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谢吕, 林安琪, 王剑, 吴超, 罗燕, 鱼爱水, 陈然, 杨波, 谢晓露, 李春敏, 李志娇, 朱淮民, 姜进勇. 云南省西南边境地区蚊虫及蚊媒病原体调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(3): 264-267.
XIE Lyu, LIN An-qi, WANG Jian, WU Chao, LUO Yan, YU Ai-shui, CHEN Ran, YANG Bo, XIE Xiao-lu, LI Chun-min, LI Zhi-jiao, ZHU Huai-min, JIANG Jin-yong. An investigation of mosquitoes and mosquito-borne pathogens in the southwest border regions of Yunnan province, China[J]. Chin J Vector Biol & Control, 2019, 30(3): 264-267.
云南省西南边境地区蚊虫及蚊媒病原体调查
谢吕1
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林安琪2
,
王剑1
,
吴超1
,
罗燕3
,
鱼爱水3
,
陈然4
,
杨波5
,
谢晓露5
,
李春敏1
,
李志娇1
,
朱淮民2
,
姜进勇1
1 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室, 金宁一院士工作站, 云南省虫媒传染病防控关键技术创新团队(培育), 面向南亚东南亚热带病国际科技人员交流与教育培训基地, 云南省虫媒病毒研究中心, 云南省寄生虫病防治所, 云南 普洱 665000;
2 海军军医大学病原生物学教研室, 上海 200433;
3 孟连傣族拉祜族佤族自治县疾病预防控制中心, 云南 孟连 665800;
4 勐海县疾病预防控制中心, 云南 勐海 666200;
5 江城哈尼族彝族自治县疾病预防控制中心, 云南 江城 665900
收稿日期: 2018-12-21; 网络出版时间: 2019-04-23 16:17
基金项目: 国家重点研发计划生物安全关键技术研发重点专项（2016YFC1200500）
摘要: 目的 了解云南省西南边境地区蚊媒分布及相关蚊媒传染病的存在及流行情况，为该病的预防控制提供科学依据。方法 2013－2015年在云南省孟连傣族拉祜族佤族自治县、勐海和江城哈尼族彝族自治县采用诱蚊灯法和人工诱捕法进行蚊虫采集，采用试剂盒提取蚊虫DNA及RNA，通过反转录-聚合酶链式反应和核苷酸序列测定方法获得病原体基因序列，采用Clustal X1.83、DNASTAR 7.1和MEGA 5.0等生物学软件进行核苷酸序列分析及系统进化分析。结果 共捕获成蚊10属39种126 893只，其中捕获三带喙库蚊104 476只、中华按蚊18 422只、白纹伊蚊1 212只、致倦库蚊891只，分别占82.33%、14.52%、1.00%和0.70%。分离出2株流行性乙型脑炎病毒（JEV），均来自三带喙库蚊，未检出疟原虫、丝虫及其他黄病毒。结论 云南省边境地区蚊媒传染病媒介种类较多，三带喙库蚊和中华按蚊为优势蚊种，自然界中存在着JEV，应加强重要蚊媒监测工作。
关键词:
蚊虫 蚊媒传染病 病原体 边境地区 云南省
An investigation of mosquitoes and mosquito-borne pathogens in the southwest border regions of Yunnan province, China
XIE Lyu1
,
LIN An-qi2
,
WANG Jian1
,
WU Chao1
,
LUO Yan3
,
YU Ai-shui3
,
CHEN Ran4
,
YANG Bo5
,
XIE Xiao-lu5
,
LI Chun-min1
,
LI Zhi-jiao1
,
ZHU Huai-min2
,
JIANG Jin-yong1
1 Yunnan Provincial Key Laboratory of Vector-borne Diseases Control and Research, Academician Workstation of Professor Jin Ningyi, Yunnan Innovative Team of Key Techniques for Vector Borne Disease Control and Prevention(Developing), Training Base of International Scientific Exchange and Education in Tropical Diseases for South and Southeast Asia, Yunnan Provincial Center of Arborvirus Research, Yunnan Institute of Parasitic Disease, Pu′er 665000, Yunnan Province, China;
2 Department of Medical Microbiology and Parasitology, Naval Medical University;
3 Dai-Lu-Wa Autonomous County of Menglian Center for Disease Control and Prevention;
4 Menghai Center for Disease Control and Prevention;
5 Hani-Yi Autonomous County of Jiangcheng Center for Disease Control and Prevention
Supported by the National Key Research and Development Program of Biosafety Key Technology Research and Development (No. 2016YFC1200500)
Abstract: Objective To investigate the distribution of mosquito vectors and prevalence of mosquito-borne diseases in the southwest border regions of Yunnan province, China, and to provide a basis for the prevention and control of such diseases. Methods From 2013 to 2015, the methods of mosquito lamp and human landing collection were used to collect mosquitoes in Dai-Lahu-Va Autonomous County of Menglian, Menghai, and Hani-Yi Autonomous County of Jiangcheng of Yunnan. A kit was used to extract DNA and RNA, and RT-PCR and nucleotide sequencing were used to obtain the gene sequence of pathogens. Biological software including Clustal X1.83, DNASTAR 7.1, and MEGA 5.0 were used for nucleotide sequence analysis and phylogenetic analysis. Results A total of 126 893 mosquitoes of 39 species in 10 genera were collected, among which there were 104 476 Culex tritaeniorhynchus mosquitoes (82.33%), 18 422 Anopheles sinensis mosquitoes (14.52%), 1 212 Aedes albopictus mosquitoes (1.00%), and 891 Cx. pipiens quinquefasciatus mosquitoes (0.70%). Two strains of Japanese encephalitis virus (JEV) were isolated from Cx. tritaeniorhynchus, and Plasmodium, filaria, and other flaviviruses were not detected. Conclusion There are various vector mosquitoes in the border regions of Yunnan. Cx. tritaeniorhynchus and An. sinensis are dominant species in the local area. The isolated JEV suggest that the virus be prevalen in the southwest border regions of Yunnan, and therefore, the monitoring of key vector mosquitos should be enhanced.
