白纹伊蚊(Aedes albopictus)，又称“亚洲虎蚊”，是浙江省登革热的唯一传播媒介^[1]。浙江省白纹伊蚊主要以卵越冬，据相关文献报道，其滞育卵可在干燥寒冷的环境中存活较长时间，使得登革病毒在其体内得到保存并随着幼蚊孵化而得到复制，待雌蚊羽化又可通过吸血将病毒传播给人群^[2-3]。研究表明，由于白纹伊蚊滞育卵可经交通工具携带传播，不仅能使该蚊实现远距离扩散，同时其自身携带的病毒也可快速扩散至其他地区^[3]。因此，对白纹伊蚊越冬卵及其携带的登革病毒进行监测，对于登革热防控具有重要的指导意义。2018年8-9月，宁波市发生了登革热本地暴发疫情，累计报告本地感染病例55例，主要分布在海曙区(47例)^[4-5]。2018年12月至2019年3月，我们对该旧疫点白纹伊蚊越冬卵阳性率及其登革病毒携带情况进行了调查。

采样区域选择宁波市海曙区、北仑区、慈溪市和宁海县，其中海曙区为宁波市2018年登革热病例主要分布区域(图 1)。选择海曙区(旧疫点)核心区、警戒区和监控区进行采样^[6]，在北仑区、慈溪市和宁海县3个未出现登革热病例的区域，随机选择村或者社区进行采样作为对照，于2018年12月至2019年3月在以上区域采集不同积水容器的积水和积泥收集白纹伊蚊卵。积水容器主要包括废旧轮胎、暂时性容器(瓶、罐、桶、可存水废弃物等)、植被性容器(竹洞、树洞、石穴、花盆、水生植物等)和固定性容器(水池、明渠、大型水缸等)。

图 1 浙江省宁波市白纹伊蚊越冬卵现场采集分布情况 Figure 1 Distribution map of field collection sites for overwintering Aedes albopictus eggs in Ningbo, Zhejiang province

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将采集的积水和积泥转移至1 L烧杯中，标记并添加适量去氯水，在温度(26±2) ℃，湿度(75±10)%条件下孵化，观察2周，对幼蚊及其成蚊进行种类鉴定^[7]，记录孵化情况以计算白纹伊蚊越冬卵阳性率(孵化出白纹伊蚊的积水或积泥份数/总积水或积泥份数)，并收集白纹伊蚊成蚊，置于-80 ℃保存，用于登革病毒核酸检测。

将上述收集的白纹伊蚊成蚊每组20~30只，采用EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司，RN28)提取总RNA；采用登革病毒通用型核酸检测试剂盒(江苏硕世生物科技有限公司，JC30101 N)进行实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)。具体操作按照试剂盒说明书进行。

采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。其中，单因素分析采用χ²检验，筛选出有统计学意义的因素〔组内两两比较采用Bonferroni校正法，P < 0.008 (0.05/6)为差异有统计学意义〕；多因素分析采用logistic回归模型，分析影响白纹伊蚊越冬卵阳性率的环境因子。P < 0.05为差异有统计学意义。

共采集样本884份，最终孵化出白纹伊蚊106份，卵阳性率为11.99%；4个县(市、区)间白纹伊蚊卵阳性率差异有统计学意义(χ²=33.741，P < 0.001)。两两比较结果显示，海曙区白纹伊蚊越冬卵阳性率显著低于慈溪市、宁海县和北仑区(均P < 0.008)，后三者差异无统计学意义(均P > 0.008)。见表 1。

表 1 2019年浙江省宁波市白纹伊蚊越冬卵采集及孵化情况 Table 1 Data about collection and incubation of overwintering Aedes albopictus eggs in Ningbo, Zhejiang province 2019

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海曙区为2018年登革热疫点区域，根据疫情防控区域将样品采集地点划分为核心区、警戒区和监控区，北仑区、慈溪市和宁海县的采样地点统一划分为非疫点。不同区域间白纹伊蚊越冬卵阳性率差异有统计学意义(χ²=31.277，P < 0.001)。两两比较结果显示，疫点核心区的阳性率低于疫点警戒区、监控区和非疫点(均P < 0.008)，疫点警戒区的阳性率低于非疫点(P < 0.008)，疫点警戒区和监控区、疫点监控区和非疫点间差异无统计学意义(均P > 0.008)。见表 2。

表 2 浙江省宁波市不同登革热防控区域白纹伊蚊越冬卵阳性率 Table 2 Positive rates of overwintering Aedes albopictus eggs in different dengue control areas in Ningbo, Zhejiang province

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废旧轮胎、植被性容器、暂时性容器和固定性容器白纹伊蚊卵阳性率分别为22.35%(38/170)、18.24%(31/170)、7.44%(25/336)和5.77%(12/208)，差异有统计学意义(χ²=38.044，P < 0.001)。

