中国媒介生物学及控制杂志  2019, Vol. 30 Issue (6): 716-718

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张娇, 褚梦颖, 王中印, 刘广纯
ZHANG Jiao, CHU Meng-ying, WANG Zhong-yin, LIU Guang-chun
蚤蝇玻片标本制备方法的改进
An improved slide preparation method for scuttle fly
中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(6): 716-718
Chin J Vector Biol & Control, 2019, 30(6): 716-718
10.11853/j.issn.1003.8280.2019.06.030

文章历史

收稿日期: 2019-06-18
网络出版时间: 2019-10-15 9:46
蚤蝇玻片标本制备方法的改进
张娇 , 褚梦颖 , 王中印 , 刘广纯     
辽宁省城市有害生物治理与生态安全重点实验室, 沈阳大学生命科学与工程学院, 辽宁 沈阳 110044
摘要: 目的 解决玻片固定液干燥过快问题,改良固定液配方。方法 为减缓固定液干燥速度,将5 ml甘油加入封片剂,保持湿度;并将原配方50%质量分数葡萄糖溶液5 ml改为3 ml,降低粘度。结果 新的封片剂配方为阿拉伯胶12 g,水合氯醛晶体20 g,冰醋酸5 ml,甘油5 ml,50%质量分数葡萄糖溶液3 ml,蒸馏水30 ml。结论 该封片剂干燥速度适中,适用于我国北方小型昆虫标本制备。
关键词: 蚤蝇    封片剂    玻片制作    
An improved slide preparation method for scuttle fly
ZHANG Jiao , CHU Meng-ying , WANG Zhong-yin , LIU Guang-chun     
Liaoning Key Laboratory of Urban Integrated Pest Mangement and Ecological Security, College of Life Sciences and Bioengineering, Shenyang University, Shenyang 110044, Liaoning Province, China
Abstract: Objective To improve the formula of slide mounting medium, and to solve the problem that the slide mounting medium dries too fast. Methods In order to reduce the drying rate of the slide mounting medium, 5 ml glycerol was added to the medium to maintain the humidity; glucose was reduced from 5 ml (old formula) to 3 ml to reduce the viscosity. Results The new medium formula was as follows:acacia 12 g, chloral hydrate crystal 20 g, glacial acetic acid 5 ml, glycerol 5 ml, 50%w/w glucose syrup 3 ml, and distilled water 30 ml. Conclusion The drying rate of this slide mounting medium is in the moderate range, which is suitable for the preparation of small insect specimens in northern China.
Key words: Scuttle fly    Slide mounting medium    Slide preparation    

蚤蝇(scuttle fly)隶属于双翅目(Dipetera)蚤蝇科(Phoridae),全世界记载295属4 000余种,很多种类在医学和法医学领域有重要意义[1-2]。标本制备是研究形态学、分类学和生态学的必要前提。一般来说,标本的清晰度、制备速度和保存年限是标本制备的3个基本要求,但依据研究内容不同对制备标本要求也有一定差异。

与大多数昆虫一样,针插标本也是蚤蝇收藏的主流方法。但是由于蚤蝇个体很小,大多在3 mm以内,许多特征,如杜氏器(Dufour’s crop mechanism)用体视镜无法观察,同时,许多数据由于形态和角度问题无法测量。因此,制备玻片已成为蚤蝇研究,特别是分类学研究的必要手段[3-4]。永久玻片使用加拿大树胶(Canada balsam)作封片剂是很好的选择,但由于需要一系列的脱水过程,而消耗时间较长。优巴拉尔胶(Euparal)是较好的替代封片剂并在蚤蝇研究中应用[5-6],但清晰度方面不甚理想[7]。Disney[3, 7]对波氏液(Berlese fluid)进行了改进,配制了较为理想的封片剂。考虑到封片剂对湿度较为敏感,以及操作时间的问题,我们经过试验,提出一种改进的蚤蝇标本制片方法和制作技巧。

1 材料与方法 1.1 封片剂的配制

封片剂配方:阿拉伯胶12 g,水合氯醛晶体20 g,冰醋酸5 ml,甘油5 ml,50%质量分数葡萄糖溶液3 ml,蒸馏水30~40 ml。

配制方法:将蒸馏水加入阿拉伯胶中,水浴加热促进其溶解,之后过滤,去除残渣,再依次加入水合氯醛晶体、冰醋酸和甘油,晶体溶解后加入葡萄糖溶液,混匀后即可使用。封片剂应密封静置保存。