Key words:
Mosquito Mosquito-borne disease Pathogen Border region Yunnan province
云南省地处我国西南部，属热带、亚热带气候，蚊虫种类丰富、分布广，是我国蚊类区系和物种分布的核心地带和关键地区，也是我国蚊媒传染病较多的省份之一[1]。从蚊虫中分离的病毒包括5个病毒科11种病毒，如流行性乙型脑炎（乙脑）病毒（JEV）、登革热病毒（DENV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）、辛德毕斯病毒（SINV）、版纳病毒（BNV）、云南环状病毒（YUOV）和巴泰病毒（BATV）等病毒[2-4]。云南省与疟疾、登革热流行严重的缅甸、老挝、越南接壤，边境线长4 060 km，边境地区是云南省蚊传疾病的重要防控地区。如2015年以来，虽然疟疾大幅下降，但盈江等边境县（市）仍有周边国家边境地区的输入病例报告[5]；自2013年以来在边境地区的德宏傣族景颇族自治州、临沧市和西双版纳傣族自治州（西双版纳州）多个县（市、区）均有因输入登革热病例引起的本地暴发疫情报告[6-8]。为进一步了解云南省边境地区蚊虫种类及其携带病原体状况，2013-2015年在孟连傣族拉祜族佤族自治县（孟连县）、勐海县和江城哈尼族彝族自治县（江城县）3个边境县开展了相关调查。
1 材料与方法
1.1 调查点选择 根据云南省边境口岸分布以及疟疾、乙脑和登革热等虫媒疾病的流行情况，选择与缅甸相邻的普洱市孟连县、西双版纳州勐海县以及与老挝相邻的江城县为调查点。其中，孟连县属南亚热带湿润气候，年平均气温19.6 ℃，年平均降雨量1 373 mm；江城县属亚热带湿润气候，平均气温19.6 ℃，年平均降雨量1 662.9 mm；勐海县属热带、亚热带西南季风气候，年平均气温18.7 ℃，年平均降雨量1 341 mm，该3县适合蚊虫孳生繁衍。
1.2 调查方法与内容
1.2.1 蚊虫采集 （1）人工诱捕法：2013-2015年6-10月，在孟连、勐海和江城县依据《登革热防治手册》[9]所述方法在居民区附近竹林或林区诱捕成蚊，于16：00-18：00蚊虫活动高峰时采集，每月1次，每次5~7 d，成蚊密度单位为只/（人·h）。（2）诱蚊灯通宵捕蚊法：按照《全国病媒生物监测方案（试行）》[10]，在调查点内选择人房、畜房布放诱蚊灯（“功夫小帅”UV光催化捕蚊器，220 V，50 Hz，24 W，武汉吉星环保科技有限责任公司生产），20：00至次日08：00布放，每个调查点6-10月每月监测1次，每次连续5 d，成蚊密度单位为只/（灯·夜）。将捕获蚊虫置于-20 ℃冰箱中冷冻20~40 min，在解剖镜下进行蚊虫形态学鉴定、计数，按不同蚊种放置于冻存管，液氮保存[11]。
1.2.2 病原体检测 （1）虫媒病毒检测与鉴定：采用冯云等[12]方法分离病毒并提取病毒RNA〔天根生化科技（北京）有限公司，DNA/RNA共提取试剂盒，批号：03330〕，将RNA反转录为cDNA〔天根生化科技（北京）有限公司cDNA第一链合成试剂盒，批号KR103〕，再用RT-hemi-nested PCR扩增病毒核酸。（2）半巢式多重PCR法检测疟原虫和丝虫：参考周正斌[13]实验方法检测蚊虫携带疟原虫子孢子和丝虫情况。
1.2.3 病毒进化分析 用Clustal X1.83软件进行碱基配对后在MEGA 5.0软件用Neighbor-Joining方法完成病毒进化树的构建，模型采用Kimura2- parameter model，Bootstrap值设定为1 000。
2 结果
2.1 蚊虫种类与构成 共捕获蚊虫10属39种126 893只。其中，三带喙库蚊（Culex tritaeniorhynchus）104 476只（82.33%）、中华按蚊（Anopheles sinensis）18 422只（14.52%）、白纹伊蚊（Aedes albopictus）1 212只（0.96%）、致倦库蚊（Cx. pipiens quinquefasciatus）891只（0.70%），其他蚊虫1 892只（1.49%）；诱蚊灯通宵诱捕法捕获的优势蚊种为三带喙库蚊和中华按蚊，人工诱捕法优势蚊种为白纹伊蚊和骚扰阿蚊（Armigeres subalbatus）（表 1）。
表 1 云南省孟连、勐海和江城县蚊虫种类组成
Table 1 Composition of mosquito species in Menglian, Menghai, and Jiangcheng county in Yunnan province
2.2 病原体检测结果 302批样本均未发现疟原虫和丝虫扩增片段，其中2批三带喙库蚊标本中检出JEV。
