中国媒介生物学及控制杂志  2019, Vol. 30 Issue (3): 255-258

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李贵昌, 李永香, 陈传伟, 刘吉起, 罗运动, 周团结, 沈阳, 蒋之礼, 郭玉红, 宋秀平, 王君, 王玉姣, 赵宁, 栗冬梅, 刘京利, 鲁亮, 刘起勇
LI Gui-chang, LI Yong-xiang, CHEN Chuan-wei, LIU Ji-qi, LUO Yun-dong, ZHOU Tuan-jie, SHEN Yang, JIANG Zhi-li, GUO Yu-hong, SONG Xiu-ping, WANG Jun, WANG Yu-jiao, ZHAO Ning, LI Dong-mei, LIU Jing-li, LU Liang, LIU Qi-yong
河南省永城市恙虫病自然疫源地调查研究
An investigation of natural focus of scrub typhus in Yongcheng, Henan province, China
中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(3): 255-258
Chin J Vector Biol & Control, 2019, 30(3): 255-258
10.11853/j.issn.1003.8280.2019.03.006

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收稿日期: 2019-03-30
网络出版时间: 2019-04-23 16:04
河南省永城市恙虫病自然疫源地调查研究
李贵昌1 , 李永香1,2 , 陈传伟3 , 刘吉起4 , 罗运动3 , 周团结3 , 沈阳3 , 蒋之礼3 , 郭玉红1 , 宋秀平1 , 王君1 , 王玉姣1,5 , 赵宁1 , 栗冬梅1 , 刘京利1 , 鲁亮1 , 刘起勇1     
1 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室, 传染病预防控制国家重点实验室, 北京 102206;
2 山东第一医科大学公共卫生学院, 山东 泰安 271016;
3 永城市疾病预防控制中心, 河南 永城 476610;
4 河南省疾病预防控制中心, 河南 郑州 450016;
5 佳木斯大学公共卫生学院, 黑龙江 佳木斯 154007
摘要: 目的 通过调查河南省永城市农村鼠类及其体表寄生恙螨构成和鼠类恙虫病东方体感染率,为该地传染病防控提供科学依据。方法 于2017年10月选择永城市不同地点、生境,用鼠夹法捕获鼠类并收集其体表寄生虫,使用巢式PCR检测恙虫病东方体核酸。计算鼠密度及其体表携带恙螨率、恙螨指数和病原体感染率。结果 共捕获鼠类110只,捕获率为12.21%,黑线姬鼠占90.00%。从鼠类体表检获恙螨1 249只,河岸林带、湿地和山区林地等生境鼠类带恙螨率和恙螨指数均较高。小板纤恙螨占96.86%,是当地优势螨种,主要寄生在黑线姬鼠体表。鼠类病原学检测阳性率为10.48%,黑线姬鼠、褐家鼠和小家鼠均有阳性。该地恙虫病东方体属于Kawasaki分子型。结论 调查证实永城市存在鼠间恙虫病疫源地,与周边地区恙虫病疫源地具有相同的宿主和媒介。
关键词: 恙虫病    自然疫源地    鼠类    恙螨    恙虫病东方体    
An investigation of natural focus of scrub typhus in Yongcheng, Henan province, China
LI Gui-chang1 , LI Yong-xiang1,2 , CHEN Chuan-wei3 , LIU Ji-qi4 , LUO Yun-dong3 , ZHOU Tuan-jie3 , SHEN Yang3 , JIANG Zhi-li3 , GUO Yu-hong1 , SONG Xiu-ping1 , WANG Jun1 , WANG Yu-jiao1,5 , ZHAO Ning1 , LI Dong-mei1 , LIU Jing-li1 , LU Liang1 , LIU Qi-yong1     
1 State Key Laboratory of Infectious Diseases Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China;
2 School of Public Health, Shandong First Medical University;
3 Yongcheng Center for Disease Control and Prevention;
4 Henan Center for Disease Control and Prevention;
5 School of Public Health, Jiamusi University
Abstract: Objective To investigate the species compositions of rodents and the chigger mites on their body surface and the infection rate of Orientia tsutsugamushi in rodents in Yongcheng, Henan province, China, and to provide a scientific basis for the prevention and control of scrub typhus in Yongcheng. Methods Rat traps were used to capture rodents and to collect ectoparasites from the body surface of rodents in different survey sites and different habitats in Yongcheng in October 2017. Nested PCR was used to detect nucleic acid of O. tsutsugamushi. The rodent density, chigger infestation rate, chigger index, and pathogen infection rate were calculated. Results A total of 110 rodents were captured with a capture rate of 12.21%. Apodemus agrarius accounted for 90.00%. A total of 1 249 chigger mites were collected from rodents. The chigger infestation rate and chigger index were relatively high in the forest along the riverbank, wetland, and mountain forest. Leptotrombidium scutellare (96.86%) was the dominant chigger mite species, which was mainly parasitic on the body surface of A. agrarius. The O. tsutsugamushi positive rate of rodent was 10.48%. Apodemus agrarius, Rattus norvegicus, and Mus musculus were detected O. tsutsugamushi positive with nPCR. Orientia tsutsugamushi in Yongcheng belonged to Kawasaki molecular type. Conclusion This study confirms that there are some epidemic foci of scrub typhus with host rodents in Yongcheng, which have the same hosts and vectors as the surrounding epidemic foci of scrub typhus.
Key words: Scrub typhus    Nature focus    Rodent    Chigger mite    Orientia tsutsugamushi    

