蜱作为重要的病媒生物不但种类较多、数量庞大、宿主多样，且地理分布十分广泛^[1-2]。蜱可通过动物迁徙、人员流动、货物运输等多种载体在世界范围广泛扩散^[3]。目前，已知约90种蜱可作为病原体的传播媒介^[4]，严重威胁人类和动物健康。对蜱类的准确鉴定可为蜱传疾病的风险做出科学预警和评估。将形态学特征数据与各种DNA分子序列数据相结合进行蜱的种类鉴定，有效地克服了形态学鉴定方法的局限性，并为其提供了有力佐证，使鉴定更加准确^[5-6]。近年来，我国口岸检疫人员从进口动物产品中多次检出蜱。2008年阿拉山口出入境检验检疫局从3批哈萨克斯坦进口的牛皮中检出亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum）、残缘璃眼蜱（Hy. detritum）和盾糙璃眼蜱（Hy. scupense）^[7]，2014年南沙出入境检验检疫局从意大利进口的生牛皮中截获1只盾陷璃眼蜱（Hy. excavatum）^[8]，2016年新疆出入境检验检疫局从哈萨克斯坦进口羊毛中检出亚洲璃眼蜱^[9]，2016年佛山口岸从南非进口的盐湿牛皮中检出绚丽花蜱（Amblyomma pomposum）^[10]，2017年浙江省绍兴出入境检验检疫局从泰国进口的板材中检出囊形扇头蜱（Rhipicephalus bursa）^[11]。

为了解南非进口羊毛携带蜱情况，笔者监测了2016年1月至2018年8月上海口岸从南非进口羊毛共计31批次，并对南非进口羊毛中携带蜱的优势种伊文斯扇头蜱（Rh. evertsi evertsi）的形态学和分子生物学鉴定方法以及生活史、地理分布和病原体传播进行介绍，以便相关人员认识、了解伊文斯扇头蜱，提醒检疫及监管部门对该风险的重视。

2016年1月至2018年8月，按照《GB/T 18088－2000出入境动物检疫采样》要求从上海口岸进口的南非羊毛（31批次）中采集蜱标本。其中8批次检出雌、雄蜱成虫共计28只。

仔细检查羊毛，将虫体取出，利用显微镜（ZEISS Discover.V20）进行形态学鉴定，形态学术语参照文献[12]，对鉴别特征拍照后置于装有95%乙醇溶液的1.5 ml离心管中保存。

在解剖镜下取蜱的1只足，放入1.5 ml离心管中，加入液氮研磨后，利用Qiagen DNeasy Blood & Tissue Kit试剂盒（Qiagen，德国）提取样品基因组DNA。

以提取的蜱基因组DNA为模板，以正向引物5′-CTGCTCAATGATTTTTTAAATTGCT GTGG-3′，反向引物5′-CCGGTCTGAACTCAGATCA AGT-3′和正向引物5′-TAAACTTCAGGGTGACCAA AAAATCA-3′，反向引物5′-GGTCAACAAATCAT AAAGATATTGG-3′〔生工生物工程（上海）股份有限公司合成〕分别对线粒体16S rRNA基因和COⅠ基因进行扩增。扩增条件：94 ℃预变性7 min；94 ℃变性30 s，45 ℃复性60 s，72 ℃延伸60 s，40个循环；72 ℃延伸8 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，通过凝胶成像系统进行拍照分析，并将目的基因片段送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序。

将线粒体16S rRNA基因和COⅠ基因的测序结果在美国国立生物技术信息中心（NCBI）进行同源性比对以确定蜱的种类。

对2016年1月至2018年8月上海口岸从南非进口的31批次羊毛进行蜱检疫，其中8批次检出雌、雄蜱成虫共计28只，且均为死蜱，阳性检出率为25.8%。经形态学和分子生物学鉴定，隶属3属8种，即黑斑璃眼蜱（Hy. glabrum）、长喙璃眼蜱（Hy. truncatum）、希伯来花蜱（Am. hebreaeum）、伊文斯扇头蜱、具尾扇头蜱（Rh. appendiculatus）、拟态扇头蜱（Rh. simus）、微小扇头蜱（Rh. microplus）和Rhipicephalus sp.。其中伊文斯扇头蜱15只，占截获蜱总数的53.6%，为本批次南非羊毛携带蜱的优势种类。

未吸血雌性成虫体长3.0~3.5 mm（图 1 A、B），未吸血雄性成虫体长2.8~3.2 mm（图 1 C、D）。假头长宽约相等，假头基呈六边形，外侧角稍钝，孔区近圆形，间距较窄。须肢短。盾板颜色较暗，密布刻点，后缘略弯曲，眼凸起（图 2 E、H）。雌性气门板短逗点形（图 2 F），雄性气门板长逗点形（图 2 I），均较大，周围密被刚毛。肛沟在肛门之后，具肛后中沟（图 2 F、I），雄性肛门侧缘具1对近三角形肛板（图 2 I）。足为淡橙色，基节I后缘有发达距裂，外距锥形，末端较尖，较内距短，内距粗壮，侧缘近平行，呈刀状（图 2 G、J）。符合伊文斯扇头蜱的形态特征（图 3）。

