2024, Vol. 53文章信息
- 刘邦卿, 李剑锋, 刘晓辉, 张劲男, 胡亚丽
- LIU Bangqing, LI Jianfeng, LIU Xiaohui, ZHANG Jinnan, HU Yali
- 血清糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对表皮生长因子受体扩增伴随突变的非小细胞肺癌预后的预测作用
- Predictive value of serum glycoprotein non-metastatic melanoma protein B in patients with non-small cell lung cancer accompanied by epidermal growth factor receptor amplification with mutation
- 中国医科大学学报, 2024, 53(2): 127-131
- Journal of China Medical University, 2024, 53(2): 127-131
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文章历史
- 收稿日期：2023-04-21
- 网络出版时间：2024-01-10 16:28:35
引用本文 |
2. 唐山市人民医院头颈外科, 河北 唐山 063001
2. Department of Head and Neck Surgery, Tangshan People's Hospital, Tangshan 063001, China
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC) 是一种高发的恶性肿瘤[1]。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR) 是NSCLC临床研究中最受关注且最重要的靶点[2]。近年来，临床相关资料表明EGFR在多种肿瘤中过表达，EGFR的扩增伴随突变是主要的突变类型之一[3]，激活EGFR能够引起肿瘤细胞内的酪氨酸活化及其受体磷酸化，促进肿瘤细胞增殖、分化以及血管生成等过程，加速肿瘤细胞的恶性进展[4]。
研究[5-6]表明，酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-tyro-sine kinase inhibitor，EGFR-TKI) 在EGFR基因突变的NSCLC治疗中效果显著。此外，越来越多的研究[7]表明NSCLC患者的EGFR基因突变类型和患者对EGFR-TKI的应答情况显著相关。随着肿瘤患者临床治疗中EGFR-TKI的利用率日益增高，耐药问题成了亟需解决的难题。挖掘EGFR-TKI耐药标志物和筛选适用EGFR-TKI治疗的NSCLC患者，实现个体化治疗，是改善临床治疗效果、延长患者生存期的关键。
糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B (glycoprotein non‐metastatic melanoma protein B，GPNMB)是一种高度糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，作为肿瘤细胞生长的调节基因而备受关注[8]。在不同的肿瘤中，GPNMB高表达都被证实能够促进肿瘤的恶性进展，例如，GPNMB的表达水平越高，乳腺癌细胞的增殖迁移侵袭能力越强，神经胶质瘤和小细胞肺癌患者的生存时间越短，生存状况越差[9-11]。最新研究[12]指出，GPNMB的表达水平可能和胃肠道恶性肿瘤患者EGFR-TKI治疗后的耐药有关。也有研究[13]表明，GPNMB在EGFR突变NSCLC细胞中表达水平的变化与NSCLC的进展相关，但系统性的研究尚未见报道。
本研究选择将EGFR-TKI作为一线治疗的EGFR基因扩增伴随突变的NSCLC患者作为研究对象，检测其血液中游离GPNMB的表达水平，探讨其与患者耐药及预后的相关性。
1 材料与方法 1.1 研究对象选取2018年3月至2019年9月唐山市人民医院收治的143例病理确诊为NSCLC患者的临床资料。利用ctDNA检测和FISH法筛选EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者，排除资料不全和合并其他肿瘤者，最终纳入55例患者作为观察组。患者均以EGFR-TKI (奥希替尼) 作为一线治疗，且未接受过局部治疗。收集患者血液样本和临床资料。此外，随机收集同期本院体检中心的健康人群血液样本作为对照组。所有研究对象均签署了知情同意书，本研究获得医院伦理委员会批准。
1.2 血液中游离GPNMB检测2组血液样本均置于EDTA管并于-80 ℃保存。使用人GPNMB的ELISA商品化试剂盒(美国ELH-Osteoactivin，RayBiotech公司)对血液样本中游离的GPNMB进行定量分析，操作均按照试剂盒说明书进行。
