永城市位于河南省东部，隶属商丘市，地处苏鲁豫皖4省交界处，东、南、西三面分别与安徽省的宿州、淮北、亳州市接界，与江苏省徐州市和山东省枣庄市相距均为几十公里。与永城市相临的鲁苏皖地区均是秋冬季恙虫病流行区^[1-3]，但永城市历史上未见恙虫病报道。我们认为永城市自然环境与周边地区类似，当地也可能存在恙虫病流行条件。因此，我们于2017年秋季在当地调查鼠及其体表携带恙螨种类，并检测鼠体病原体感染情况。

2017年10月下旬，选择永城市的平原地区和东北部芒砀山旅游景区共6个调查点（图 1），包括村庄、农田、湿地、河岸林带、山林、果园共6种生境。

图 1 河南省永城市鼠类调查点分布 Figure 1 Distribution of rodent survey sites in Yongcheng, Henan province

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采用贵溪李氏捕鼠器械有限公司生产的中号鼠夹，以生花生米为诱饵。间隔5 m沿直线或沿林带布放鼠夹，晚放晨收。捕获的死鼠放塑料自封袋中带回实验室，根据形态鉴定种类。在鼠类调查中捕获的小型兽类包括啮齿目和食虫目，一般统称鼠形动物，本文简称为鼠或鼠类。

用梳子梳理鼠类体毛，捡取其体表寄生虫，放入75%乙醇溶液中保存。检查鼠耳等部位，发现有恙螨附着则将整只耳剪下，放入5 ml带盖离心管中，1鼠1管，置于4 ℃冰箱保存3~4 d，再放入-20 ℃冰箱中保存。捡取或刮取恙螨，计数，放入75%乙醇溶液中保存。随机抽取1/5的恙螨，用霍氏封片液封片，显微镜下鉴定种类。

在无菌条件下，解剖、保存鼠类肝、脾、肾、肺等脏器，放-20 ℃冰箱中保存。

使用北京百泰克生物技术有限公司生产的磁珠法DNA提取试剂盒提取鼠类脏器标本的DNA，用《恙虫病预防控制技术指南（试行）》（中疾控〔2009〕1号）（《指南》）的巢式PCR引物和方法检测恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi，Ot）56 kD外膜蛋白基因序列。电泳阳性的PCR产物送北京擎科生物技术有限公司测序。对阳性标本用Zheng等^[4]使用的巢式PCR引物扩增长约480 bp或700 bp 56 kD蛋白基因片段，根据文献[5]从GenBank上下载不同基因型56 kD蛋白基因序列，建立系统发育树，确定标本Ot基因型。

使用Excel 2010、SPSS 20.0软件进行数据整理和统计分析。根据《指南》计算鼠密度、带恙螨率和恙螨指数。用GenBank BLAST、MEGA 7.0软件序列整理、比对，建系统发育树。

本次调查共布放鼠夹901夹次，捕获鼠类110只，捕获率为12.21%。其中包括啮齿目4种，食虫目1种，其中黑线姬鼠（Apodemus agrarius）占90.00%，为优势鼠种。6个采样地点中，以马庄村、冀小楼和沱河大桥捕获率较高，见表 1。

表 1 河南省永城市不同地点鼠密度及其种类数量（只） Table 1 Rodent densities and numbers of species in different sites in Yongcheng, Henan province

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不同生境捕获率不同，调查的湿地为农田中的一块较小面积，捕获率为65.91%，河岸林带为15.16%，村庄为9.68%，该村处于拆迁过程中，仅有少部分房屋有人居住，多数房屋已推倒，院落荒芜，村庄中有较多黑线姬鼠。芒山镇的果园捕获率为0，在芒山镇的芒砀山景区林地中捕获1只黑线姬鼠（表 2）。

表 2 河南省永城市不同生境鼠密度及其种类数量（只） Table 2 Rodent densities and numbers of species in different habitats in Yongcheng, Henan province

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共检获恙螨1 249只，带恙螨率为48.18%，恙螨指数为11.35。各采样地点鼠体表均有恙螨寄生。湿地、山区林地、河岸林带3种生境的带恙螨率和恙螨指数均较高（表 3）。

表 3 河南省永城市不同生境带恙螨率和恙螨指数 Table 3 Chigger infestation rate and chigger index in different habitats in Yongcheng, Henan province

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黑线姬鼠带恙螨率和恙螨指数分别为50.51%和12.42，褐家鼠分别为40.00%和1.20。仅捕获大仓鼠1只，其恙螨指数最高，为13.00。小家鼠和臭鼩鼱均未发现恙螨（表 4）。

表 4 河南省永城市不同鼠类带恙螨率和恙螨指数 Table 4 Chigger infestation rate and chigger index in different rodent species in Yongcheng, Henan province