注：A、B.雌性；C、D.雄性（A、C为背面观，B、D为腹面观） 图 1 伊文斯扇头蜱成蜱 Figure 1 Body of adult Rhipicephalus evertsi evertsi

图选项

注：E~G.雌性；H~J.雄性（E、H.眼；F、I.肛门及气门；G、J.足基节I） 图 2 伊文斯扇头蜱形态特征 Figure 2 Morphological characters of Rhipicephalus evertsi evertsi

图选项

注：K.雌性；L.雄性；1.须肢；2.假头基；3.孔区；4.眼；5.气门板；6.足基节I；7.眼；8.气门板；9.肛板 图 3 伊文斯扇头蜱鉴别特征（引自文献[13]） Figure 3 Diagnostic characters of Rhipicephalus evertsi evertsi

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对提取DNA的线粒体16S rRNA和COⅠ基因片段进行PCR扩增，经凝胶电泳检测得到与目标片段〔线粒体16S rRNA（400~430 bp），COⅠ（680~710 bp）〕大小一致的条带。其中3只蜱的PCR扩增电泳结果见图 4。

注：M. DNA Marker；1~3. COⅠ扩增条带；4~6. 16S rRNA扩增条带；7.空白对照 图 4 PCR凝胶电泳检测结果 Figure 4 Results of PCR gel electrophoresis

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目标条带经测序，全长分别为401和696 bp。测序结果在NCBI数据库中进行同源性比对。比对结果分别与伊文斯扇头蜱线粒体16S rRNA基因片段（GenBank序列号：KJ613642.1）匹配度达100%；与伊文斯扇头蜱线粒体COⅠ基因片段（GenBank序列号：AF132835.1）匹配度达97%。

本研究对31批次的南非进口羊毛进行监测，其中有8批次检出蜱，说明从南非进口的羊毛具有一定的检疫风险，其中检出的伊文斯扇头蜱、具尾扇头蜱、拟态扇头蜱、长喙璃眼蜱、黑斑璃眼蜱和希伯来花蜱在我国无分布记录，为首次在进口羊毛中检出。伊文斯扇头蜱为南非羊毛携带蜱的优势种类，由于该蜱生境多样，且宿主普遍，一旦有活蜱传入我国便可定殖，成为病原体的传播媒介，甚至将病原体直接带入我国，因此应加强对进口羊毛检疫，严防外来生物入侵。

伊文斯扇头蜱也称红腿蜱、埃文斯扇头蜱，为两宿主蜱。成年伊文斯扇头蜱最适宿主为马、驴、牛和羊，也有寄生犬、猪和骆驼的报道^[13-14]。成虫经常感染马、牛、羊的肛门周围无毛区域以及腹股沟区域。幼虫和若虫与成虫感染的宿主相同，也可感染野兔和羚羊以及多种野生有蹄类动物。吸饱血后的雌蜱成虫脱离宿主体表，产下5 000~7 000枚卵后死亡；卵孵化后，幼虫爬上植被，并寄生在第1个宿主的耳内，约1周后幼虫蜕皮变为若虫；若虫吸血1周左右与宿主分离，蜕皮变为成虫；成虫寄生在第2个宿主6~12 d。1年可完成多个世代。该蜱主要在夏季活动，但在温暖地区可全年存在^[13-14]。

该蜱是扇头蜱属中分布最广的种类，广泛分布于撒哈拉以南的非洲区域，亚洲和欧洲部分地区也有报道。其在多种生态环境中均有分布，包括沙漠、草原和雨林等^[13]。有记载的国家包括南非、安哥拉、博茨瓦纳、埃塞俄比亚、加纳、肯尼亚、利比亚、马拉维、马里、毛里塔尼亚、莫桑比克、纳米比亚、尼日利亚、塞内加尔、索马里、苏丹、斯威士兰、坦桑尼亚、乌干达、赞比亚、津巴布韦、保加利亚、德国、孟加拉、阿曼、沙特阿拉伯和也门^[15]。

伊文斯扇头蜱可传播巴贝虫（Babesia caballi）和泰勒虫（Theileria equi），导致马、骡和驴感染巴贝虫病；传播无浆体（Anaplasma marginale），导致牛感染无浆体病；传播立克次体（Rickettsia conori），导致人感染立克次体病。雌蜱的唾液中含有一种毒素，可导致羔羊、小牛和成年羊瘫痪^[13-14]。

本研究检出的蜱均为死蜱，定殖风险低。这些蜱是否携带病原微生物，有待进一步检测。总之，加强进口羊毛检疫，对预防外来生物入侵，降低疫病传入的风险具有重要意义。