宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，尽管筛查和疫苗接种等预防措施使部分发达国家和地区发病率降低，但全球范围内宫颈癌的发病率依旧呈上升趋势^[1]。研究^[2]显示，原发病灶大小、淋巴结转移和临床分期等因素是宫颈癌患者预后的关键预测因子。然而，中晚期宫颈癌患者即使经过积极治疗，其复发风险依然较高。因此，寻找更精准的预后预测指标和个性化治疗方案是急需解决的问题^[3]。C-X-C基序趋化因子配体8（C-X-C motif chemokine ligand 8，CXCL8），亦被称为白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8），是一种重要的炎性趋化因子，不仅参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等关键生物学过程，还有潜力成为宫颈癌患者预后评估和个性化治疗的新靶点^[4]。本研究通过生物信息学分析与临床验证，探讨CXCL8表达与宫颈癌患者临床特征、短期疗效及预后的关系，以期为宫颈癌患者预后评估和临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法 1.1 生物信息学分析

从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库（https://portal.gdc.cancer.gov/）获取宫颈癌转录组数据及临床信息，从基因型-组织表达（Genotype-Tissue Expression，GTEx）数据库（https://www.gtexportal.org/）获取正常宫颈组织转录组数据。通过GEPIA在线平台（http://gepia.cancer-pku.cn/）分析CXCL8在宫颈癌及正常组织中的表达差异。以中位数为截断值将患者分为CXCL8高表达组和低表达组，使用R（4.4.0）软件进行数据分析，通过timeROC包构建受试者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线并评估CXCL8的预后预测效能，利用ggplot2包进行数据可视化；采用survival包及survfit函数比较CXCL8高表达组和低表达组患者的生存差异。

1.2 临床验证

1.2.1 临床资料

收集2017年1月至2021年12月间新疆医科大学第一附属医院住院的94例宫颈鳞状细胞癌患者的临床资料。纳入标准：（1）已经病理确诊；（2）具备完整的临床资料和石蜡包埋组织样本；（3）以往未进行过抗肿瘤治疗。排除标准：（1）非原发性宫颈癌或合并其他恶性肿瘤；（2）合并严重全身性疾病或一般情况欠佳，存在治疗禁忌。共收集组织标本125个，其中宫颈癌组织94个、癌旁组织31个。本研究获得新疆医科大学第一附属医院医学伦理委员会批准。

1.2.2 治疗方案

根据中国临床肿瘤学会指南（Chinese Society of Clinical Oncology Guidelines，CSCO）^[5]，早期宫颈癌患者主要以手术或手术联合放化疗为主，也可选择根治性放疗或同步放化疗；中晚期以同期放化疗及全身系统性治疗为主。按治疗方案将患者分为2组：放化疗组（单独或联合）、手术±放化疗（辅助或新辅助）组。具体用药方案和剂量按患者情况依据指南推荐制定。

1.2.3 疗效与预后

预后随访主要通过电话随访和医院病历信息系统完成，随访截止时间为2024年4月30日。主要终点事件为总生存期（overall survival，OS），为从确诊日期至死亡或末次随访时间。疗效评估依据实体肿瘤疗效评价标准进行，在抗肿瘤治疗的前两个周期后首次评估^[6]，评估结果包括：完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、疾病稳定（stable disease，SD）和疾病进展（progressive disease，PD）。

1.2.4 实验方法

1.2.4.1 主要试剂

多克隆抗体CXCL8（27095-1-AP）购自武汉三鹰生物技术有限公司，无水乙醇购自天津富宇精细化工有限公司，苏木素-伊红染液、EDTA抗原修复液（pH9.0）、山羊血清工作液、3%过氧化氢、抗体稀释液购自北京中杉金桥生物技术有限公司，中性树胶、PBS磷酸盐缓冲液购自北京索莱宝科技有限公司。

1.2.4.2 免疫组织化学检测

组织标本经10%中性甲醛固定，常规脱水、浸蜡及石蜡包埋。制备3~5 μm厚切片，60 ℃烘箱中烘烤，自然冷却至室温。切片依次在二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中脱蜡，梯度乙醇脱水处理。采用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）微波加热15 min进行抗原修复，自然冷却后PBS冲洗。依次进行3%过氧化氢孵育15 min阻断内源性过氧化物酶活性，10%山羊血清封闭30 min，滴加CXCL8一抗（27095-1-AP，1∶200稀释）4 ℃孵育过夜。次日PBS冲洗后滴加二抗（山羊抗兔），37 ℃孵育40 min，DAB显色液2~5 min。切片经苏木素复染1 min，梯度乙醇脱水和二甲苯透明处理，晾干后用中性树胶封片。

由2位经验丰富的病理医师采用双盲法对免疫组织化学结果进行独立、准确判读。采用半定量积分法评估CXCL8表达水平。（1）阳性细胞占总细胞的百分率评分：0分，阳性细胞 < 5%；1分，阳性细胞5%~ < 25%；2分，阳性细胞25%~ < 50%；3分，阳性细胞50%~ < 80%；4分，阳性细胞≥80%。（2）阳性细胞染色强度评分：0分，无色（阴性）；1分，淡黄色（弱）；2分，棕黄色（中等）；3分，棕褐色（强）。评分=阳性细胞百分率评分×染色强度评分，0~4分为CXCL8低表达，> 4分为CXCL8高表达。

