布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌(Brucella)侵入机体引起的传染-变态反应性人兽共患传染病，人主要通过接触染疫动物或其产品感染^[1]。布鲁氏菌引起的全世界范围内流行的人兽共患病，可导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题，严重影响居民健康和畜牧业发展，是危害严重的自然疫源性疾病之一^[2-3]。近年来，全国布病疫情持续、快速上升^[4]，布病引起的突发公共卫生事件频发^[5]。青海省人畜间布病流行也较为严重，20世纪80年代通过综合防治疫情下降至“控制区”标准^[6]，2005-2010年发病率保持在0.02/10万~0.05/10万的较低水平，2011-2019年发病率为0.70/10万~2.72/10万，近几年布病疫情有所回升。现将2017-2019年人间布病流行情况报告如下。

中国疾病预防控制信息系统报告的青海省2017-2019年布病数据，8株疑似布鲁氏菌分离自青海省2017-2019年期间阳性人体血液标本。所有研究对象均知情同意，并签署知情同意书。

根据我国《布鲁氏菌病诊断标准》(WS269-2019)：采用虎红凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和胶体金免疫吸附试验(GICA)检测血液中的布鲁氏菌抗体^[7]，SAT血清滴度≥1:100(++)为阳性结果。虎红凝集抗原、试管凝集抗原试剂由中国疾病预防控制中心(CDC)传染病预防控制所布病室提供，胶体金试剂由广州悦洋生物技术有限公司提供。

用血培养仪(BD)、双向培养瓶培养疑似菌，取出培养液接种在布氏琼脂平板上，37 ℃培养24~48 h，进行布鲁氏菌鉴定。布鲁氏菌鉴定包括菌落染色、形态、生长特性和布鲁氏菌诊断血清凝集试验，菌株鉴定方法包括CO₂需求，能否产生H₂S，A/M血清凝集试验、硫堇和复红的抑菌性试验、噬菌体裂解试验，具体操作步骤见参考文献[8-9]，布鲁氏菌标准参考菌株羊种(M5)、猪种(S2)和牛种(104M)。

细菌基因组DNA的提取，按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明进行(TIANGEN公司)。分子生物学方法采用BCSP31聚合酶链式反应(BCSP31-PCR)和AMOS聚合酶链式反应(AMOS-PCR)^[10-11]。

数据使用Excel 2007软件录入，SPSS 19.0软件进行统计，采用描述流行病学方法分析布病的流行特征。

2017-2019年青海省累计报告布病病例301例，发病率分别为0.45/10万、1.81/10万和2.72/10万，不同年份布病发病率差异有统计学意义(t=16.421，P < 0.05)。季节时间序列显示青海省布病发病呈逐年上升趋势，2017年高峰期在6月，2018年高峰期在8和12月，2019年在6和10月。见图 1。

图 1 2017-2019年青海省布病发病时间分布 Figure 1 Temporal distribution of brucellosis cases in Qinghai province, 2017-2019

图选项

301例病例中，26个县(市、区)排在前3位的分别是门源、都兰和海晏县，分别为45.51%(137/301)、9.97%(30/301)和8.31%(25/301)。

在301例病例中，年龄最小的14岁，最大的78岁。40~岁组发病数最多，占35.22%(106/301)；10岁以下无病例发生。男性病例236例，女性病例65例(表 1)，男女性别比例为3.63:1。

表 1 青海省不同年龄、不同性别人群布病患病情况 Table 1 Prevalence of brucellosis in people with different ages and sexes in Qinghai province

表选项

在301例病例中，农民96例、牧民77例、动物防疫者61例、干部职员38例、其他12例、工人10例、医务人员4例、学生2例、儿童1例，职业分布排在前3位的分别为农民占31.89%，牧民占25.58%，动物防疫者占20.27%。职业人群(牛、羊等家畜养殖，乳、肉、皮等畜产品贩运、屠宰、加工，牲畜交易和兽医)和非职业人群发病分别占88.37%(266/301)和11.63%(35/301)。

301例病例中，感染方式依次为育肥贩卖占35.88%(108/301)，饲养占32.23%(97/301)，动物防疫占20.27%(61/301)，加工占8.64%(26/301)，食源占2.99%(9/301)。