1.3 随访对观察组患者进行随访。记录患者应用EGFR-TKI的疗效。本研究通过疗效评价患者的耐药情况，根据实体瘤疗效评价标准[14]，EGFR-TKI临床疗效分为部分缓解(partial response，PR)、疾病稳定(stable disease，SD) 和疾病进展(progressive disease，PD)。收集患者出院后的随访资料，记录患者的无进展生存时间(progression free survival，PFS)，将患者的PFS作为本研究的主要终点事件。
1.4 统计学分析采用SPSS 26.0和Graphpad Prism 8.4.2软件进行统计分析。计数资料以例(率) 表示，组间比较采用Fisher精确概率法或χ2检验。计量资料首先进行正态和方差齐性检验，所有正态分布的计量资料以x±s表示，组间比较采用双侧t检验。患者PFS的生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank检验，采用多因素Cox回归分析筛选影响患者生存的独立危险因素。P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 EGFR扩增伴随突变NSCLC患者血液中游离的GPNMB的表达水平血液中游离的GPNMB表达水平对照组为(1.49±0.61) ng/mL，观察组为(3.09±0.88) ng/mL。根据观察组中GPNMB表达水平的中位值(3.13 ng/mL)，将EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者分为高表达组(n = 27) 和低表达组(n = 28)。随后，对GPNMB表达和EGFR扩增伴随突变NSCLC患者临床病理信息的相关性进行探究。结果显示，在所有EGFR扩增伴随突变NSCLC患者中，女性(32例)居多，33例患者存在吸烟史，临床分期均为Ⅲ期~Ⅳ期，组织分型以肺腺癌(37例)为主。GPNMB高表达组和低表达组年龄、性别、体质量指数(body mass index，BMI)、ECOG评分、临床分期、组织分型以及吸烟史比较均无统计学差异(均P > 0.05)，见表 1。
| Item | High expression group (n = 27) | Low expression group (n = 28) | P |
| Age (year) | 57(41-86) | 57(37-87) | 0.356 |
| Sex [n (%)] | 0.587 | ||
| Male | 10(37.04) | 13(46.43) | |
| Female | 17(62.96) | 15(53.57) | |
| Body mass index (kg/m2) | 24.66±2.85 | 24.14±4.53 | 0.612 |
| History of smoking [n (%)] | 0.787 | ||
| Never | 11(40.74) | 13(46.43) | |
| Ever | 16(59.26) | 15(53.57) | |
| ECOG score [n (%)] | 0.964 | ||
| 0 | 5(18.52) | 6(21.43) | |
| 1 | 17(62.96) | 17(60.71) | |
| 2 | 5(18.52) | 5(17.86) | |
| Clinical staging [n (%)] | 0.768 | ||
| Ⅲ | 7(25.93) | 9(32.14) | |
| Ⅳ | 20(74.07) | 19(67.86) | |
| Tumor classification [n (%)] | 0.775 | ||
| Adenocarcinoma | 19(70.37) | 18(63.29) | |
| Non-adenocarcinoma | 8(29.63) | 10(35.71) | |
| EGFR-TKI therapeutic efficacy [n (%)] | 0.016 | ||
| PR | 4(14.81) | 7(25.00) | |
| SD | 7(25.93) | 15(53.57) | |
| PD | 16(59.26) | 6(21.43) |
2.2 GPNMB表达水平和EGFR扩增伴随突变NSCLC患者耐药的相关性
高表达组中4例为PR，7例为SD，16例为PD；低表达组中7例为PR，15例为SD，6例为PD。2组疗效比较有统计学差异(P = 0.016)，低表达组患者使用EGFR-TKI治疗疗效更优，见表 1。2组患者的客观反应率(objective response rate，ORR) 比较，差异有统计学意义(4/27 vs. 7/28，P < 0.01)。患者血液中游离GPNMB高表达可能提示耐药程度更强，对于EGFR-TKI治疗的敏感性更差。
2.3 GPNMB表达水平和EGFR扩增伴随突变NSCLC患者预后的相关性观察组随访时间为1.2~18.7个月，平均11.58个月。随访结果显示，GPNMB高表达组患者的中位PFS为7.38个月(95%CI：0.9~12.5)，GPNMB低表达组患者的中位PFS为9.92个月(95%CI：5.3~14.7)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示，GPNMB高表达组患者的PFS显著短于低表达组(P = 0.032)，见图 1。加入GPNMB表达对患者进行分层生存分析，结果显示，女性(P = 0.009)、非腺癌(P < 0.001)、从未吸烟(P = 0.006)、ECOG评分为1 (P < 0.001)、临床分期为Ⅳ期(P = 0.009) 患者的PFS和GPNMB表达水平显著相关。
