标末次给药后，禁食12 h，处死动物，采集支气管肺泡灌洗液(BALF)，检测细胞计数及分类计数；取肺组织，行组织病理学检查；腹主动脉采血，3 000 r·min-1离心10 min，取血清，ELISA法检测血清IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17表达情况。
1.5 统计学分析数据以x±s表示，SPSS软件进行正态性和方差齐性检验，若满足，采用One-way ANOVA分析，不满足，采用秩和检验。
2 结果 2.1 对肺组织病理影响模型组可见支气管壁大量炎性浸润，平滑肌层增厚，杯状细胞增生，上皮细胞大量脱落。五虎汤治疗后呈剂量依赖性明显抑制支气管壁炎性浸润，平滑肌层恢复正常，少量杯状细胞分布，上皮细胞少量脱落。
2.2 对BALF细胞计数及分类计数影响模型组白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例均较空白组明显升高(P＜0.01)。五虎汤高、中剂量白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞均明显下降(P＜0.01，P＜0.05)。
2.3 对IFN-γ、IL-12、IL-10、IL-17表达影响模型组较空白组IFN-γ、IL-12降低，IL-10、IL-17升高(P＜0.05)。五虎汤治疗后高、中剂量较模型组IFN-γ、IL-12升高，IL-10、IL-17降低(P＜0.01，P＜0.05)。
3 讨论五虎汤是治疗小儿哮喘的经典名方，前期研究表明其能抑制呼吸道合胞病毒复制，调控IL-2、IL-4 、IL-5等炎性因子表达[3, 6]。RSV感染介导的Th1/Th2、Th17/Treg失衡是引起儿童支气管哮喘的始动因素[1-2]，IL-12诱导Th 1细胞产生IFN-γ[7]，而失衡的Th2细胞诱生IL-10，Th17细胞失衡则促进IL-17的大量生成[8]。研究显示，五虎汤能促进IFN-γ、IL-12表达，抑制IL-10、IL-17表达，并剂量依赖性明显抑制支气管壁炎性浸润，平滑肌层恢复正常。结果提示，五虎汤能显著抑制病毒诱发的幼年大鼠哮喘气道炎症，其作用机制可能与其调节IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17等表达，使失衡的Th1/Th2、Th1/Treg恢复平衡有关。
( 致谢: 本实验在湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室进行，感谢实验室及课题组所有老师的帮助。 )
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