女贞子(Fructus Ligustri Lucidi,FLL)，木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait的干燥成熟果实，是中医常用的固本扶正药物，始载于《神农本草经》，具有滋阴清热、滋补肝肾、明目乌发等功效。在我国女贞子作为中药治疗疾病已有2000多年的历史，是传统补肾中药中用于治疗老年人骨质疏松症的有效成分。由于女贞子独特的生物作用，在传统养生食疗中就有女贞决明子汤、女贞参枣粥和女贞子酒等[1]。
钙代谢是骨骼发育必不可少的重要因素，它受多种因子影响，是体内极为复杂的一种生命活动过程。近年来，国内外学者对女贞子进行了大量研究，发现女贞子可直接促进骨形成[2]，且有研究显示，女贞子提取物能够增加钙吸收率，降低骨钙丢失[3, 4]。目前，关于女贞子及其提取物对钙代谢调控的研究较少，本文主要对女贞子的主要化学成分及药理作用，尤其是对钙代谢平衡的调控作用作一综述，为中药女贞子的进一步开发利用及其治疗钙代谢相关疾病的研究提供理论基础。
1 女贞子主要化学成分及药理作用 1.1 女贞子主要化学成分女贞子含有多种化学成分，主要有三萜类、黄酮类、裂环环烯醚萜类和对羟基苯乙醇苷类化合物，以及多糖、氨基酸、脂肪酸、挥发油、色素、矿物质等[5]，其中萜类和苯乙醇苷类含量较高，且药效活性较为集中的成分。萜类主要包括脂溶性的齐墩果酸、熊果酸和它们的衍生物，以及水溶性的特女贞苷、女贞苷等母核基本相同、活性相似的环烯醚萜类化合物[6]。苯乙醇苷类化合物则是一类以β-葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷。
1.2 女贞子药理作用研究现代药理研究发现，女贞子具有治疗肝炎、高血脂症、糖尿病，提高机体免疫力、抗炎抑菌、抗衰老及抗肿瘤等作用。目前，相关研究主要集中于女贞子中含量较高且药效较明显的齐墩果酸、熊果酸上，它们具有多种生物活性，如肝保护作用、抗氧化活性、抗炎活性、抗微生物活性、抗肿瘤活性等[7]。许多研究表明[8]，核转录因子Nrf2信号通路是生物体内抗氧化反应的核心途径之一，它可以诱导抗氧化因子基因表达，抑制炎症反应，抑制氧化应激反应。熊果酸和齐墩果酸均可介导Nrf2信号通路，提高抗氧化酶活性进而刺激抗氧化因子合成，并通过抑制肝脏炎症因子TNF-α、IL-6的产生来防止肝损伤[9, 10]。细胞实验显示[11]，齐墩果酸可通过调节miR-122/Cyclin G1/MEF2D信号通路，抑制肺癌细胞增殖而起到抗癌的作用。此外，熊果酸还能够介导胰岛素的分泌和葡萄糖的吸收，调节血糖平衡[12]。
2 女贞子及其化合物对PTH-Vitamin D-Ca的调控作用钙是动物体内含量最多同时也是最重要的矿物元素之一，它的动态平衡由摄入、吸收和排泄决定。在体内，钙代谢主要受到了包括甲状旁腺激素（parathyroid hormone,PTH）、活性维生素D[1,25-(OH)2D3]在内的钙调激素的调节。钙吸收过程主要在小肠，尤其是在远端小肠中进行，约70%~80%的摄入钙会被吸收[13]。肠道中的钙吸收受多个钙转运蛋白的介导[14]，包括TRPV6、CaBP-9k、PMCA1b，其中TRPV6介导肠钙的摄取，而后与CaBP-9k结合从管腔运至基底膜外侧，最后通过PMCA1b排出至血循环，该过程由1,25-(OH)2D3/VDR信号介导。Zhang等[15]对老年雌性大鼠进行女贞子给药处理后，发现动物体内血清PTH和1,25-(OH)2D3水平明显升高，小肠、肾脏CaBPs和维生素D受体（VDR）表达也明显增加。因此，女贞子可通过调节钙调激素水平和增加钙转运相关蛋白的表达来促进钙吸收、减少钙排泄[16]。
2.1 女贞子促进维生素D活化维生素D的活化形式1,25-(OH)2D3对于调节血钙平衡具有重要作用。在动物实验中，Lyu等[17]发现摄入等量的维生素D后，女贞子给药组血清25-(OH)D水平明显提高，可能与女贞子提高25-羟化酶的活性或上调其表达有关。Feng等[18]研究表明，与对照组相比，FLL提取物明显上调肾脏1α-OHase表达水平，从而提高大鼠血清1,25-(OH)2D3水平，并促进肠钙的吸收。因此，女贞子对钙代谢的调控与其上调肾脏1α-OHase表达的生物学作用有关。
女贞子调控肾脏1-OHase表达的作用可能与其所含化合物齐墩果酸和熊果酸有关。转化生长因子(TGF-β)是一种多功能的细胞因子，与多种疾病的发生密切相关。肾脏中的TGF-β可抑制近端肾小管上皮细胞(proximal renal tubular epithelial cells,PETC)的生成与增殖，而近端肾小管上皮细胞是肾脏1-OHase的主要来源，是1,25-(OH)2D3形成的主要场所[19]。有研究指出[20]，熊果酸是TGF-β的拮抗剂，它能够抑制TGF-β的表达且阻止其与受体结合，进而促进PETC的增殖，最终使得1-OHase合成增加。Dong等[21]也证实，女贞子可通过诱导肾脏1-OHase的表达和PETC的活性提高血清1,25-(OH)2D3水平。
2.2 女贞子提高血清PTH水平PTH是维持血钙正常的重要激素之一。Dong等[22]的实验结果显示，女贞子治疗可明显提高血清钙和血清PTH水平，并明显减少尿钙损失。Zhang等[23]研究还发现，女贞子醇提物给药后，肾脏钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)表达明显下调，这很好的解释了女贞子对尿钙排泄的抑制作用。CaSR作为一种细胞外钙离子浓度的感受器，对钙调激素如PTH的分泌起着关键作用。因此，女贞子也可能通过调节CaSR的表达，影响血清PTH水平进而调节钙代谢。