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| 图 1 不同GPNMB表达NSCLC患者的PFS曲线 Fig.1 PFS curve of NSCLC patients with different GPNMB expression |
2.4 GPNMB表达水平是EGFR扩增伴随突变NSCLC患者无进展生存的独立危险因素
通过Kaplan-Meier法进行患者生存分析，采用log-rank检验所有自变量与因变量的关系，结果显示，性别(P = 0.008)、吸烟史(P = 0.009)、ECOG评分(P = 0.002)、临床分期(P = 0.009)、组织类型(P = 0.002) 是患者生存可能的影响因素。随后，将GPNMB表达分组和性别、组织类型、吸烟史、ECOG评分以及临床分期等因素纳入多因素Cox回归分析。结果显示，血液中游离的GPNMB高表达(HR = 4.029，95%CI：1.942~8.358，P < 0.001) 是影响EGFR扩增伴随突变NSCLC患者无进展生存的独立危险因素。见表 2。
| Factor | HR | 95%CI | P |
| ECOG score (0) | 1 | - | - |
| ECOG score (1) | 11.770 | 3.820-36.262 | < 0.001 |
| ECOG score (2) | 106.394 | 25.117-450.687 | < 0.001 |
| Sex (female) | 1 | - | - |
| Sex (male) | 1.614 | 0.798-3.263 | 0.183 |
| Clinical staging (Ⅲ) | 1 | - | - |
| Clinical staging (Ⅳ) | 4.194 | 1.933-9.099 | < 0.001 |
| History of smoking (never) | 1 | - | - |
| History of smoking (ever) | 1.160 | 0.608-2.212 | 0.652 |
| Tumor classification (adenocarcinoma) | 1 | - | - |
| Tumor classification (non-adenocarcinoma) | 0.978 | 0.455-2.098 | 0.954 |
| GPNMB expression (low) | 1 | - | - |
| GPNMB expression (high) | 4.029 | 1.942-8.358 | < 0.001 |
3 讨论
NSCLC患者的血液样本含有多种游离蛋白[15-16]。NAKASHIMA-NAKASUGA等[17]使用ELISA方法检测结直肠癌患者血清样本中LOX-1的蛋白表达，发现LOX-1与结直肠癌的预后显著相关。本研究应用ELISA方法检测了EGFR扩增伴随突变NSCLC患者血清中的GPNMB蛋白表达，发现GPNMB表达与患者预后以及耐药性显著相关。
HAN等[13]研究发现GPNMB与肿瘤的EGFR突变呈正相关，且在EGFR L858R突变的NSCLC细胞中过表达。GPNMB糖基化可以激活突变的EGFR，开启下游STAT3信号通路，促进NSCLC细胞转移。本研究也发现EGFR扩增伴随突变NSCLC患者血清GPNMB显著高表达。根据GPNMB表达水平对EGFR扩增伴随突变NSCLC患者进行分组，并评价GPNMB与耐药性的关系。发现GPNMB高表达与EGFR-TKI的疗效显著相关。以上研究表明，GPNMB与肿瘤EGFR突变有关，且在EGFR扩增伴随突变NSCLC患者中高表达，并增强其耐药性。
GPNMB与肿瘤患者的预后密切相关[18]。FENG等[10]发现GPNMB与胶质瘤不良预后密切相关。MA等 [16]研究证实GPNMB的过表达预示着上皮性卵巢癌的不良预后。本研究对EGFR扩增伴随突变NSCLC患者进行生存分析，发现血液中游离GPNMB高表达患者的PFS显著缩短。进一步分层生存分析和多因素Cox回归分析发现，GPNMB高表达不利于患者无进展生存，且是影响EGFR扩增伴随突变NSCLC患者无进展生存的独立危险因素。以上结果表明，血液中游离GPNMB表达水平可作为EGFR扩增伴随突变NSCLC患者预后标志物；GPNMB高表达与患者预后不良显著相关，并对患者的生存状况产生显著影响。
综上所述，EGFR扩增伴随突变NSCLC患者血液中游离GPNMB高表达，其高表达与患者的耐药程度增强密切相关，是潜在的耐药标志物。与此同时，本研究也证实GPNMB高表达和患者的预后不良显著相关，是影响患者生存的独立危险因素。本研究样本量较少，患者仅来自同一医院，未来应纳入更多样本量进行多中心深入研究。
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