登革热（dengue fever）是由登革热病毒（Dengue virus，DENV）引起，经伊蚊（Aedes）叮咬传播的一种以发热、皮疹和全身疼痛为主要症状的急性传染病，是东南亚地区儿童死亡的主要原因之一^[1]。通常夏秋季节高发，其潜伏期为5~7 d，具有传播迅猛、发病率高等特点。该病于1779年在埃及开罗、印度尼西亚雅加达及美国费城发现^[2]，主要在热带和亚热带地区流行^[3]，患者有可能出现极度疲倦及抑郁症状，少数病例恶化至登革出血热，并进一步出血、休克，甚至死亡，登革热引起的并发症往往是患者致死的主因。20世纪登革热在世界各地发生多次大流行，病例达数百万，与我国接壤的东南亚国家尤为严重^[4-5]。登革热在我国于1978年在广东省佛山市流行^[6]，并分离出4型DENV。此后，于1979、1980和1985年小流行中分离出1、2、3型DENV^[7]。浙江省慈溪市于2004年^[8]、义乌市于2009年^[9]发生由输入性病例引起的登革热疫情。衢州市于2017年发现1例登革热病例，提示衢州地区存在因登革热病例输入引起本地感染的风险。为查明病例可能的感染来源及分离株的生物学性状，我们对该病例进行了流行病学调查及病原学检测。

病例临床资料来源于衢州市人民医院感染科，流行病学调查资料来源于衢州市CDC传染病防制科。

在医院无菌采集患者血液标本5 ml，专车冷链送至衢州市CDC实验室，分离血清备用，多余的血清标本置-80 ℃低温保存。

应用胶体金免疫层析法对血清样本进行DENV IgM抗体检测，试剂购于澳大利亚Panbio有限公司，于有效期内使用，具体操作说明和结果判读按照试剂说明书进行。

DENV核酸的提取按照MagMAX-96病毒核酸抽取试剂盒使用说明书操作，取样100 μl，最终洗脱至50 μl，作为模板。采用浙江省CDC微生物检验所下发的引物和探针，采用荧光定量RT-PCR方法进行DENV核酸检测，具体参照文献[10]。

参考文献[11]设计引物，试剂采用宝生物工程（大连）有限公司One Step RNA PCR Kit（Code No：DRR024A），按试剂说明书进行。反应条件：42 ℃ 30 min反转录，94 ℃ 2 min后，94 ℃30 s，51 ℃ 30 s，72 ℃ 2 min，循环40次，72 ℃延伸8 min。取扩增产物5 μl，用1.5%琼脂糖凝胶电泳，根据Marker位置确认反应产物。

采用PCR扩增产物纯化后直接测序，由上海伯杰生物科技有限公司完成。数据处理采用Dnaman和ClustalX软件，进化树的构建采用MEGA 7.0软件（最大似然法）。

徐某，女，52岁，发病前在缅甸小勐拉镇制售烤饼，于2017年9月29日发病，在缅甸当地以感冒治疗，10月4日凌晨回衢州市，5日上午到衢江区人民医院就诊，后转至衢州市人民医院就诊，当日傍晚衢州市人民医院以“登革热疑似病例”收入分院进行隔离治疗，6日衢州市CDC实验室检测登革热病毒核酸阳性，DENV IgM抗体阳性，结合近期缅甸有登革热流行情况，确诊为登革热输入性病例。

衢州市CDC对患者所在医院立即进行防蚊隔离治疗；对患者开展流行病学调查，采集患者血液进行病原学检测；并对患者家中和曾逗留的兄弟、朋友家进行成蚊快速杀灭；同时对患者生活区域进行伊蚊幼虫应急监测，严格控制布雷图指数 < 5。

病例血清标本DENV IgM抗体检测结果为阳性；对病例标本血清核酸进行DENV型特异性荧光定量PCR测定，检测到1型DENV。

经DENV E基因序列测定，该病毒获得E基因序列全长为2 325个核苷酸，推导编码775个氨基酸，未发现有碱基缺失与插入；与从GenBank下载的基因序列进行比对，本例病毒株与54株DENV核苷酸和氨基酸的相似性分别为98.3%~99.1%和97.8%~99.7%，其中与东南亚病毒株（登录序列号KY586429.1、KJ806941.2）的亲缘关系最近，核苷酸和氨基酸同源性分别为99.1%和99.7%。

将病例标本E基因序列与从GenBank中下载的不同国家、不同年份、不同基因亚型的病毒株基因序列进行比对，构建进化树。该病毒株（DEVQuZhouCDC）位于DV-1分支上，而DV-1型又可分为GⅠ~GⅤ共5个亚型，该病毒株位于GⅠ亚型上，与东南亚病毒株（登录序列号KJ806941.2）在同一亚型分支，见图 1。

图 1 衢州市1例输入性登革热病毒1型株E基因进化树 Figure 1 Phylogenetic tree of E gene of Dengue virus type 1 from imported dengue fever case in Quzhou city

图选项

目前，对于我国是否为登革热自然疫源地的争议较大，尚无明确定论，较多学者认为我国登革热病例主要以输入性病例^[12-13]或以输入传播为主。因登革热传播方式为“伊蚊-人-伊蚊”，比较特殊，若当地有输入性病例，则疫情暴发流行的可能性较大，如2014年广东省大规模暴发疫情^[14-15]及浙江省2004年慈溪市^[8]、2009年义乌市^[9]疫情暴发。衢州市作为其相邻城市，有必要对本次分离的DENV进行基因测序及核苷酸和氨基酸同源性分析，为研究DENV的来源、流行、毒力变异及后期防控等提供科学依据。

目前，E基因区域作为DENV基因分型广为人们所接受。根据抗原性不同将DENV分为1~4血清型，根据E基因又可分为多种亚型，不同地域基本有不同的血清型和基因亚型^[11]。通过对病原体的测序、比对、基因进化树分析推断病原体的来源、发生、发展及传播为分子流行病学研究的主要方法^[16]。衢州市本例登革热病例为DENV1型GⅠ亚型，与东南亚病毒株（登录序列号KY586429.1、KJ806941.2）亲缘关系最近，核苷酸和氨基酸同源性为99.1%和99.7%，与流行病学调查来源完全吻合，进一步推断本例登革热为一起输入性病例，且最有可能来源于东南亚一带。

另外，登革热传播媒介主要是埃及伊蚊（Ae. aegypti）和白纹伊蚊（Ae. albopictus），浙江省仅有白纹伊蚊分布。病毒通过蚊虫叮咬传染给人类，蚊虫通常在吸食被感染的人血时获得病毒，被感染的蚊虫终生均可传播病毒，少数还可经卵将病毒传给后代。白纹伊蚊在衢州市分布较广泛，该地的自然环境和气候条件非常适宜该蚊的生长繁殖；近年来，本地气温受气候变暖影响，较2005-2015年偏高，11月蚊虫活动仍较频繁^[17]，提示存在蚊虫孳生现象，一旦有登革热疫情输入，条件适宜可能引起登革热本地感染，继而暴发与流行。

随着经济的快速发展，国际商贸、劳务、旅游、探亲访友活动日渐频繁，尤其与登革热发病较多的东南亚地区交流增加，登革热病例输入的概率可能增加。因此，应密切注意境外疫情动态，加强对来自登革热疫区人员的观察，尽早发现病例并立即进行流行病学应急处置及标本检测，做好蚊虫杀灭工作，防止疫情扩散蔓延。