在封片剂配制过程中,阿拉伯胶过滤非常重要,如有杂质会影响玻片质量。另外,封片剂中葡萄糖溶液的用量直接影响粘稠度,用量过多会导致封片剂过粘增加操作难度;用量过少会导致封片剂过稀易开裂,影响制片质量。若刚配置完的封片剂有气泡且较稀,可放置一段时间再使用;如若过于粘稠可适当滴加蒸馏水。

1.2 昆虫的解剖

将昆虫标本放入有75%乙醇溶液的培养皿中,并置于解剖镜下,利用镊子和解剖针依次剖下昆虫的右翅,头部,前、中、后足,其中根据需要观察的标本性别不同还可将中胸和腹部分离。解剖时需注意保持标本的完整性。如本文所用到的蚤蝇科昆虫,雌性杜氏器位于第1腹节内部是分类鉴定的重要特征,而其只有在将中胸和腹部分离后才能清晰呈现。

1.3 封片

首先在载玻片适当位置滴上1滴封片剂,用解剖针或镊子将解剖好的标本局部器官放入封片剂中,在解剖镜下进行整姿后,将盖玻片(ϕ0.9 mm)倾斜45°缓慢盖到标本之上,避免气泡。在同一载玻片上依次放头部,胸腹左翅,右翅,前足,中足,后足,用解剖针调整标本方位,加盖玻片。封片剂凝固后在显微镜下观察和拍照(图 1)。制片时要根据标本大小和厚度确定封片剂的用量,如翅膀较薄用量要少半滴为宜,而头部相对较厚可先滴1滴,晾60 s后再补1滴。为了标本能够长期保存,待封片剂凝固后可在周围刷1圈透明指甲油。

注:A.头部正面观;B.第2触角嵌套于第3触角节;C.皮下感器;D.雄性身体侧面观;E.雄性尾器;F.中足;G.雌性腹部;H.翅膀;I.前足;J.后足跗节;K.后足 图 1 蛆症异蚤蝇
1.4 干标本的还软

对于干标本,则需用还软液还软,还软时间由标本干燥程度、存放时间、存放环境决定,将干标本放入配制好的还软液中,以标本关节可用解剖针挑动为准,取出标本放置于75%乙醇溶液中保存或直接制成玻片标本。

Barber还软液配方:95%乙醇溶液330 ml,蒸馏水330 ml,乙酸乙酯150 ml,乙醚120 ml,冰醋酸0.5~1 ml。

2 结果

改良后的封片剂配方:阿拉伯胶12 g,水合氯醛晶体20 g,冰醋酸5 ml,甘油5 ml,50%质量分数葡萄糖溶液3 ml,蒸馏水30~40 ml。有效减缓了封片剂的干燥速度。

3 讨论

阿拉伯胶会受到环境湿度的影响,相对湿度越大封片剂越不易凝固。英国属于温带海洋性气候,平均湿度常年在70%以上,极端天气甚至会达到100%。为了保证标本能尽快干燥,在封片剂中加入5 ml葡萄糖溶液保证粘度。Disney封片剂配方在较湿润地区是非常有效的。而相对湿度较低的我国北方,遇到的问题是封片剂干燥过快,来不及标本展姿。因此,我们把封片剂中葡萄糖溶液的用量由原来的5 ml改为3 ml以降低粘稠度,并加入5 ml甘油保持湿度,这样,减缓了干燥速度,给标本整姿提供时间,同时标本的透明效果也较好。

参考文献
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Hira PR, Assad RM, Okasha G, et al. Myiasis in Kuwait:nosocomial infections caused by Lucilia sericata and Megaselia scalaris[J]. Am J Trop Med Hyg, 2004, 70(4): 386-389. DOI:10.4269/ajtmh.2004.70.386
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Reibe S, Madea B. Use of Megaselia scalaris (Diptera:Phoridae) for post-mortem interval estimation indoors[J]. Parasitol Res, 2010, 106(3): 637-640. DOI:10.1007/s00436-009-1713-5
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Disney RHL. Scuttle flies Diptera, Phoridae (except Megaselia)[J]. Handb Identif Br Insects, 1983, 10: 1-81.
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Disney RHL. Scuttle flies:the phoridae[M]. London: Chapman and Hall, 1994: xii+467.
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Upton MS. Aqueous gum-chloral slide mounting media:an historical review[J]. Bull Entomol Res, 1993, 83(2): 267-274. DOI:10.1017/S0007485300034763
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Nakayama H. Systematic and morphological evaluations of a new species of Kuenburgia schmitz (Diptera:Phoridae) with remarkable asymmetry of the male genitalia, including a bifurcated left surstylus[J]. Entomol Sci, 2008, 11(2): 179-188. DOI:10.1111/j.1479-8298.2008.00269.x
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Disney RHL. The preservation of small diptera[J]. Entomol Mon Mag, 2001, 137: 155-159.