永城市位于河南省东部,隶属商丘市,地处苏鲁豫皖4省交界处,东、南、西三面分别与安徽省的宿州、淮北、亳州市接界,与江苏省徐州市和山东省枣庄市相距均为几十公里。与永城市相临的鲁苏皖地区均是秋冬季恙虫病流行区[1-3],但永城市历史上未见恙虫病报道。我们认为永城市自然环境与周边地区类似,当地也可能存在恙虫病流行条件。因此,我们于2017年秋季在当地调查鼠及其体表携带恙螨种类,并检测鼠体病原体感染情况。

1 材料与方法 1.1 现场调查 1.1.1 调查时间、地点和生境的选择

2017年10月下旬,选择永城市的平原地区和东北部芒砀山旅游景区共6个调查点(图 1),包括村庄、农田、湿地、河岸林带、山林、果园共6种生境。

图 1 河南省永城市鼠类调查点分布 Figure 1 Distribution of rodent survey sites in Yongcheng, Henan province
1.1.2 捕鼠及其种类鉴定

采用贵溪李氏捕鼠器械有限公司生产的中号鼠夹,以生花生米为诱饵。间隔5 m沿直线或沿林带布放鼠夹,晚放晨收。捕获的死鼠放塑料自封袋中带回实验室,根据形态鉴定种类。在鼠类调查中捕获的小型兽类包括啮齿目和食虫目,一般统称鼠形动物,本文简称为鼠或鼠类。

1.1.3 鼠体表恙螨采集和鉴定

用梳子梳理鼠类体毛,捡取其体表寄生虫,放入75%乙醇溶液中保存。检查鼠耳等部位,发现有恙螨附着则将整只耳剪下,放入5 ml带盖离心管中,1鼠1管,置于4 ℃冰箱保存3~4 d,再放入-20 ℃冰箱中保存。捡取或刮取恙螨,计数,放入75%乙醇溶液中保存。随机抽取1/5的恙螨,用霍氏封片液封片,显微镜下鉴定种类。

1.1.4 鼠类脏器标本采集

在无菌条件下,解剖、保存鼠类肝、脾、肾、肺等脏器,放-20 ℃冰箱中保存。

1.2 实验室病原学检测

使用北京百泰克生物技术有限公司生产的磁珠法DNA提取试剂盒提取鼠类脏器标本的DNA,用《恙虫病预防控制技术指南(试行)》(中疾控〔2009〕1号)(《指南》)的巢式PCR引物和方法检测恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)56 kD外膜蛋白基因序列。电泳阳性的PCR产物送北京擎科生物技术有限公司测序。对阳性标本用Zheng等[4]使用的巢式PCR引物扩增长约480 bp或700 bp 56 kD蛋白基因片段,根据文献[5]从GenBank上下载不同基因型56 kD蛋白基因序列,建立系统发育树,确定标本Ot基因型。

