2. 贵州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;
3. 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心, 贵州 贵阳 550004
2. Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics, Guiyang 550004, China;
3. Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM,Ministry of Education, Guiyang 550004, China
参芎葡萄糖注射液是由丹参和盐酸川芎嗪配伍组成的中药注射剂，临床用于冠心病心绞痛等缺血性血管疾病的治疗[1]。结合国家SFDA《关于开展中药注射剂安全性再评价工作的通知》，为评价参芎葡萄糖注射液安全性，本文参照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》、《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》和有关文献[2, 3]对其过敏性、刺激性、溶血性以及异常毒性进行了研究，为做好参芎葡萄糖注射液的安全性再评价工作奠定基础。
1 材料 1.1 试药与试剂参芎葡萄糖注射液(规格100 ml：盐酸川芎嗪100 mg，丹参相当于丹参素20 mg，贵州景峰注射剂有限公司提供，批号20130979，20131104，20131211)，参芎葡萄糖浓溶液(规格100 ml：盐酸川芎嗪1800 mg，丹参相当于丹参素360 mg，贵州景峰注射剂有限公司提供，批号20131103)，卵蛋白(Sigma公司，批号A5253)，5%葡萄糖溶液(贵州科伦药业有限公司，批号B130321)。
1.2 实验动物日本大耳白兔，体质量2.5～3.0 kg； SD大鼠，体质量180～220 g；豚鼠，体质量300～400 g；KM小鼠，体质量18～22 g；贵阳医学院动物中心提供，使用许可证号：SCXK(黔)2012-001。
2 方法[2, 3] 2.1 主动全身过敏试验取豚鼠40只，随机分4组，阴性对照组(5%葡萄糖溶液)、阳性对照组(0.5%卵蛋白，2.5 mg/只)、参芎葡萄糖浓溶液高剂量组(盐酸川芎嗪30 mg·kg-1，丹参素6 mg·kg-1)、参芎葡萄糖浓溶液低剂量组(盐酸川芎嗪15 mg·kg-1，丹参素3 mg·kg-1)。腹腔注射相应药物致敏，各0.5 ml，共注射3次。然后将其均分为2组，分别在末次注射后第14日和第21日，由足背静脉注射相应药物各1 ml，检验受试物的过敏反应。
2.2 被动皮肤过敏试验取8只大鼠，随机分成4组，分组同“主动全身过敏试验”。腹腔注射相应药物致敏，制备含IgE的血清。另取40只大鼠，同前随机分成4组。取上述含IgE的血清，用生理盐水稀释为1 ∶ 2、1 ∶ 8，分别注射于各组大鼠去毛各点。48 h后，各组尾静脉注射进行激发。30 min后处死动物，剪下背部皮肤测量蓝斑大小，并测定蓝斑OD值，判断过敏情况。
2.3 血管刺激性试验取日本大耳白兔4只，每只白兔右侧耳缘静脉注射参芎葡萄糖浓溶液，左侧耳缘静脉注射等容积5%葡萄糖溶液做阴性对照，给药体积2.5 ml·kg-1，每天1次，连续5 d。末次给药后48 h对动物和注射部位进行肉眼观察，处死2只动物，取注射部位血管和周围组织进行组织病理学检查。剩下2只动物继续观察14 d后再处死，同上进行组织病理学检查。
2.4 肌肉刺激性试验取日本大耳白兔4只，每只白兔右侧股四头肌处注射参芎葡萄糖浓溶液1 ml；另侧相应部位注射等容积5%葡萄糖溶液作为对照。48 h后处死家兔，解剖股四头肌，观察注射部位肌肉刺激反应。并剪取肌肉组织进行病理组织学检查。
2.5 溶血性试验日本大耳白兔心脏取血20 ml，制备2%的红细胞混悬液。取洁净试管分别加入红细胞混悬液、5%葡萄糖溶液、蒸馏水和参芎葡萄糖注射液，在37℃恒温水浴中温育3 h，观察溶血与红细胞凝聚现象。
2.6 异常毒性检查取小鼠15只，分为3组。依法(《中国药典》2010 年版一部附录XIII E)检查，分别尾静脉注射3个批号参芎葡萄糖注射液各0.5 ml，观察记录小鼠即时反应及72 h内动物所发生的异常反应及死亡情况。
3 结果 3.1 主动全身过敏试验阳性对照组豚鼠均出现明显的过敏反应，过敏反应呈极强阳性。参芎葡萄糖浓溶液高、低剂量组和阴性对照组豚鼠均未出现过敏反应。
3.2 被动皮肤过敏试验参芎葡萄糖浓溶液高、低剂量组和阴性对照组大鼠背部皮肤均未见明显蓝斑。而阳性对照组出现明显蓝斑。
3.3 血管刺激性试验给药过程中，家兔左耳和右耳注射局部血管均未见明显红肿现象，组织病理学检查结果显示各组家兔注射部位血管及周围血管组织结构完整，未见组织变性、坏死、炎细胞浸润、血栓及脓肿形成等病变。
3.4 肌肉刺激性试验家兔给药部位股四头肌未见明显异常。病理组织学检查结果显示对照侧和给药侧注射部位肌纤维呈均匀分布，未见充血、水肿、炎细胞浸润。
3.5 溶血性试验蒸馏水阳性对照组溶液完全溶血，溶液呈红色透明，其余各组上清液无色澄明，红细胞全部下沉，经振摇后红细胞能均匀分散。
3.6 异常毒性检查全部小鼠在给药后72 h内未见死亡，也未见明显生理异常表现。
4 讨论2009年国家食品药品监督管理局以“完善研究”、“规范提高”、“淘汰落后”为原则，在全国启动了中药注射剂安全性再评价工作。参芎葡萄糖注射液为90年代末研制的中药注射剂，由于受当时科研水平和技术条件的限制，该品的生产工艺、质量标准和安全性评价存在欠规范和不完善方面，因此，有必要开展产品的上市后再评价研究。贵州景峰注射剂有限公司现已对参芎葡萄糖注射液生产工艺、质量控制进行了完善提高[4]。本文参照中药、天然药物非临床安全性评价的相关指导原则，进一步开展了该品的安全性试验研究，结果表明本品无过敏性、局部刺激性和溶血性，异常毒性检查也未见异常，说明参芎葡萄糖注射液在其临床使用剂量下是安全的，为临床安全用药提供了理论依据。
| [1] | 陈兴坚,刘建红.参芎葡萄糖注射液的临床应用进展[J].中国实用医药, 2010,(13):247-9. Chen X J, Liu J H. Clinical application of Shenxiong glucose injection[J].China Prac Med, 2010,(13):247-9. |
| [2] | 原欢欢,张继芬,王 琴,等.梓葛冻干粉针的局部刺激性、过敏性、溶血性和急性毒性研究[J].中国药理学通报, 2013,29(6):880-1. Yuan H H, Zhang J F, Wang Q, et al.Focal irritant, allergia, haemolyticus and acute toxicity of Catalpol and Puerarin for injection[J]. Chin Pharmacol Bull, 2013,29(6):880-1. |
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