经logistic回归模型分析发现，疫点警戒区、疫点监控区和非疫点白纹伊蚊越冬卵阳性率分别是核心区的5.33(95%CI：1.16~24.49)、6.26(95%CI：1.37~28.65)和11.56(95%CI：2.75~48.50)倍；废旧轮胎和植被性容器白纹伊蚊越冬卵阳性率分别是固定性容器的3.59(95%CI：1.79~7.20)和3.77(95%CI：1.82~7.79)倍。见表 3。

表 3 白纹伊蚊越冬卵阳性率影响因素的logistic回归分析 Table 3 Logistic regression analysis of influencing factors for positive rate of overwintering Aedes albopictus eggs

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共检测越冬白纹伊蚊800余只，病毒核酸均为阴性。

本次调查发现，宁波市海曙区、北仑区、慈溪市和宁海县白纹伊蚊越冬卵阳性率为11.99%，低于2015年(23.36%)和2017年(24.96%)宁波市的阳性率^[8-9]。同时结果显示，旧疫点的海曙区越冬蚊卵阳性率不仅显著低于对照点北仑区、慈溪市和宁海县，且疫点核心区的卵阳性率低于警戒区和监控区，与韦凌娅等^[10]在杭州市登革热应急控制后期采用双层叠帐法和BG-trap诱捕器法对核心区、警戒区和监控区成蚊密度监测结果相似(核心区蚊虫密度远低于警戒区和监控区)，这可能与核心区成蚊消杀灭蚊及其布雷图指数控制力度较大有关。上述结果提示，做好疫点白纹伊蚊孳生地清理或灭蚊工作，有助于降低次年的白纹伊蚊种群密度。

对于白纹伊蚊孳生类型调查，四川省2008-2009年蚊媒监测结果显示，在闲置容器、暂时性容器(绿化带、垃圾、小积水)、植被性容器(竹头、树洞、石穴)等7种积水容器中，以废旧轮胎容器指数最高(48.77%)^[11]；于虹等^[12]在北京市2个轮胎厂采集轮胎积水时发现，其白纹伊蚊孳生率高达82.00%；此外，徐友祥和王韶华^[13]在上海市嘉定区室外轮胎内积水和积泥的调查结果也揭示，室外轮胎已成为白纹伊蚊最常见的孳生地之一，其中轮胎积水中白纹伊蚊卵阳性率为52.10%，积泥中白纹伊蚊卵阳性率为56.30%。宁波市2015和2017年越冬蚊调查结果均显示废旧轮胎中白纹伊蚊卵阳性率最高，分别为27.97%和28.87%，本次调查结果亦显示，废旧轮胎的白纹伊蚊卵阳性率(22.35%)较其他孳生类型高，并且随着汽车修理店、废旧轮胎收购站、加工厂、广场、公园以及托幼机构大量废旧轮胎的堆积，为白纹伊蚊孳生提供了有利环境，建议相关部门应加强废旧轮胎的管理，避免因轮胎积水产生大量的白纹伊蚊孳生环境。

本研究未在越冬卵孵化的白纹伊蚊成蚊体内检测出登革病毒，推测有以下几个原因：(1)宁波地区白纹伊蚊自然种群携带登革病毒水平较低。此次检测结果与近年来国内大多数城市一致^{[11, 14-16]}。在热带地区，由于终年高温，全年皆有蚊虫活动，登革病毒可以在“蚊-人-蚊”的循环中不断繁殖、传播，导致登革热频繁暴发流行，但是我国亚热带地区登革热病例的来源主要以输入性为主。目前，广东、云南、贵州、福建等边境省份和近热带地区虽有白纹伊蚊在非流行期间携带登革病毒的报道，但是其携带病毒比率均较低，而其他省市尚未见相关报道^[17-20]。宁波市非登革热自然疫源地，且登革热多为非连续性暴发，本地病例也多散发，因此经应急消杀后白纹伊蚊自然种群中登革病毒携带率本身就很低。(2)虽然登革病毒在自然界中可通过受感染的雌蚊垂直传递给其子代，但是传递率非常低，通常低于1%，且存在传代递减效应^{[17, 21-22]}，而本次检测的蚊虫标本是疫点蚊虫经多次繁殖后通过滞育保留下来的越冬卵，其体内携带病毒的概率更低。(3)病毒很容易失活，蚊体标本的保存方式也会影响登革病毒的检出率^[23]。本次研究中因越冬蚊卵孵化时间不一致，先孵化的蚊虫需低温冷冻保存等待病毒检测，在保存过程中登革病毒可能会被降解。因此，虽然本研究在越冬白纹伊蚊体内未检测到登革病毒，但鉴于登革病毒在自然界中可通过受感染的雌蚊垂直传递给其子代，今后仍需要进一步开展白纹伊蚊带病毒率监测工作。

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