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文章信息
- 张娇, 褚梦颖, 王中印, 刘广纯
- ZHANG Jiao, CHU Meng-ying, WANG Zhong-yin, LIU Guang-chun
- 蚤蝇玻片标本制备方法的改进
- An improved slide preparation method for scuttle fly
- 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(6): 716-718
- Chin J Vector Biol & Control, 2019, 30(6): 716-718
- 10.11853/j.issn.1003.8280.2019.06.030
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文章历史
- 收稿日期: 2019-06-18
- 网络出版时间: 2019-10-15 9:46
蚤蝇(scuttle fly)隶属于双翅目(Dipetera)蚤蝇科(Phoridae),全世界记载295属4 000余种,很多种类在医学和法医学领域有重要意义[1-2]。标本制备是研究形态学、分类学和生态学的必要前提。一般来说,标本的清晰度、制备速度和保存年限是标本制备的3个基本要求,但依据研究内容不同对制备标本要求也有一定差异。
与大多数昆虫一样,针插标本也是蚤蝇收藏的主流方法。但是由于蚤蝇个体很小,大多在3 mm以内,许多特征,如杜氏器(Dufour’s crop mechanism)用体视镜无法观察,同时,许多数据由于形态和角度问题无法测量。因此,制备玻片已成为蚤蝇研究,特别是分类学研究的必要手段[3-4]。永久玻片使用加拿大树胶(Canada balsam)作封片剂是很好的选择,但由于需要一系列的脱水过程,而消耗时间较长。优巴拉尔胶(Euparal)是较好的替代封片剂并在蚤蝇研究中应用[5-6],但清晰度方面不甚理想[7]。Disney[3, 7]对波氏液(Berlese fluid)进行了改进,配制了较为理想的封片剂。考虑到封片剂对湿度较为敏感,以及操作时间的问题,我们经过试验,提出一种改进的蚤蝇标本制片方法和制作技巧。
1 材料与方法 1.1 封片剂的配制封片剂配方:阿拉伯胶12 g,水合氯醛晶体20 g,冰醋酸5 ml,甘油5 ml,50%质量分数葡萄糖溶液3 ml,蒸馏水30~40 ml。
配制方法:将蒸馏水加入阿拉伯胶中,水浴加热促进其溶解,之后过滤,去除残渣,再依次加入水合氯醛晶体、冰醋酸和甘油,晶体溶解后加入葡萄糖溶液,混匀后即可使用。封片剂应密封静置保存。
在封片剂配制过程中,阿拉伯胶过滤非常重要,如有杂质会影响玻片质量。另外,封片剂中葡萄糖溶液的用量直接影响粘稠度,用量过多会导致封片剂过粘增加操作难度;用量过少会导致封片剂过稀易开裂,影响制片质量。若刚配置完的封片剂有气泡且较稀,可放置一段时间再使用;如若过于粘稠可适当滴加蒸馏水。
1.2 昆虫的解剖将昆虫标本放入有75%乙醇溶液的培养皿中,并置于解剖镜下,利用镊子和解剖针依次剖下昆虫的右翅,头部,前、中、后足,其中根据需要观察的标本性别不同还可将中胸和腹部分离。解剖时需注意保持标本的完整性。如本文所用到的蚤蝇科昆虫,雌性杜氏器位于第1腹节内部是分类鉴定的重要特征,而其只有在将中胸和腹部分离后才能清晰呈现。
1.3 封片首先在载玻片适当位置滴上1滴封片剂,用解剖针或镊子将解剖好的标本局部器官放入封片剂中,在解剖镜下进行整姿后,将盖玻片(ϕ0.9 mm)倾斜45°缓慢盖到标本之上,避免气泡。在同一载玻片上依次放头部,胸腹左翅,右翅,前足,中足,后足,用解剖针调整标本方位,加盖玻片。封片剂凝固后在显微镜下观察和拍照(图 1)。制片时要根据标本大小和厚度确定封片剂的用量,如翅膀较薄用量要少半滴为宜,而头部相对较厚可先滴1滴,晾60 s后再补1滴。为了标本能够长期保存,待封片剂凝固后可在周围刷1圈透明指甲油。
1.4 干标本的还软对于干标本,则需用还软液还软,还软时间由标本干燥程度、存放时间、存放环境决定,将干标本放入配制好的还软液中,以标本关节可用解剖针挑动为准,取出标本放置于75%乙醇溶液中保存或直接制成玻片标本。
Barber还软液配方:95%乙醇溶液330 ml,蒸馏水330 ml,乙酸乙酯150 ml,乙醚120 ml,冰醋酸0.5~1 ml。
2 结果改良后的封片剂配方:阿拉伯胶12 g,水合氯醛晶体20 g,冰醋酸5 ml,甘油5 ml,50%质量分数葡萄糖溶液3 ml,蒸馏水30~40 ml。有效减缓了封片剂的干燥速度。
3 讨论阿拉伯胶会受到环境湿度的影响,相对湿度越大封片剂越不易凝固。英国属于温带海洋性气候,平均湿度常年在70%以上,极端天气甚至会达到100%。为了保证标本能尽快干燥,在封片剂中加入5 ml葡萄糖溶液保证粘度。Disney封片剂配方在较湿润地区是非常有效的。而相对湿度较低的我国北方,遇到的问题是封片剂干燥过快,来不及标本展姿。因此,我们把封片剂中葡萄糖溶液的用量由原来的5 ml改为3 ml以降低粘稠度,并加入5 ml甘油保持湿度,这样,减缓了干燥速度,给标本整姿提供时间,同时标本的透明效果也较好。
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