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随机抽取20.00%恙螨共255只进行鉴定，发现纤恙螨（Leptotrombidium）3种，其中小板纤恙螨（L. scutellare）占96.86%，其次是泰山纤恙螨（L. taishanicum）和湖北纤恙螨（L. hupeicum）。小板纤恙螨主要宿主为黑线姬鼠（表 5）。

表 5 河南省永城市不同鼠种的恙螨种类构成 Table 5 Species composition of chigger mites in different rodent species in Yongcheng, Henan province

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对105只鼠的肝、脾、肺、肾和耳标本进行巢式PCR检测，11只鼠的15份不同器官样本阳性。将序列在美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库BLAST比对，证实均为Ot 56 kD蛋白的核酸片段。5种调查生境和除日月湖外的其他所有调查点均检出Ot阳性。鼠类总的病原体阳性率为10.48%，其中小家鼠、褐家鼠和黑线姬鼠阳性率分别为66.67%、20.00%和8.51%，见表 6。

表 6 河南省永城市不同鼠种的恙虫病东方体阳性率 Table 6 Positive rate of Orientia tsutsugamushi in different rodent species in Yongcheng, Henan province

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用文献[4]中引物对15份阳性标本进行巢式PCR扩增，共获得13个DNA序列，经与GenBank下载序列比对和整理，最终截取434个碱基序列。采用最大似然法构建系统发育树（图 2）。永城市的序列与山东、江苏、安徽省阜阳的Kawasaki型序列高度同源，且与日本、韩国的Kawasaki型接近，该地Ot均属于Kawasaki分子型。

注：▲为河南省永城市恙虫病东方体序列 图 2 恙虫病东方体56 kD蛋白基因序列最大似然法系统发育树 Figure 2 Phylogenetic tree based on the gene sequence of a protein (56 kD) in Orientia tsutsugamushi constructed by the maximum likelihood method

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通过在中国疾病监测信息报告管理系统中检索，2006-2018年永城市仅有1例恙虫病病例，居住地在芒山镇。该病例2016年11月发病，为郑州市某医院报告。

永城市地处苏鲁豫皖交界地带。1986年江苏、山东省出现恙虫病病例^[6-7]，2008年安徽省北部靠近永城市的阜阳、淮北等地出现恙虫病暴发^[8-9]。在中国疾病监测信息报告管理系统中，仅2016年有1例恙虫病病例。该病例11月发病，与永城市周边的安徽、江苏和山东省以及河南省信阳市^[10]的秋季型恙虫病自然疫源地发病时间一致。

本次调查发现，永城市10月下旬调查的各种生境中黑线姬鼠均为优势鼠种。该鼠检测Ot阳性率为8.00%。褐家鼠、小家鼠捕获率较低，但在村庄中褐家鼠密度较高，2种家鼠检测也均有Ot阳性。周边恙虫病疫源地证实黑线姬鼠、褐家鼠是主要宿主之一^[1-2]。本次调查以野外为主，因此黑线姬鼠可能是野外恙虫病的主要宿主。

永城市的鼠体优势恙螨是小板纤恙螨。黑线姬鼠是小板纤恙螨的主要寄生宿主，带螨率为40.00%。永城市周边恙虫病疫源地主要媒介恙螨均为小板纤恙螨^[1-2]。褐家鼠体表也有小板纤恙螨寄生，但小家鼠体表未发现恙螨。

永城市唯一病例的居住地在芒山镇。在芒山镇景区的山上捕获的1只黑线姬鼠其恙螨指数为41.00，且检出Ot阳性。人群发病与动物Ot感染、恙螨分布存在相关性。综上可以看出，黑线姬鼠、褐家鼠是永城市恙虫病的主要宿主，小板纤恙螨是主要传播媒介，其鼠和恙螨种类构成与周边疫区类似。

永城市以平原为主，仅在北部有芒砀山。该市村庄周围都有树林，树林中杂草丛生，且一般村边都有水塘沟渠，环境潮湿，适宜鼠类和恙螨生存。黑线姬鼠和小板纤恙螨在不同地点、不同生境（除了果园）均有捕获和检出，其分布非常广泛。根据周边地区既往调查，小板纤恙螨幼虫出现在9-12月，高峰期在10月。本次调查时间处于小板纤恙螨的高峰期，黑线姬鼠带恙螨率为50.51%，且主要是小板纤恙螨。除未捕到鼠的果园外，各种调查生境和除了日月湖以外各调查点的鼠类均检出Ot阳性。因此调查地区恙虫病的宿主、媒介和病原体广泛存在。本次调查仅局限在永城市区周边和芒砀山，建议对该市更多地点和农村居民区开展调查，并按月连续监测，开展人群恙虫病血清学调查，从而掌握当地恙虫病疫源地的范围和季节规律。