1.3 数据分析

使用Excel 2010、SPSS 20.0软件进行数据整理和统计分析。根据《指南》计算鼠密度、带恙螨率和恙螨指数。用GenBank BLAST、MEGA 7.0软件序列整理、比对,建系统发育树。

2 结果 2.1 鼠密度及其种类构成 2.1.1 不同地点鼠密度及其构成

本次调查共布放鼠夹901夹次,捕获鼠类110只,捕获率为12.21%。其中包括啮齿目4种,食虫目1种,其中黑线姬鼠(Apodemus agrarius)占90.00%,为优势鼠种。6个采样地点中,以马庄村、冀小楼和沱河大桥捕获率较高,见表 1

表 1 河南省永城市不同地点鼠密度及其种类数量(只) Table 1 Rodent densities and numbers of species in different sites in Yongcheng, Henan province
2.1.2 不同生境鼠密度及其构成

不同生境捕获率不同,调查的湿地为农田中的一块较小面积,捕获率为65.91%,河岸林带为15.16%,村庄为9.68%,该村处于拆迁过程中,仅有少部分房屋有人居住,多数房屋已推倒,院落荒芜,村庄中有较多黑线姬鼠。芒山镇的果园捕获率为0,在芒山镇的芒砀山景区林地中捕获1只黑线姬鼠(表 2)。

表 2 河南省永城市不同生境鼠密度及其种类数量(只) Table 2 Rodent densities and numbers of species in different habitats in Yongcheng, Henan province
2.2 恙螨密度及其种类构成 2.2.1 不同地点和生境恙螨密度及种类构成

共检获恙螨1 249只,带恙螨率为48.18%,恙螨指数为11.35。各采样地点鼠体表均有恙螨寄生。湿地、山区林地、河岸林带3种生境的带恙螨率和恙螨指数均较高(表 3)。

表 3 河南省永城市不同生境带恙螨率和恙螨指数 Table 3 Chigger infestation rate and chigger index in different habitats in Yongcheng, Henan province
2.2.2 不同鼠体恙螨密度及螨种构成

黑线姬鼠带恙螨率和恙螨指数分别为50.51%和12.42,褐家鼠分别为40.00%和1.20。仅捕获大仓鼠1只,其恙螨指数最高,为13.00。小家鼠和臭鼩鼱均未发现恙螨(表 4)。

表 4 河南省永城市不同鼠类带恙螨率和恙螨指数 Table 4 Chigger infestation rate and chigger index in different rodent species in Yongcheng, Henan province

随机抽取20.00%恙螨共255只进行鉴定,发现纤恙螨(Leptotrombidium)3种,其中小板纤恙螨(L. scutellare)占96.86%,其次是泰山纤恙螨(L. taishanicum)和湖北纤恙螨(L. hupeicum)。小板纤恙螨主要宿主为黑线姬鼠(表 5)。

表 5 河南省永城市不同鼠种的恙螨种类构成 Table 5 Species composition of chigger mites in different rodent species in Yongcheng, Henan province
2.3 病原体检测 2.3.1 巢式PCR检测鼠类标本Ot阳性率

对105只鼠的肝、脾、肺、肾和耳标本进行巢式PCR检测,11只鼠的15份不同器官样本阳性。将序列在美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库BLAST比对,证实均为Ot 56 kD蛋白的核酸片段。5种调查生境和除日月湖外的其他所有调查点均检出Ot阳性。鼠类总的病原体阳性率为10.48%,其中小家鼠、褐家鼠和黑线姬鼠阳性率分别为66.67%、20.00%和8.51%,见表 6

