成纤维细胞生长因子同源性因子(fibroblast growth factor homologous factors,FHFs)属于一类特殊的FGF亚家族，最近因发现其可调节电压依赖性钠通道而倍受关注^{[1, 2, 3]}。FHFs包括四种亚型： FGF11~FGF14，每种亚型又包含不同的空间剪接体。前期的研究显示FHFs在神经组织中有亚型特异性的表达，其异常可能与某些神经系统疾病的发生有关^[4]。我们最近的研究结果发现，FHFs在鼠类心室肌组织也有特异性表达，以FGF13亚型为主，且可通过调节钠通道而影响兴奋性的传导^[5]。但目前关于FHFs在人心脏不同部位中的具体表达特征和作用仍不清楚。本实验利用实时定量PCR技术详细测定了人心房和心室肌中FHFs 不同亚型mRNA的表达特征，此研究将为进一步发现FHFs不同亚型在人心脏中所具有的重要作用提供前提和实验基础。

心肌标本取自河北省人民医院心脏外科，已取得了患者的同意并签署了知情同意书，并经伦理道德委员会审查通过。这些患者均为非心衰患者，年龄在25~65岁之间，男、女各4例，其中右室流出道狭窄4例，缺血性心肌病4例。这些患者做心脏手术时，作为手术常规操作的一部分，须去除心房或心室内局部肌肉组织以建立手术操作的通道，以此去除的局部心肌组织作为实验标本，液氮保存后迅速提取RNA。

人心肌组织置于匀浆器中，加TRIzol裂解液(Invitrogen,美国)，冰浴研磨，然后用标准的RNA提取程序提取RNA^[5]，保存于-80℃冰箱中。

按照反转录试剂盒程序(PrimeScript^tm RT reagent Kit，TaKaRa，日本)将RNA进行反转录；以得到的cDNA为模板，按照qPCR(SYBR Premix Ex Taq Ⅱ，TaKaRa，日本)标准反应体系，在qPCR仪(iCycler iQ，Bio-Rad，美国)进行反应，引物序列见Tab1。每个反应体系重复测定3次，采用以下程序进行：95℃ 30 s,95℃ 5 s,60℃ 30 s,72℃ 30 s,72℃ 30 s，重复45个循环。数据分析方法为2^-△△Ct法。以GAPDH为内参，以水和未加转录酶的cDNA为模板的反应做阴性对照组。

Table 1 Primers used in qPCR to test FHFs isoforms expression

表选项

为验证人FHFs各亚型引物的特异性，分别以FHFs各亚型质粒DNA为模板，测定了各引物在PCR反应中所致产物的条带大小与预期产物大小相比较，结果显示产物的实际大小与预期大小相一致，证明引物的特异性高，适用于后续的qPCR实验。

人心房肌中提取mRNA，转录得到cDNA，并以此为模板，利用qPCR技术，测定FHFs各亚型mRNA在人心房肌中相对表达量。结果显示，在所有FHFs亚型中，FGF12B为主要表达亚型(101%±6%)，其余亚型仅为其表达量的4%或更低。

从人心室肌中提取mRNA，经转录合成互补的cDNA，利用实时qPCR技术，以cDNA为模板，测定FHFs各亚型mRNA在人心室肌中相对表达量。结果显示，在所有FHFs亚型中，以FGF12B的表达占优(100%±20%)，FGF13Y表达约为FGF12B的15.8%±9.0%，FGF13VY表达约为FGF12B的10.0%±6%，其余亚型表达量均低于FGF12B表达量的1%。

本实验研究了FHFs mRNA在人类心脏不同组织中的表达特征，发现在人心房和心室肌中均以FGF12B为主要表达亚型，此外，在人心室肌中，FGF13也有相对较高的表达。

尽管我们前期的研究发现FHFs mRNA在成年大、小鼠心室肌中以FGF13表达为主，而且可与钠通道Nav1.5和钙通道Cav1.2在细胞内有共定位特征，并调节这些通道的功能^{[5, 6]}，但关于FHFs在人类心脏不同部位的表达特征是本研究领域试图回答的一个重要问题。钠通道在心肌电活动中具有重要作用，其异常与多种心律失常发生有关^[7]。本实验提示研究人心肌不同部位中FGF12B和FGF13对影响相应离子通道以及心肌兴奋性、传导性将非常重要，这将为揭示其潜在的病理生理学意义提供重要实验基础。