8株菌株中，其中2018年分离2株，2019年分离6株；8株菌株传染源全部为羊，其中4株分离自门源县。8例病例职业均为饲养育肥贩卖，在饲养过程中感染布鲁氏菌。在就诊前2例仅出现发热症状，其余6例症状为发热、乏力、多汗、头晕、头痛、关节疼痛。见表 2。

表 2 2018-2019年青海省8株布鲁氏菌采集情况 Table 2 Collection of 8 Brucella strains in Qinghai province, 2018-2019

表选项

8株疑似布鲁氏菌分离株形态及染色特征、培养特性均与布鲁氏菌完全相同；生长时不需要CO₂，不产生H₂S，在硫堇(1:25 000)和复红(1:50 000)环境中均能生长，噬菌体BK裂解，Tb不裂解，可与布鲁氏菌A血清和M血清凝集，确定为羊种3型布鲁氏菌。见表 3。

表 3 2018-2019年青海省8株布鲁氏菌菌株血清学、病原学实验室检测结果 Table 3 Laboratory results of serology and etiology of 8 Brucella strains in Qinghai province, 2018-2019

表选项

BSCP31-PCR鉴定，8株分离菌株及阳性对照菌株核酸均扩增出布鲁氏菌属的223 bp特异性条带，与阳性对照羊种(M5)、牛种(104M)和猪种(S2)一致，大肠埃希菌阴性对照无条带出现。AMOS-PCR鉴定，结果显示，所有阳性对照羊种(M5)、牛种(104M)和猪种(S2)均出现特异性条带，阴性对照未见扩增，布鲁氏菌分离株中8株扩增均获得731 bp特异性条带，与羊种布鲁氏菌扩增结果一致，判定为羊种布鲁氏菌。

近年来我国布病再度流行，防控形势依然严峻，2000年以后青海省布病疫情与全国一样，报告病例数呈逐年上升，并由高危人群向普通人群扩散^[12]。此外，畜间疫情频发，并有局部暴发，防控形势非常严峻。此次对青海省2017-2019年网络报告的301例病例分析结果得出，2017-2019年发病率分别为0.45/10万、1.81/10万和2.72/10万，青海省人间布病发病呈上升趋势。

季节时间序列显示，2017年6月为发病小高峰，2018年8月为高峰，2019年6、10月为高峰，与产羔、育肥活动有关，因西北地区以冬羔、春羔为主(12月至翌年1月)，选择5-8月龄羔羊进行育肥，4~5个月后上市，这与暴露因素接触方式相对应。

301例病例分布在26个县(市、区)，布病发病呈高度散发状态的同时又呈现一定地域性，主要分布在门源、都兰和海晏县，因这些地区进行牛羊改良肉质(奶质)、种畜杂交改良、育肥贩卖等活动，畜间流通调运频繁，在此产业链条上的从业人员有所增加，重点人群感染率也在持续上升。职业人群和非职业人群发病分别占88.37%和11.63%，职业人群的发病率明显高于非职业人群，与国内多数研究相一致^[13-14]，职业人群感染的方式主要为育肥贩卖、饲养和动物防疫。

2018-2019年在抗体阳性人体血液标本中分离出8株布鲁氏菌，经病原学、分子生物学鉴定为羊种3型，与羊种布鲁氏菌是引起我国人间布病疫情最主要病原菌的报道一致^[15-16]，8例病例全部为饲养育肥贩卖羊为职业，传染源全部为羊(4株菌的传染源羊来自甘肃省、1株菌的传染源羊来自安徽省、2株传染源不详)。近10年来青海省畜产品交易更加频繁，许多未经检疫和患病的牲畜及其制品频繁流通于市场中，说明布病的传染源可以通过家畜的交易和流动促进传播，群众缺乏布病防治知识防护措施不到位，布病在养殖户、牲畜交易、动物防疫职业人群中高发。

布病疫情扩散蔓延的风险在不断增加，此次调查为布病的防控提供了科学依据，提示在加强布病防治宣传，青海省动物疫病预防控制中心加强畜间动物免疫接种的同时，应对省际交汇地区畜牧产品集散地进行重点监管监控。

利益冲突   无