此外，血清PTH也受血清钙水平、1,25-(OH)2D3水平的反馈调节。低血钙会在短时间内刺激PTH的分泌，而高血钙则会抑制PTH产生并促进其在甲状旁腺细胞内的降解[24]。有研究表明[25]，女贞子提取物对血清PTH分泌的调节可能与其改变甲状旁腺细胞对血清钙和血清1,25-(OH)2D3水平的敏感性有关。
2.3 女贞子调控其它钙代谢相关因子成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor 23，FGF-23)是由包括成骨细胞在内的骨细胞所产生的一种参与维生素D和磷酸盐代谢平衡的有效调节器，它对骨代谢也有十分重要的作用[26]。PTH可直接或者间接地通过促进1,25-(OH)2D3产生来刺激FGF-23生成。研究发现[15]，女贞子醇提物可明显提高血清FGF-23水平，这可能与血清PTH水平的升高有关。FGF-23对1,25-(OH)2D3也有负反馈调节作用，即FGF-23可通过激活MEK/ERK1/2信号通路调控肾脏1-OHase转录，进而降低血清1,25-(OH)2D3水平，起到减轻维生素D中毒，维持血钙动态平衡的作用[27, 28]。因此，FGF-23在女贞子对PTH-Vitamin D-Ca的调控中起着重要作用。
3 女贞子及其化合物对骨代谢的调控女贞子不仅可以通过调节钙代谢平衡间接调控骨代谢，还能够直接对骨吸收和骨形成进行调控，使其维持动态平衡。体外培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)经女贞子提取物处理后，其成骨分化能力增强，而成脂分化能力减弱[29]。此外，女贞子还能够明显提高BMSCs 的OPG/RANKL比值，抑制破骨细胞的形成[29]。
多种骨量减少类疾病的发生都与RANKL信号表达增强所导致的过度骨吸收有关，所以下调RANKL下游信号对于治疗骨量丢失相关疾病有较好效果。齐墩果酸作为女贞子有效成分之一，可明显抑制RANKL引起的破骨细胞分化，并阻止体内炎症性骨损失，其作用机制与PLCγ2-Ca2+-NFATc1信号通路密切相关[30]。齐墩果酸除了能够抑制破骨细胞分化形成而防止骨质流失，还可刺激体外培养BMSCs的成骨分化，其作用机制可能与Notch信号通路Adam17、Aph1a、Aph1b、Numb的表达有关[31]。在皮质酮致骨质疏松动物模型中，齐墩果酸明显逆转成骨分化基因Alpl、Bmp6，Wnt信号通路Btrc等表达，发挥促进BMSCs成骨分化的作用[32]。
4 女贞子复方制剂对骨代谢的作用中医理论认为，“肾藏精、生髓、主骨，为先天之本”，肾虚为骨质疏松的主要病因，所以，补肾中药对预防和治疗骨质疏松症有重要作用。
体外实验和临床研究均显示，作为一种重要的补肾阴中药，女贞子对骨质疏松症有较好的防治作用。二至丸是由女贞子和墨旱莲两味中药组成的传统中药制剂，主要用于补益肝肾、滋阴补血、强筋健骨[33]。Zhang等[34]发现，二至丸在体外可通过促进成骨细胞增殖和抑制破骨细胞分化来调节骨代谢，保护骨组织。Leung等[35]在体外培养BMSCs时，发现复方制剂ELP(由补骨脂、女贞子、淫羊藿按2 ∶ 8 ∶ 10构成)可促进BMSCs增殖，并通过增加碱性磷酸酶活性和基质钙矿化刺激其向成骨细胞分化。此外，去卵巢大鼠经由女贞子、淫羊藿、黄芪组成的复方中药治疗后，血钙水平提高，尿钙排泄减少，骨生物力学性能得以改善[36]。
Liu等[37]也发现，对于维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型，女贞子、淫羊藿联合治疗可通过抑制骨吸收与骨形成降低骨的高转化率，同时还能提高骨生物学特性，增加骨矿物质含量。
5 结语作为一种传统的固本扶正药物，女贞子资源丰富、价格低廉、药效明确、毒副作用较小，是极具开发前景的药食同源药材。有研究发现，女贞子对老年人和绝经后妇女骨质疏松症有较好防治作用，这与它能够调控体内血钙平衡有重要关系。综上所述，女贞子及其化合物对骨矿代谢有重要的调控作用，然而，关于女贞子调控骨与矿物质代谢的分子作用机制报道较少，还需进一步系统性地深入研究。
| [1] | 罗世炜. 女贞子的研究与开发[J].农村经济与科技, 2010,5:140-1. Luo S W. Research and development of Fructus Ligustri Lucidi[J]. Rural Economy Sci, 2010,5:140-1. |
| [2] | Li G, Zhang X A, Zhang J F, et al. Ethanol extract of Fructus Ligustri Lucidi promotes osteogenesis of mesenchymal stem cells[J]. Phytother Res, 2010,24(4):571-6. |
| [3] | Zhang Y, Lai W P, Leung P C, et al. Effects of Fructus Ligustri Lucidi extract on bone turnover and calcium balance in ovariectomized rats[J]. Biol Pharm Bull,2006,29(2):291-6. |