将2株JEV的测序结果用DNASTAR 7.1软件进行同源性分析。于基因库中选出12株JEV的NS5基因序列，ML22和ML24 NS5基因的相似性为97%，其中ML22与基因Ⅰ~Ⅳ型标准株间的相似度分别为97%、91%、89%和89%，为ML22和ML24均属基因Ⅰ型提供依据。系统进化树分析发现，参考病毒株分别分布于相应的基因型拓扑结构群中，2株新检测到的JEV与其他3株基因Ⅰ型JEV参考株处在同一进化簇中，但2株JEV核酸之间仍存在一定差异，ML24与SCYA201201-86在同一分支上，而ML22则单独形成一支（图 1）。
3 讨论 本次调查3个县蚊虫种类组成虽然不同，但三带喙库蚊和中华按蚊是夜间活动的主要优势蚊种，白纹伊蚊属白天活动的优势蚊种。与王剑等[14]2012-2015年和王丕玉等[15]2003-2008年在中国和缅甸以及中国和老挝边境地区夜间蚊虫种类组成调查结果基本一致。对于白天活动优势蚊种，本次调查结果与王丕玉等[15]和张海林等[16-17]结果基本相似，可能与近年经济发展，农业结构由原来的广泛种植水稻转变为种植茶叶、橡胶及香蕉等热带作物，蚊虫孳生地改变有关；同时也可能与蚊虫对杀虫剂抗药性的影响有关，如三带喙库蚊、中华按蚊及白纹伊蚊在上述地区均存在抗药性，这些蚊种一直是当地的优势蚊种[18-20]。
中华按蚊是丝虫病和疟疾的重要传播媒介[21]，在云南省分布广泛，本次也收集到大量中华按蚊，但未检测到疟原虫和丝虫核酸。
JEV分为5个基因型[22]，JEV基因Ⅰ型在1979年左右传入中国[23]，2009年首次在西藏自治区分离到JEV基因Ⅴ型[24]。云南省是中国乙脑的高流行区之一[25]，20世纪70-90年代流行JEVⅢ型[26]；2002- 2006年云南省西北部地区流行JEVⅠ型，中南部流行JEV基因Ⅲ型[27]。本次调查获得2株JEV，通过BLAST比对和进化分析，均为JEV基因Ⅰ型；此毒株与2009年中国疾病预防控制中心及2012年四川农业大学分离株同源，为我国广泛流行的乙脑毒株。本次调查结果提示，云南省边境地区蚊虫乙脑自然感染的风险高，建议应加强疫苗接种工作。
参考文献
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| [6] |
Guo XF, Yang HL, Wu C, et al. Molecular characterization and viral origin of the first Dengue outbreak in Xishuangbanna, Yunnan province, China, 2013[J]. Am J Trop Med Hyg, 2015, 93(2): 390-393. DOI:10.4269/ajtmh.14-0044 |
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| [7] | |
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| [8] | |
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| [9] |
卫生部疾病预防控制局. 登革热防治手册[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2008: 81-82.
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| [10] |
中华人民共和国卫生部.全国病媒生物监测方案(试行)[S].北京: 中国疾病预防控制中心, 2005.
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| [23] |
Wang HY, Takasaki T, Fu SH, et al. Molecular epidemiological analysis of Japanese encephalitis virus in China[J]. J Gen Virol, 2007, 88(3): 885-894. DOI:10.1099/vir.0.82185-0 |
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| [26] |
王静林, 张海林, 周济华, 等.云南省乙型脑炎病毒基因分型及分子流行病学研究[C]//中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集.上海: 中国畜牧兽医学会, 2008: 1.
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2019, Vol. 30
表1(Table 1)
