布鲁氏菌病（布病）是《传染病防治法》规定的乙类传染病，由牛、羊等携带的布鲁氏菌感染人，引起变态反应性的人畜共患疾病，在我国流行范围较广，发病区域遍布全国各地，跨地区输入性传播是布病疫情高发的主要原因^[1-2]。本研究对一起输入性疫情进行调查处置，并对分离出的布鲁氏菌株进行分子特征分析。

对患者进行流行病学调查，调查其与动物的接触史、发病过程、临床症状体征及就诊情况等。

参照WS269－2019《布鲁氏菌诊断标准》采集2例患者的静脉血5 ml，注入双相培养瓶中培养，对可疑菌落用生物学方法鉴定^[3]。所有患者均对调查过程知情同意。

用天根生化科技有限公司细菌基因组提取试剂盒提取全基因组DNA，按照试剂盒的说明书进行。

MLVA引物共16对，分别由panel 1和panel 2的8个基因位点组成，引物序列及PCR扩增条件见文献[4]。PCR扩增产物由北京擎科新业生物有限公司进行微卫星测序，再将PCR产物片段长度检测结果，换算出串联重复数，采用BioNumerics（Version 5.0）软件同其他地区分离的布鲁氏菌进行聚类分析，与布鲁氏菌数据库在线比较^[5]。

2例患者常年在甘肃省张掖市山丹马场放羊。2018年12月产羔期间，有30多只母羊发生流产。患者处理流产羔羊时未严格进行个人防护，至2018年3月2例患者前后出现头痛头晕、发烧、多汗、全身关节疼痛等症状，到场区医务室就诊后病情未减轻，之后到青海省地方病预防控制所就诊，诊断为布病急性期。

2例患者血液中均培养出细菌，为革兰阴性小杆菌，噬菌体裂解试验中Bk阳性，Tb、Wb均为阴性，单相特异性血清A和M均凝集，2株菌均被鉴定为羊种布鲁氏菌生物Ⅲ型。

2株布鲁氏菌，16个串联重复序列位点Bruce 06、Bruce 08、Bruce 11、Bruce 12、Bruce 42、Bruce 43、Bruce 45、Bruce 55、Bruce 18、Bruce 19、Bruce 21、Bruce 04、Bruce 07、Bruce 09、Bruce 16和Bruce 30的基因型均为1-5-3-13-2-2-3-2-4-40-8-5-4-4-4-5，MLVA-8基因型为近年来主要流行的优势基因型42型，MLVA-16基因分型显示这2株菌100%的同源。

通过现场流行病学调查，患者因接触流产羔羊而感染布鲁氏菌。此前母羊群曾发生大量流产现象，患者对布病的危害性和严重性认识不足，重视不够，未能及时有效地处置防范畜间布病，自我防范保护意识淡薄是本次感染布病的主要原因。检疫、隔离和淘汰病畜是控制布病传染源的有效措施，个人防护到位可以有效杜绝布病从畜间传向人间^[6-8]。

近年来与青海省相邻的新疆维吾尔自治区（新疆）和甘肃省布病疫情发展迅猛，两省每年的新发病例数均居全国前10位。省际交汇处因畜牧产品大量的集散交易，使得来自疫情严重地区未检疫到位的牛、羊混入整个贩运交易过程中，成为布病扩散流行的主要方式。分离的2株菌与临近省份近年分离的菌株以及青海省历史菌株进行MLVA聚类分析显示，同为近年来流行的优势基因型42型，共享同一基因型，可能同为相近传染源的可能性。通过对疫区菌株MLVA基因型特征分析，可以了解当地流行优势基因型，以期有助于推断布病疫情关联，为布病跨地区传播菌株溯源和布病防控提供技术帮助^[9-11]。

崔步云^[1]调查显示，原来只有内蒙古自治区（内蒙古）的中、东部是布病再度流行的高发区，但是内蒙古、黑龙江、吉林以及内蒙古、山西、河北2个3省交界处的6个市（盟）随后也都成为布病高发区，并且在2006年的疫情报告中，这6个市的病例报告数约占全国病例总数的50%，显示布病的传染源可以通过家畜的交易和流动促进传播。省际交汇地区畜牧产品集散地将成为布病传播的重要节点。近年来青海省在这些省际交汇地区也发生多起输入性引起的布病疫情：海东市养殖户的小男孩因接触从外地采购的育肥羊而感染布病，格尔木市屠宰场职工在宰杀从新疆采购未检疫羊的过程中感染布病^[12-14]，海东市乐都区父子俩去新疆务工（放牧）感染布病。提示在加强布病防治宣传、畜间动物免疫接种的同时，应对省际交汇地区畜牧产品集散地进行重点监管监控^[15]，对牲畜及高危人群进行定期检查，常年监测。