| [4] | 程敏, 王庆伟, 刘雪英, 等. 女贞子治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究[J].中国药理学通报, 2013,29(2):229-33. Cheng M, Wang Q W, Liu X Y, et al. Treatment with FLL for osteoporosis in ovariectomized rats[J]. Chin Pharmacol Bull, 2013,29(2):229-33. |
| [5] | 黄新苹, 王武朝. 中药女贞子的化学成分研究进展[J].国际药学研究杂志, 2011,1:47-51. Huang X P, Wang W C. Chemical constitutents of Ligustrum lucidum fruits:research advances[J]. J Int Pharm Res, 2011,1:47-51. |
| [6] | 黄晓君, 殷志琦, 叶文才, 沈文斌. 女贞子的化学成分研究[J].中国中药杂志, 2010,35(7):861-4. Huang X J, Yin Z Q, Ye W C, Shen W B. Chemical constituents from fruits of Ligustrum lucidum[J]. Chin J Chin Mater Med, 2010,35(7):861-4. |
| [7] | Liu J, Zheng L, Ma L, et al. Oleanolic acid inhibits proliferation and invasiveness of Kras-transformed cells via autophagy[J]. J Nutr Biochem, 2014,25(11):1154-60. |
| [8] | Liu J, Wu K C, Lu Y F, et al. Klaassen NRF2 protection against liver injury produced by various hepatotoxicants[J]. Oxid Med Cell Longev, 2013,2013:305861. |
| [9] | Liu J, Wang X, Liu R, et al. Oleanolic acid co-administration alleviates ethanol-induced hepatic injury via Nrf-2 and ethanol-metabolizing modulating in rats[J]. Chem Biol Interact, 2014,221:88-98. |
| [10] | Ma J Q, Ding J, Zhang L, Liu C M. Protective effects of ursolic acid in an experimental model of liver fibrosis through Nrf2/ARE pathway[J]. Clin Res Hepatol Gastroenterol, 2015,39(2):188-97. |
| [11] | Zhao X, Liu M, Li D. Oleanolic acid suppresses the proliferation of lung carcinoma cells by miR-122/Cyclin G1/MEF2D axis[J]. Mol Cell Biochem, 2015,400(1-2):1-7. |
| [12] | Castro A J, Frederico M J, Cazarolli L H, et al. The mechanism of action of ursolic acid as insulin secretagogue and insulinomimetic is mediated by cross-talk between calcium and kinases to regulate glucose balance[J]. Biochim Biophys Acta, 2015,1850(1):51-61. |
| [13] | Christakos S, Dhawan P, Porta A, et al. Vitamin D and intestinal calcium absorption[J]. Mol Cell Endocrinol, 2011,347(1-2):25-9. |
| [14] | Christakos S. Recent advances in our understanding of 1,25-dihydroxyvitaminD(3) regulation of intestinal calcium absorption[J]. Arch Biochem Biophys, 2012,523(1):73-6. |
| [15] | Zhang Y, Lai W P, Leung P C, et al. Improvement of Ca balance by Fructus Ligustri Lucidi extract in aged female rats[J]. Osteoporos Int, 2008,19(2):235-42. |
