淡色库蚊（Culex pipiens pallens）、家蝇（Musca domestica）和德国小蠊（Blattella germanica）是我国北方地区（33° N以北）重要的家栖性病媒生物，已被证实为该地区主要病媒传染病的传播媒介，为唐山市城区的主要叮刺吸血和骚扰生物。目前对其防制主要以化学杀灭为主，但由于长期喷洒化学杀虫剂，抗药性成为防制难题。2016年唐山市世界园艺博览会（世园会）期间正值病媒生物活动高峰，而来自非洲、中东和美洲各种珍稀植物也为病媒生物性传染病的传入提供了环境和传播基础。为降低病媒生物性传染病暴发与流行的危险，2012－2016年唐山市CDC组织相关专业技术人员对世园会园区及周边环境主要病媒生物进行了抗药性调查，为世园会科学地使用杀虫剂，有效地防制病媒生物提供理论指导，为本市病媒生物抗药性研究提供借鉴。

95.1%双硫磷、97.2%毒死蜱、94%氯氰菊酯、92%胺菊酯、91.42%DDT、95%高效氟氯氰菊酯、97%顺式氯氰菊酯、98%溴氰菊酯和97.3%甲基吡恶磷，均由中国CDC传染病预防控制所提供；稀释溶剂为丙酮（分析纯）和乙醚（分析纯）。

淡色库蚊野外种群为世园会园区及周边3个监测区域的荷塘、沟渠、下水道及污水沟等场所现场采集的卵块、幼虫或蛹，带回饲养室繁殖1~2代，选择3龄末4龄初蚊幼虫作为试虫；敏感品系由河北省CDC媒介昆虫饲养室提供。

家蝇野外种群为世园会园区及周边4个监测区域的垃圾箱、农贸市场、肉类加工厂、副食品厂和小吃店等采集，带回实验室繁殖1~2代，取羽化后3~4 d，体质量约20 mg的雌性成蝇；敏感品系为唐山市CDC媒介昆虫饲养室常年饲养，不接触任何杀虫剂、羽化后3~4 d、体质量约20 mg的雌性家蝇。

德国小蠊野外种群为世园会园区及周边4个监测区域的宾馆、饭店及餐饮店等现场采集的德国小蠊，采用以甜面包作为诱饵的蜚蠊诱捕盒，将诱捕的德国小蠊成虫和若虫带回实验室饲养繁殖1代，取羽化后7~15 d的健康雄性成虫供试；敏感品系为河北省CDC媒介昆虫饲养室常年饲养，不接触任何杀虫剂的德国小蠊。

采用药液浸渍法。实验条件为温度（26±1）℃、湿度（55±5）%。用丙酮将各测试药剂配制成5~7个浓度，要求试虫死亡率在10%~90%之间的数据≥3个。在250 ml烧杯中加入149 ml脱氯自来水，用移液器将1 ml药液由低到高浓度加入各烧杯中，对照组加入1 ml丙酮，充分混匀，将盛有20条试虫的50 ml水分别加入各烧杯中，置人工培养箱培养24 h，检查蚊幼虫死亡数，同一浓度重复3次。死亡判断标准：用针尖触动蚊幼虫无反应、不能逃避刺激视为死亡。

采用微量点滴法。实验室温度（25±1）℃，复苏室温度（25±1）℃，湿度60%~70%。用丙酮将原药配制成7个不同浓度梯度，选取羽化后3~4 d、体质量约20 mg的家蝇成虫放入试管，用乙醚浸润棉花，塞住试管口，将试管平放轻摇，对试虫进行轻度麻醉，将其倒入清洁培养皿中，放置冰排上，以延长麻醉后家蝇复苏时间，随后挑选健康雌虫，每组选取20只置于一个平皿中，背板朝上备用。以点滴丙酮作对照组。利用微量点滴器将1 μl药液由低浓度至高浓度滴于雌性家蝇中胸背板，每个浓度点滴家蝇20只，置于500 ml洁净烧杯中，用脱脂棉供水，以葡萄糖和奶粉等比例混合物供食，烧杯口用清洁白棉纱布盖上扎紧，观察24 h并记录试虫各处理浓度的死亡数。死亡判断标准：凡试虫腹部上翻，六足抽搐，用探针触之无法翻身爬行者判为死亡。

