2.江苏省中医药研究院,江苏南京210028;
.南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室,江苏南京210023
2.Jiangsu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210028,China;
3.Jiangsu Key Laboratory for High Technology Research of TCM Formulae,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,China
“十八反”则告诫人们，甘遂(Euphorbia kansui,EK)与甘草(Glycyrrhiza uralensis,GU)相对立不宜伍用。但有学者认为，反药同用能相反相成，产生较强的功效。故一直以来，甘遂与甘草组合在临床上仍有广泛的应用[1, 2, 3]。近年来，中药用药的安全性问题越来越受到重视，阐明“反”的机制，已成为中医药理论自身发展的必然要求。
药物相互作用中最常见的原因是CYP450的诱导和抑制[4, 5]。中药虽然成分复杂，但效应成分多数仍要通过CYP450酶代谢，或对其产生诱导或抑制，从而影响其他药物的代谢或产生药物相互作用。目前，甘遂与甘草合用对CYP450影响的文献报道，由于采用酶的来源、孵化条件、探针药物等不同，使得不同文献报道的数据没有可比性，也没有统一的结论。所以，有必要进行体内、体外相结合的实验研究，使结果相互印证。
1 材料与方法 1.1 材料非那西丁、对乙酰氨基酚、奥美拉唑(OPZ)购于中国药品生物制品检定所； 5’-羟基奥美拉唑(5’-OHOPZ)购于凯氏(上海)科技有限公司；氯唑沙宗(CZX)购于东京化成工业株式会社；6’-羟基氯唑沙宗(6’-OHCZX)购于多伦多化学品公司；甘草水提液、甘遂醇提液由南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室提供。甘遂及甘草分别以0.25%的CMC-Na溶液配制成浓度为1 mL含有1 g生药的混悬液。
1.2 方法 1.2.1 实验动物与分组健康♂ Sprague-Dawley大鼠，体质量180~200 g，由上海西普尔-必凯实验动物中心提供。实验分3批进行，每批大鼠随机分为4组，分别为正常对照组、甘遂组、甘草组及甘遂与甘草合用组。
1.2.2 甘遂与甘草合用对非那西丁、OPZ和CZX在大鼠体内药代动力学行为的影响按组别灌胃给予上述提取物，甘遂组及甘草组均为10 g生药·kg-1，甘遂与甘草合用组为20 g生药·kg-1。连续灌胃给予各组提取物10 d，每天1次。于d 11，禁食过夜的3批大鼠分别于尾静脉给予非那西丁(20 mg·kg-1)、OPZ(20 mg·kg-1)和CZX(20 mg·kg-1)，于眼底静脉丛按时间点取血，供HPLC分析[6, 7, 8] 。
1.2.3 非那西丁、OPZ、CZX在肝微粒体的体外代谢研究实验动物分组方法及给药剂量同步骤“1.2.1 及1.2.2”，连续给药10 d，采用差速离心法制备肝微粒体[9]。将非那西丁、OPZ、CZX分别与各处理组肝微粒体进行体外共温孵，测定温孵后对乙酰氨基酚、5’-OHOPZ及6’-OHCZX的生成量，用于评价CYP1A2、CYP2C19和CYP2E1的活性。
1.2.4 数据分析实验数据以x±s表示，采用Student’s t-test或Newman-Keuls方差分析。
2 结果 2.1 甘遂与甘草合用对非那西丁、OPZ和CZX在大鼠体内药代动力学行为的影响甘遂单用组及合用甘草组对乙酰氨基酚的AUC0-120分别为(312.4±25.65)、(320.4±41.38) mg·min·L-1，均高于正常对照组[(254.5±33.65) mg·min·L-1，P < 0.05)]。
甘遂单用组及合用甘草组5’-OHOPZ的AUC0-120分别为(42.94±6.06)、(28.46±4.64) mg·min·L-1，均低于正常对照组[(121.6±13.55) mg·min·L-1，P < 0.01]。
甘遂与甘草合用组6’-OHCZX的生成速率与正常对照组无差异。
2.2 非那西丁、OPZ及CZX在各组大鼠肝微粒体的代谢甘遂单用及与甘草合用组微粒体中，对乙酰氨基酚的生成速率分别为(75.08±5.44) nmol·min-1·g-1及(66.03±4.94) nmol·min-1·g-1，均高于正常对照组[(36.87±1.78) nmol·min-1·g-1，P < 0.01)]，提示甘遂与甘草合用可诱导CYP1A2的活性。
甘遂与甘草合用组微粒体中，5’-OHOPZ的生成速率为(44.62±2.70) nmol·min-1·g-1，低于正常对照组[(64.98±6.95) nmol·min-1·g-1，P < 0.01]和甘遂单用组[(62.21±2.94) nmol·min-1·g-1，P < 0.01]。提示甘遂与甘草合用可抑制CYP2C19的活性。
甘遂单用组及合用甘草组6’-OHOPZ的生成速率与正常对照组无差异。
3 讨论改变药物代谢最常见的原因是CYP酶的诱导和抑制，酶的诱导可增加生物转化率、降低药物的浓度，表现为药物的作用降低，若形成活性药物则可增加药物的毒性；而酶的抑制可增加药物的浓度，延长药理作用时间，引起毒性反应发生率增加[10]。
本实验结果表明，甘遂与甘草合用能诱导CYP1A2的活性，而且这种诱导作用强于单用。这可能会加速甘遂中某些活性成分代谢活化而致毒；甘遂与甘草合用能够抑制CYP2C19的活性，且合用对CYP2C19活性的抑制程度高于单用。因此，合用可能会使甘遂中某些由CYP2C19代谢的毒性成分产生蓄积，从而导致毒性增加。这些都是相反作用的体现，可能是甘遂不能与甘草合用的原因之一，但仍需进一步实验证据支持。
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