近年来，糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率逐年升高，已成为全球性公共卫生问题。淋巴细胞是执行免疫功能的主要细胞成员，对维持机体内环境的稳定发挥重要作用。有研究显示，2型DM患者淋巴细胞增殖活性明显低于正常对照[1]。维生素D(vitamin D，VD)是一种重要的调节钙磷平衡和脂质代谢的激素。近年来，有研究证明，VD还具调控胰岛素抵抗和免疫调节等功能，在维持机体免疫中发挥重要作用，并且可以减轻DM肾病和胰腺等的损伤。但是，关于VD补充对DM患者淋巴细胞增殖活性和脏器指数影响的研究却鲜有报道。
1 材料与方法 1.1 材料SPF级♂ SD大鼠(山东省鲁抗制药公司)。胆固醇，胆盐(河南平顶山公司)。STZ(美国Sigma公司)。血糖仪和试纸(日本拜耳保健有限公司)。VD3(青岛双鲸公司)。酶标仪(西安明克斯检测设备有限公司)。
1.2 造模及干预大鼠适应性喂养1周后，随机分为对照组(12只)和糖尿病造模组(88只)，分别喂养基础饲料和高糖高脂饲料4周[2]，两组分别空腹腹腔注射柠檬酸钠缓冲液和链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg-1，注射后24 和72 h测大鼠空腹血糖，两次均>11.1 mmol·L-1为造模成功[3]。将造模成功的80只大鼠随机分为5组。6组大鼠给予不同剂量的VD3连续灌胃6周，对照组N和糖尿病模型组DM组，给予生理剂量的VD3(36 IU·kg-1)，5N、25N、125N和200N组分别给予5倍、25倍、125倍和200倍生理剂量的VD3，剂量分别为180、900、4500和7200 IU·kg-1。
1.3 检测指标大鼠处死后留取各脏器，计算各脏器指数(脏器重量/大鼠体重)。血清25(OH)D采用放射免疫法检测。淋巴细胞增殖活性采用MTT法检测。
1.4 统计学分析采用SPSS17.0进行单因素方差分析，数据呈正态分布，用x ± s表示，数据两两比较用LSD方法。
| Group | Pancreas index | Spleen index | Liver index | Kideny index | Adrenal index | Thymus index | Prostate index | Testes index |
| *P＜0.05 vs N group; #P＜0.05 vs DM group. | ||||||||
| N | 0.0463±0.0009 | 0.0020±0.0005 | 0.0268±0.0028 | 0.0054±0.0007 | 0.0001±0.0000 | 0.0011±0.0004 | 0.0019±0.0008 | 0.0084±0.0013 |
| DM | 0.0403±0.0172 | 0.0023±0.0008 | 0.5024±0.0144* | 0.0083±0.0014* | 0.0002±0.0010 | 0.0010±0.0003 | 0.0015±0.0007 | 0.0093±0.0015 |
| 5N | 0.0038±0.0122 | 0.0025±0.0002 | 0.0492±0.0077* | 0.0074±0.0015* | 0.0002±0.0000 | 0.0009±0.0003 | 0.0019±0.0020 | 0.0083±0.0014 |
| 25N | 0.0039±0.0013 | 0.0024±0.0007 | 0.0491±0.0067* | 0.0080±0.0014* | 0.0002±0.0002 | 0.0009±0.0003 | 0.0013±0.0006 | 0.0090±0.0021 |
| 125N | 0.0040±0.0009 | 0.0020±0.0005 | 0.0469±0.0056* | 0.0072±0.0014*# | 0.0002±0.0000 | 0.0009±0.0004 | 0.0011±0.0015 | 0.0081±0.0023 |
| 200N | 0.0045±0.0013 | 0.0023±0.0003 | 0.0488±0.0089* | 0.0077±0.0001* | 0.0005±0.0007*# | 0.0009±0.0004 | 0.0011±0.0015 | 0.0085±0.0017 |
25N、125N和200N组大鼠血清25(OH)D浓度明显高于N和DM组，并呈现明显剂量-效应关系。与DM组相比，125N组体重明显增长，接近正常水平。
2.2 脏器指数与N组相比，DM组和各VD干预组的肝脏和肾脏指数明显升高。而125N组和DM组相比，肾脏指数明显降低。
2.3 淋巴细胞增殖活性与N组比较，淋巴细胞增殖活性在DM组明显降低。与DM组相比，5N组和25N组明显升高，而125N和200N组未观察到类似结果。
3 讨论本研究证明，DM大鼠连续6周每天摄入125倍剂量的VD能够降低肾脏指数，其可能是通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体的表达，降低足细胞活动力而起到保护肾脏的作用[4]。Cantorna等证实1,25(OH)2D3可能通过下调IL-12和上调IL-4与TGF-β来增加Th2淋巴细胞的数目。Gepner等[5]的研究证实1,25(OH)2D3能作用于Th细胞而抑制B细胞合成和分泌免疫球蛋白而增加Ts细胞的活性。这与我们的研究结果一致，因此我们推测，适量的VD3补充可通过免疫调节作用增强DM大鼠的淋巴细胞增殖活性。
| Group | Absorbance value |
| *P＜0.05 vs N group; #P＜0.05 vs DM group. | |
| N | 0.816±0.259 |
| DM | 0.661±0.227* |
| 5N | 1.024±0.118# |
| 25N | 0.923±0.207# |
| 125N | 0.692±0.127 |
| 200N | 0.816±0.135 |
在本研究中，我们应用了从生理剂量到200倍生理剂量较大范围内的不同水平VD3补充，国内外尚未见类似报道。同时，在造模时我们得到了一个较高的成模率。但是此研究是针对大鼠的，其研究结果不能直接推及到人。本研究为大剂量VD3对淋巴细胞增殖活性的影响提供了重要的科学依据，其机制有待进一步的深入研究。
| [1] | 陈向芳, 刘志民, 赵 瑛, 等. 褪黑素对2型糖尿病患者外周血淋巴细胞增殖与凋亡反应的影响[D]. 全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议,2004, 2. Chen X F, Liu Z M, Zhao Y, et al. Effect of melatonin on peripheral blood lymphocyte proliferation and apoptosis in type 2 diabetes patients[D]. The first academic meeting of metabolic syndrome and clinical project,2004, 2. |
| [2] | 刘双梅, 李桂林, 汤晓丽, 等. 甲基莲心碱对2型糖尿病模型大鼠作用的代谢组学研究[J]. 中国药理学通报,2012, 28(4):490-5. Liu S M, Li G L, Tang X L, et al. Effects of neferine on type 2 diabetic mellitus rats by metabonomics method[J]. Chin Pharmacol Bull, 2012, 28(4) : 490-5. |
| [3] | Ti Y, Xie G L, Wang Z H, et al. TRB3 gene silencing alleviates diabetic cardiomyopathy in a type 2 diabetic rat model[J]. Diabetes,2011, 60(11):2963-74. |
| [4] | 马建超, 史 伟, 章 斌, 等. 1,25-二羟基维生素D_3通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达降低足细胞活动力[J]. 中国新药与临床杂志,2012, 31(7):401-5. Ma J C, Shi W, Zhang B, et al. 1,25-Dihydroxy vitamin D3 reduces motility of podocytes via inhibiting urokinase-type plasminogen activator expression[J]. Chin J New Drugs Clin Rem, 2012,31(7):401-5. |
| [5] | Gepner P, Amor B, Founier C. 1,25-Dihydroxyvivtamin D3 protentiates the in vitro inhibitoy effect of cyclosporin A on T cells from rheumatoid arthritis patients[J]. Arthritis Rheum, 1989,32(1):31-6. |