1.3 统计学分析

采用SPSS 26.0软件及R 4.4.0软件进行统计分析，计量资料采用x ± s表示，2组间比较采用独立样本t检验。计数资料采用率（%）表示，2组间比较采用χ²检验或Fisher确切概率法。生存分析采用Kaplan-Meier法，组间比较采用log-rank检验；用ROC曲线评估CXCL8的预后预测效能，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 CXCL8在宫颈癌组织和正常组织中的表达

GEPIA在线分析结果显示，与正常宫颈组织相比，宫颈癌组织中CXCL8表达显著升高（log₂FC=3.827，P < 0.05），见图 1。

2.2 CXCL8表达水平与宫颈癌患者预后的关系

ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）是衡量模型预测性能的重要指标，其值越接近1，表明模型的判别能力越强。基于TCGA数据库的ROC曲线分析结果显示，1年、3年、5年总生存期预测的AUC值分别为0.722、0.673、0.697（图 2A），表明CXCL8表达水平对宫颈癌患者OS具有良好的预测能力（AUC值均 > 0.6）。GEPIA在线分析结果显示，CXCL8表达水平与患者OS显著相关，高表达组患者生存期较低表达组缩短（HR = 2.9，P < 0.001，图 2B），提示CXCL8高表达与宫颈癌患者不良预后密切相关。

2.3 宫颈癌组织中CXCL8蛋白的表达

免疫组织化学检测结果显示，宫颈癌组织中，CXCL8蛋白分布广泛，肿瘤细胞的细胞膜、细胞质及细胞核均有CXCL8蛋白表达；而癌旁组织中，CXCL8蛋白表达较少（图 3）。与癌旁组织（13%）相比，宫颈癌组织CXCL8表达（68%）显著增加（χ²=26.435，P < 0.000 1）。

2.4 CXCL8表达与患者临床特征、疗效及预后的关系

截至随访时间，死亡17例，存活77例。患者CXCL8表达水平与临床特征、预后相关性分析结果显示，CXCL8表达与患者年龄、临床分期及淋巴结转移不相关（均P > 0.05），但与治疗方案（P < 0.001）及近期疗效（P = 0.017）相关，CXCL8高表达患者近期疗效较差。见表 1。

结果显示，94例患者中位OS为36.09（20.17~54.20）个月。CXCL8低表达患者中位OS为44.17（31.68~65.71）个月，CXCL8高表达患者中位OS为31.61（15.46~47.64）个月，2组OS比较差异有统计学意义（Z = -2.69，P = 0.007）。进一步Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，CXCL8高表达患者预后较低表达组患者差（P < 0.05），见图 4。

3 讨论

宫颈癌是女性恶性肿瘤致死的主要原因之一，对女性的生命健康有着重要影响，其预后一直以来备受关注^[7]。早期宫颈癌患者积极手术治疗后效果较好，能够显著延长生存期并提高生活质量。但多数宫颈癌患者发现时已是中晚期，需要全身联合局部治疗来改善患者预后^[8-9]。

CXCL8在生理状态下难以检测，当其水平发生迅速变化时，通常是由外部刺激引起的；炎症刺激往往与肿瘤的发生有着密不可分的关系^[10-11]。近年来，已证实CXCL8在乳腺恶性肿瘤和结肠恶性肿瘤中高表达^[12-13]。CXCL8高表达通过促进肿瘤血管生成、增强遗传多样性、加速肿瘤增殖和转移、促进免疫逃逸以及增加多药耐药性等方式，促进了肿瘤进展。多种肿瘤细胞中证实CXCL8与肿瘤细胞侵袭转移具有相关性。在脑恶性肿瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、甲状腺癌和血液系统恶性肿瘤患者的血清或组织中，CXCL8表达与肿瘤大小、浸润深度、诊断和分期呈正相关^[14-16]。近年来已有研究表明CXCL8在子宫颈癌的发生、发展过程中有促进作用；但目前研究仍处于起步阶段，关于CXCL8的作用机制、临床应用价值及预后评估等方面认识不足，研究结果亦存在差异和争议^[17-19]。

本研究生物信息学分析结果显示，与正常组织比较，CXCL8在宫颈癌组织中的表达显著上调（P < 0.05）；CXCL8高表达与宫颈癌患者的不良预后显著相关，有较高的预后预测价值，Kaplan-Meier生存曲线分析也进一步支持此结果。因此，CXCL8可能是宫颈癌患者预后评估的潜在分子标志物。

临床分析结果显示，CXCL8高表达患者更多采用放化疗方案，而手术治疗比例相对较低，这可能与高表达患者肿瘤侵袭性更强、临床分期更晚有关。此外，CXCL8高表达组患者近期疗效显著低于低表达组，提示CXCL8表达水平与患者治疗反应性密切相关。预后相关性分析表明，CXCL8高表达组患者预后较差。以上结果表明，CXCL8可能对宫颈癌患者的治疗选择和预后评估具有一定的指导意义，有望在临床实践中为治疗方案制定和预后判断提供量化指标，但这些关联的因果关系和潜在机制仍需进一步研究论证。

综上所述，本研究通过生物信息学分析和临床验证，证实CXCL8在宫颈癌组织中高表达，且高表达与患者不良预后和生存期缩短密切相关。然而，CXCL8在宫颈癌中的具体作用机制、与治疗耐药的因果关系仍需进一步深入研究。