| [16] | Zhang Y, Dong X L, Leung P C, et al. Fructus Ligustri Lucidi extract improves calcium balance and modulates the calciotropic hormones level and vitamin D-dependent gene expression in aged ovariectomized rats[J]. Menopause, 2008,15(3):558-65. |
| [17] | Lyu Y, Eng X, Zhao P, et al. Fructus Ligustri Lucidi (FLL) ethanol extract increases bone mineral density and improves bone properties in growing female rats[J]. J Bone Miner Metab, 2014,32(6):616-26. |
| [18] | Feng X, Lyu Y, Wu Z, et al. Fructus ligustri lucidi ethanol extract improves bone mineral density and properties through modulating calcium absorption-related gene expression in kidney and duodenum of growing rats[J]. Calcif Tissue Int, 2014,94(4):433-41. |
| [19] | Yoshimura H, Sugawara K, Saito M, et al. In vitro TGF-beta1 antagonistic activity of ursolic and oleanolic acids isolated from Clerodendranthus spicatus[J]. Planta Med, 2003,69(7):673-5. |
| [20] | Murakami S, Takashima H, Sato-Watanabe M, et al. Ursolic acid, an antagonist for transforming growth factor (TGF)-beta1[J]. FEBS Lett, 2004,566(1-3):55-9. |
| [21] | Dong X L, Zhang Y, Favus M J, et al. Ethanol extract of Fructus Ligustri Lucidi increases circulating 1,25-dihydroxyvitamin D3 by inducing renal 25-hydroxyvitamin D-1α hydroxylase activity[J]. Menopause, 2010,17(6):1174-81. |
| [22] | Dong X L, Cao S S, Gao Q G, et al. Combination treatment with Fructus Ligustri Lucidi and Puerariae radix offsets their independent actions on bone and mineral metabolism in ovariectomized rats[J]. Menopause, 2014,21(3):286-94. |
| [23] | Zhang Y, Diao T Y, Wang L, et al. Protective effects of water fraction of Fructus Ligustri Lucidi extract against hypercalciuria and trabecular bone deterioration in experimentally type 1 diabetic mice[J]. J Ethnopharmacol, 2014,158:239-45. |
| [24] | Silver J, Kilav R, Naveh-Many T. Mechanisms of secondary hyperparathyroidism[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2002,283(3):F367-76. |
| [25] | Dong X L, Zhao M, Wong K K, et al. Improvement of calcium balance by Fructus Ligustri Lucidi extract in mature female rats was associated with the induction of serum parathyroid hormone levels[J]. Br J Nutr, 2012,108(1):92-101. |
