研究表明，茶多酚具有很强的消除有害自由基、抗衰老等多种药理作用[1]，茶多酚临床治疗白癜风具有较明显的效果，但其各类组分在临床治疗白癜风所发挥的作用还未见报道。
1 材料与方法 1.1 动物C57BL/6(B6)小鼠，体质量(20±2)g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。
1.2 主要药品与试剂H2O2、EGCG均购自美国Sigma公司，槲皮苷、山奈苷均购自中国药品生物制品检定所，没食子酸(中国食品药品检定研究院)，CD8+T细胞分离抗体(Miltenyi，德国) ，MTS细胞增殖试剂盒(Promega，美国),CD3单抗、CD28单抗(eBioscience，美国)
1.3 实验方法 1.3.1 CD8+T淋巴细胞分离培养及药物成分干预小鼠脾脏制成单细胞悬液，经CD8+T细胞Biotin-Antibody Cocktail、MicroBead Cocktail孵育分离出CD8+T细胞。调整细胞密度为1×109·L-1，除空白及阴性对照孔，各孔均预先用5 mg·L-1的CD3抗体、CD28抗体包被。药物成分干预孔分别加入不同浓度的4种组分，各样品作3个复孔。
1.3.2 MTS法检测CD8+T淋巴细胞增殖各药物成分处理96 h后测A490。
1.3.3 IFN-γ测定IFN-γ抗体和CD3及CD28活化抗体铺板，4℃过夜，按每孔5×104细胞加入CD8+T细胞、药物处理48 h，最后加入IFN-γ结合抗体和显色剂，计数。
1.3.4 MTS法测黑素细胞活性鼠永生化黑素细胞(B10BR细胞)常规培养，调整细胞为5×103/孔，除空白对照组仅加入培养液，其余各孔加入药液培养24 h。加入H2O2 24 h后测A490。
2 结果 2.1 4种成分对CD8+T细胞增殖能力的影响槲皮苷有轻微的抑制作用，山奈苷显示较明显促进作用，没食子酸和EGCG均有明显的抑制效果(P<0.05)。
2.2 EGCG、没食子酸对CD8+T细胞分泌IFN-γ的影响EGCG在0.3 mg·L-1时，IFN-γ分泌量较阳性对照无明显变化，1、3、10 mg·L-1时，分泌量明显减少；没食子酸随着其作用浓度的不断升高，IFN-γ分泌逐渐减少。
2.3 药物预处理对H2O2损伤细胞的保护作用H2O2单独处理后黑素细胞活性为57.3%±4.2%，明显低于空白对照组(P<0.05)；4种成分预处理均能提高黑素细胞的活性 (P<0.05)。
3 讨论机制研究表明，茶多酚可对抗CD8+T细胞对黑色素细胞的杀伤，对黑素细胞有一定的保护作用[2]。我们的结果发现，同样浓度下没食子酸对CD8+T细胞分泌IFN-γ的抑制比EGCG更强，由于CD8+T细胞只有在活化状态下才分泌IFN-γ，此表明EGCG和没食子酸能有效抑制CD8+T细胞的活化。EGCG、槲皮苷、没食子酸均在10 mg·L-1时达到最大抗氧化作用，但随着浓度升高，EGCG抗氧化能力变化不大，后二者处理的细胞活性明显下降，提示槲皮苷与没食子酸在大于10 mg·L-1会对黑素细胞产生毒性作用，而EGCG安全范围较大。鉴于EGCG在茶多酚中含量较高，又有较强的抗氧化与抑制CD8+T细胞活化增殖的作用，可以认为其是茶多酚治疗白癜风的主要有效成分。以上研究结果可为今后应用茶多酚以及EGCG在临床治疗白癜风提供依据和参考。
| [1] | 陈 旭, 胡 园, 李青山, 等. 表没食子儿茶素没食子酸酯对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用[J].中国药理学通报, 2011,27(3):320-4. Chen X, Hu Y, Li Q S, et al. The protective effect of EGCG on hydrogen peroxide induced SH-SY5Y cell injury[J].Chin Pharmacol Bull, 2011,27(3):320-4. |
| [2] | 欧阳杰,吴纪龙,周妙妮,等.茶多酚对CD8+T细胞杀伤白癜风患者黑素细胞的保护作用研究[J].中华皮肤科杂志,2013,46(1):20-3. Ou Y J, Wu J L, Zhou M N, et al.Protective effects of tea polyphenols against the destruction of melanocytes by CD8+T cells from vitiligo patients[J].Chin J Dermatol,2013,46(1):20-3. |