2. 中南大学 湘雅二医院药学部,湖南 长沙 410011;
3. 中南大学 临床药学研究所,湖南 长沙 410011
2. Dept of Pharmacy, the Second Xiangya Hospital ;
3. Institute of Clinical Pharmacy, Central South University, Changsha 410011, China
顺铂广泛用于治疗各种实体瘤,但由于其在肝脏蓄积,且肝脏对顺铂敏感性高[1],高剂量给药或低剂量重复给药,患者肝毒性频发。氧化应激与顺铂所致肝脏病理损伤有密切关联[2]。而丹参具有抗氧化,清除脂质过氧化物的功效[3]。因此,本课题旨在研究丹参对顺铂给药小鼠肝功能的影响,并探讨其作用机制。
1 材料 1.1 实验动物SPF级♂ ICR小鼠,体质量20 g~23 g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,许可证SCXK(湘)2011-0003。
1.2 药物与试剂丹参注射液(正大青春宝药业有限公司);顺铂(Sigma);ALT、AST测定试剂盒(和光纯药工业株式会社);SOD、GSH-Px、MDA检测试剂盒(南京建成生物工程研究所);一抗(Abcam);二抗及β-actin (Proteintech)。
1.3 仪器全自动生化分析仪(日立公司);电动玻璃匀浆器(日本新芝);酶标仪(汇松公司);低温高速离心机(深圳黑马);电泳仪(BIO-RAD公司);转膜仪(北京六一生物科技有限公司)。
2 方法 2.1 分组将小鼠随机分为4组(n=9):对照组(腹腔注射等体积生理盐水)、丹参组(腹腔注射丹参3 g·kg-1)、顺铂组(单次腹腔注射顺铂20 mg·kg-1)、丹参+顺铂组(丹参连续给药7 d,d 5腹腔注射顺铂)。实验d 8处死小鼠,取血和肝组织用作后续分析。
2.2 检测指标全自动生化分析仪测定血清ALT、AST活性;肝脏HE染色,观察病理变化;试剂盒测定肝匀浆SOD、GSH-Px活性和MDA含量;蛋白免疫印迹法检测肝脏HO-1蛋白表达。
2.3 统计学处理用SPSS 18.0软件进行统计分析,数据以x±s 表示,组间比较用单因素方差分析。
3 结果 3.1 肝功能丹参保护组血清ALT、AST活性低于顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05),见Tab 1。
Group | ALT/U·L-1 | AST/U·L-1 |
Control | 36.80±6.17 | 119.51±21.28 |
Danshen | 36.22±5.12 | 111.98±14.30 |
Cisplatin | 65.82±5.71** | 293.90±43.60** |
Danshen+Cisplatin | 53.83±8.32## | 216.16±21.65## |
**P<0.01 vs control;##P<0.01 vs cisplatin. |
顺铂组小鼠出现轻微肝细胞水肿,炎性细胞浸润和坏死。丹参保护组肝组织形态结构接近对照组,未见明显病理改变。
3.3 SOD、GSH-Px活性及MDA含量与顺铂组相比,丹参保护组SOD、GSH-Px活性增高,MDA含量降低,其中,GSH-Px和MDA组间差异具有统计学意义(P<0.05),见Tab 2。
Group | SOD/kU·g-1Pro | GSH-Px/kU·g-1Pro | MDA/μmol·g-1Pro |
Control | 6.37±1.76 | 56.99±20.80 | 3.71±1.64 |
Danshen | 6.76±1.70 | 54.84±20.16 | 3.23±1.27 |
Cisplatin | 3.51±2.13* | 30.78±13.79* | 7.67±2.10** |
Danshen+Cisplatin | 5.89±2.83 | 53.15±17.87# | 4.63±2.07## |
*P<0.05,**P<0.01 vs control;#P<0.05,##P<0.01 vs cisplatin |
丹参保护组HO-1蛋白含量高于顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,与对照组相比,丹参组小鼠肝组织HO-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。
4 讨论本研究发现小鼠单次腹腔注射顺铂20 mg·kg-1引起血清转氨酶升高,抗氧化物耗竭,脂质过氧化物增加,与文献报道一致[4]。首次证实丹参能拮抗顺铂所致肝脏氧化损伤,发挥防御作用。HO-1是血红素代谢的限速酶,上调HO-1的表达能防治多种药物所致肝组织病理损伤[5]。研究发现丹参能上调HO-1表达,发挥肝保护作用。由于丹参兼具抗肿瘤活性,因此,丹参与顺铂合并用药可能发挥减毒增效的独特优势。
( 致谢: 本实验在中南大学药学院和湘雅市第二医院药学部实验室进行,在此对参与本试验研究和给予帮助的人员表示衷心感谢。 )
[1] | 廖英俊, 汤浩, 金亚平. 抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究[J]. 中国药理学通报, 2004, 20 (1) : 82-5. Liao Y J, Tang H, Jin Y P. Study of toxic effects on hearing,kidney and liver of mice induced by anticancer agent of cisplatin and their mechanisms[J]. Chin Pharmacol Bull, 2004, 20 (1): 82-5. |
[2] | Dkhil M A, Al-Quraishy S, Aref A M, et al. The potential role of Azadirachta indica treatment on cisplatin-induced hepatotoxicity and oxidative stress in female rats[J]. Oxid Med Cell Longev, 2013, 2013 : 741817. |
[3] | 陈俞材, 方莲花, 杜冠华. 丹参水溶性化合物抗心肌缺血作用的研究进展[J]. 中国药理学通报, 2015, 31 (2) : 162-5. Chen Y C, Fang L H, Du G H. Research advances in protective effects of water soluble compounds in Salvia miltiorrhiza against myocardial ischemia[J]. Chin Pharmacol Bull, 2015, 31 (2): 162-5. |
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