| [26] | Quarles L D. Skeletal secretion of FGF-23 regulates phosphate and vitamin D metabolism[J]. Nat Rev Endocrinol, 2012,8(5):276-86. |
| [27] | Chanakul A, Zhang M Y, Louw A, et al. FGF-23 Regulates CYP27B1 transcription in the kidney and in extra-renal tissues[J]. PLoS One, 2013,8(9):e72816. |
| [28] | Ranch D, Zhang M Y, Portale A A, et al. Fibroblast growth factor 23 regulates renal 1,25-dihydroxyvitamin D and phosphate metabolism via the MAP kinase signaling pathway in Hyp mice[J]. J Bone Miner Res, 2011,26(8):1883-90. |
| [29] | Ko C H, Siu W S, Lau C P, et al. Osteoprotective effects of Fructus Ligustri Lucidi aqueous extract in aged ovariectomized rats[J]. Chin Med, 2010,5:39. |
| [30] | Kim J Y, Cheon Y H, Oh H M, et al. Oleanolic acid acetate inhibits osteoclast differentiation by downregulating PLCγ2-Ca2+-NFATc1 signaling, and suppresses bone loss in mice[J]. Bone, 2014,60:104-11. |
| [31] | Bian Q, Liu S F, Huang J H, et al. Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro[J]. Menopause, 2012,19(2):225-33. |
| [32] | 卞琴, 黄建华, 杨铸, 等. 三种补肾中药有效成分对皮质酮致骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞基因表达谱的作用[J].中西医结合学报, 2011,9(2):179-85. Bian Q, Huang J H, Yang Z, et al. Effects of active ingredients in three kidney-tonifying Chinese herbal drugs on gene expression profile of bone marrow stromal cells from a rat model of corticosterone-induced osteoporosis[J]. J Chin Integr Med, 2011,9(2):179-85. |
| [33] | Cheng M, Wang Q, Fan Y, et al. A traditional Chinese herbal preparation, Er-Zhi-Wan, prevent ovariectomy-induced osteoporosis in rats[J]. J Ethnopharmacol, 2011,138(2):279-85. |
| [34] | Zhang H, Xing W W, Li Y S, et al. Effects of a traditional Chinese herbal preparation on osteoblasts and osteoclasts[J]. Maturitas, 2008,61(4):334-9. |
| [35] | Leung P C, Siu W S. Herbal treatment for osteoporosis:a current review[J]. J Tradit Complement Med, 2013,3(2):82-7. |
| [36] | 张立苹. 用SAP, DXA及骨生物力学测定观察复方中药对去卵巢大鼠骨质疏松模型的疗效[D]. 北京中医药大学, 2003. Zhang L P. The effect of new formula prevents osteoporosis of ovariectomized rat measured by SPA, DXA, and bone biochemical properties[D]. Beijing University of Chinese Meditine, 2003. |
| [37] | Liu R H,Kang X,Xu L P, et al. Effects of the combined extracts of herba epimedii and fructus Ligustri Lucidi on bone mineral content and bone turnover in osteoporotic rats[J]. BMC Complement Altern Med, 2015,15:112. |