大蒜及其烯丙基硫化物的抗肿瘤作用正日益受到关注^{[1, 2]}。我们的前期研究显示，DADS对人白血病HL-60细胞具有双效作用，小剂量DADS( < 1.25 mg·L^-1)诱导人白血病细胞分化，而中等剂量DADS(>1.25 mg·L^-1)可诱导人白血病细胞凋亡^{[3, 4]}。我们的前期研究表明，Rac2与DADS诱导人白血病细胞凋亡相关^[5]，且DADS通过活性氧介导的JNK信号通路诱导HL-60细胞的凋亡，且NADPH氧化酶的活化是DADS诱导HL-60细胞凋亡过程ROS的主要来源^{[6, 7]}。本研究在前期工作基础上，比较DADS对人早幼粒白血病系HL-60细胞、人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞、人何杰金式淋巴瘤细胞系Raji细胞的增殖抑制作用、诱导凋亡作用，同时也比较了DADS对这3种细胞活性氧产生以及Rac2的表达的影响。为进一步阐明DADS诱导肿瘤细胞凋亡的机制，为肿瘤细胞的诱导凋亡治疗提供新思路。

DADS为Fluka公司产品； BCA蛋白定量试剂盒为Pierce公司产品；2′,7′-二氯氢化荧光素二脂(DCFH-DA)，Rac2等一抗为Santa Cruz公司产品(sc-96)。二抗(sc-2774)为 Abcam Biotechnology 公司产品。

细胞培养采用常规培养，培养液为含10%小牛血清的RPMI 1640，在37℃，饱和湿度，5% CO₂，每3-4天换液传代。

细胞接种于96孔板，常规培养72 h。于结束前4 h 除对照组外，每孔加MTT溶液孵育4 h，终止培养。离心弃上清。酶联免疫检测仪上测各孔吸光度，检测波长570 nm ，按下列公式计算抑制率(IR%)。IR%=(1-实验组_OD570/对照组_OD570)×100%。

利用Primer Premier 5.0 软件进行引物设计。β-actin正义引物序列为5′-CCTGTACGCCAACACAGTGC-3′，反义引物序列为: 5′-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3′，产物长度为211 bp; RAC2正义引物序列为:5′-TCATCTGCTTCTCCCTCGT-3′,反义引物序列为: 5′-GATGGTGTCCTTGTCGTCC-3′,产物长度为143 bp。提取细胞总RNA；cDNA合成；PCR 反应；反应结束后取5 μL 产物,1%琼脂糖凝胶电泳检测。

收集细胞，加入DCFH-DA充分混匀，常温避光反应50 min，洗涤细胞3次，重悬细胞，37 ℃条件下水浴10 min,流式细胞仪分析荧光强度，激发波长488 nm，发射波长530 nm。

细胞裂解：分别收集各组细胞，加入裂解液，冰上裂解，获细胞总蛋白。蛋白变性，电泳，转膜；封闭，孵一抗，洗膜，孵二抗，洗膜后，化学发光剂检测蛋白质印迹，薄层扫描仪测定印迹区带的光密度值。

收集细胞，预冷PBS重悬，离心。用75%乙醇固定细胞，加碘化丙啶(PI)，避光振荡混匀，DNA含量低于2n的细胞百分数为凋亡细胞百分率。

采用SPSS 19.0统计分析软件，Student′t-test法进行差异显著性分析，数值用x±s表示。

MTT实验结果显示，DADS以剂量依赖方式抑制这3种细胞的生长活性，DADS作用HL-60、K562、Raji细胞的IC₅₀值结果也表明，相同浓度的DADS对K562细胞、HL-60细胞的生长抑制作用明显强于对Raji细胞的生长抑制作用(P < 0.05)。

流式细胞术检测凋亡细胞百分率结果显示，DADS能诱导人白血病HL-60细胞、K562细胞以及Raji细胞凋亡。相同浓度DADS作用上述3种细胞，Raji凋亡细胞百分率明显低于HL-60细胞和K562细胞(P < 0.05)。

DCFH-DA染色后，流式细胞术检测细胞荧光强度结果显示，3.0、6.0、12.0 mg·L^-1 DADS作用上述3种细胞8 h后，HL-60细胞、K562细胞的荧光强度呈浓度依赖性增加，但在24.0 mg·L^-1 DADS作用下，荧光强度稍有下降。相同浓度DADS作用Raji细胞，细胞内荧光强度明显低于HL-60细胞和K562细胞(P < 0.05)。

RT-PCR、Western blot分析结果显示：6.0 mg·L^-1 DADS 作用HL-60细胞和K562细胞24 h后，较未处理组相比，Rac2的表达均明显上调(P < 0.05)；而12.0 mg·L^-1 DADS作用Raji细胞24 h后，较未处理组相比，Rac2的表达却明显下调(P < 0.05)。

本研究表明，首先，DADS作为一种有潜力的抗肿瘤药物，不仅能抑制HL-60细胞、K562细胞以及Raji细胞的活性和增殖，同时能诱导这3种细胞凋亡，且DADS对HL-60细胞、K562细胞的抑制增殖能力和诱导凋亡能力明显强于Raji细胞人白血病HL-60细胞凋亡。其次，在DADS诱导3种细胞凋亡的过程中均有ROS的增加，NADPH氧化酶的活化是DADS诱导HL-60细胞、K562细胞凋亡过程ROS的主要来源，而不是DADS诱导Raji细胞凋亡过程中ROS的主要来源。当然，DADS诱导肿瘤细胞凋亡作用效果以及具体机制还有待于进一步研究。