表 6 河南省永城市不同鼠种的恙虫病东方体阳性率 Table 6 Positive rate of Orientia tsutsugamushi in different rodent species in Yongcheng, Henan province
2.3.2 Ot分子分型

用文献[4]中引物对15份阳性标本进行巢式PCR扩增,共获得13个DNA序列,经与GenBank下载序列比对和整理,最终截取434个碱基序列。采用最大似然法构建系统发育树(图 2)。永城市的序列与山东、江苏、安徽省阜阳的Kawasaki型序列高度同源,且与日本、韩国的Kawasaki型接近,该地Ot均属于Kawasaki分子型。

注:▲为河南省永城市恙虫病东方体序列 图 2 恙虫病东方体56 kD蛋白基因序列最大似然法系统发育树 Figure 2 Phylogenetic tree based on the gene sequence of a protein (56 kD) in Orientia tsutsugamushi constructed by the maximum likelihood method
2.4 病例分布

通过在中国疾病监测信息报告管理系统中检索,2006-2018年永城市仅有1例恙虫病病例,居住地在芒山镇。该病例2016年11月发病,为郑州市某医院报告。

3 讨论 3.1 恙虫病疫源地的证实

永城市地处苏鲁豫皖交界地带。1986年江苏、山东省出现恙虫病病例[6-7],2008年安徽省北部靠近永城市的阜阳、淮北等地出现恙虫病暴发[8-9]。在中国疾病监测信息报告管理系统中,仅2016年有1例恙虫病病例。该病例11月发病,与永城市周边的安徽、江苏和山东省以及河南省信阳市[10]的秋季型恙虫病自然疫源地发病时间一致。

本次调查发现,永城市10月下旬调查的各种生境中黑线姬鼠均为优势鼠种。该鼠检测Ot阳性率为8.00%。褐家鼠、小家鼠捕获率较低,但在村庄中褐家鼠密度较高,2种家鼠检测也均有Ot阳性。周边恙虫病疫源地证实黑线姬鼠、褐家鼠是主要宿主之一[1-2]。本次调查以野外为主,因此黑线姬鼠可能是野外恙虫病的主要宿主。

永城市的鼠体优势恙螨是小板纤恙螨。黑线姬鼠是小板纤恙螨的主要寄生宿主,带螨率为40.00%。永城市周边恙虫病疫源地主要媒介恙螨均为小板纤恙螨[1-2]。褐家鼠体表也有小板纤恙螨寄生,但小家鼠体表未发现恙螨。

永城市唯一病例的居住地在芒山镇。在芒山镇景区的山上捕获的1只黑线姬鼠其恙螨指数为41.00,且检出Ot阳性。人群发病与动物Ot感染、恙螨分布存在相关性。综上可以看出,黑线姬鼠、褐家鼠是永城市恙虫病的主要宿主,小板纤恙螨是主要传播媒介,其鼠和恙螨种类构成与周边疫区类似。

3.2 恙虫病疫源地范围广泛

永城市以平原为主,仅在北部有芒砀山。该市村庄周围都有树林,树林中杂草丛生,且一般村边都有水塘沟渠,环境潮湿,适宜鼠类和恙螨生存。黑线姬鼠和小板纤恙螨在不同地点、不同生境(除了果园)均有捕获和检出,其分布非常广泛。根据周边地区既往调查,小板纤恙螨幼虫出现在9-12月,高峰期在10月。本次调查时间处于小板纤恙螨的高峰期,黑线姬鼠带恙螨率为50.51%,且主要是小板纤恙螨。除未捕到鼠的果园外,各种调查生境和除了日月湖以外各调查点的鼠类均检出Ot阳性。因此调查地区恙虫病的宿主、媒介和病原体广泛存在。本次调查仅局限在永城市区周边和芒砀山,建议对该市更多地点和农村居民区开展调查,并按月连续监测,开展人群恙虫病血清学调查,从而掌握当地恙虫病疫源地的范围和季节规律。

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