采用药膜法，在温度（25±1）℃、湿度（60±5）%条件下进行。用丙酮将各杀虫剂稀释至所需浓度，取稀释液2.5 ml置于500 ml透明锥形瓶中，滚动瓶体使瓶底与瓶壁均匀地涂上药膜，待丙酮挥发后24 h备用，测定时在瓶颈处涂石蜡油和凡士林的等量混合物以避免试虫爬出，对照组用2.5 ml丙酮。每次将10只试虫放入药膜瓶内，观察记录试虫接触药膜后不同时间的击倒数，待试虫击倒率达90%时，将试虫移至洁净玻璃瓶中，每种药剂重复3次。击倒判断标准：试虫不能正常爬行或完全不动视为击倒。

淡色库蚊：抗性倍数＜3为敏感；3≤抗性倍数＜10为低度抗性；10≤抗性倍数＜40为中度抗性；抗性倍数≥40为高度抗性。家蝇：抗性倍数≤2为敏感；2＜抗性倍数≤10为低度抗性；10＜抗性倍数≤20为中度抗性；抗性倍数＞20为高度抗性。德国小蠊：抗性倍数≤1为敏感，1＜抗性倍数≤5为低度抗性，5＜抗性倍数≤10为中度抗性，10＜抗性倍数≤50为高度抗性。

利用DPS软件对实验数据进行处理，计算淡色库蚊半数致死浓度（LC₅₀）及其95%CI、家蝇的半数致死量（LD₅₀）及其95%CI、德国小蠊的半数击倒时间（KT₅₀）及其95%CI、各试虫毒力回归方程及χ²值等。

唐山市淡色库蚊对双硫磷、毒死蜱、氯氰菊酯、胺菊酯和DDT的LC₅₀为0.000 9~0.263 8 μg/ml，抗性倍数为0.50~2.18倍，淡色库蚊对5种常用杀虫剂的抗性均为敏感，见表 1。

表 1 2013－2015年唐山市淡色库蚊对5种常用杀虫剂的抗药性测定结果 Table 1 The resistance of Culex pipiens pallens to five insecticides in Tangshan city from 2013 to 2015

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2009－2011年淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性与1991年和1983年比较呈增强趋势，其LC₅₀（0.000 6 μg/ml）分别为1991年（4.315 6×10^-4 μg/ml）和1983年（2.814 5×10^-4 μg/ml）的1.39和2.13倍。该3个阶段供试淡色库蚊的LC₅₀以2009－2011年调查的敏感品系作为对比系数，得到各个阶段的相对抗性倍数，分别为0.47、0.72和1.00倍，使各时期数据更具对比意义，但与敏感品系比较，对溴氰菊酯仍较为敏感。

唐山市家蝇对胺菊酯、高效氟氯氰菊酯、顺式氯氰菊酯和甲基吡恶磷4种常用杀虫剂的LD₅₀分别为0.198 1、0.007 3、0.020 5和0.081 2 μg/♀，抗性倍数分别为3.13、2.21、7.07和6.71倍，为低度抗性；家蝇对溴氰菊酯的抗性倍数为100.67倍，为高度抗性，见表 2。

表 2 2012－2016年唐山市家蝇对5种常用杀虫剂的抗药性测定结果 Table 2 The resistance of Musca domestica to five insecticides in Tangshan city from 2012 to 2016

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2012－2016年家蝇对溴氰菊酯的抗性结果与1983年和1991年比较，其LD₅₀（0.030 2 μg/♀）分别为1991年（0.062 4 μg/♀）和1983年（0.001 55 μg/♀）的0.48和19.48倍。1983、1991和2012－2016年家蝇对溴氰菊酯的抗性倍数分别为5.17、208.00和100.67倍，除1983年为低度抗性外，均为高度抗性，抗性高峰在1991年，但与1991年抗性结果比较，家蝇对溴氰菊酯的抗性呈下降趋势。

唐山市德国小蠊对氯氰菊酯、溴氰菊酯、胺菊酯、高效氟氯氰菊酯和毒死蜱5种常用杀虫剂的KT₅₀值分别为114.44、60.84、175.10、135.77和56.57 min，抗性倍数分别为37.28、18.61、35.95、27.05和17.04倍，均为高度抗性，其中以氯氰菊酯最高，毒死蜱最低，见表 3。

表 3 2013－2015年唐山市德国小蠊对5种常用杀虫剂的抗药性测定结果 Table 3 The resistance of Blattella germanica to five insecticides in Tangshan city from 2013 to 2015

表选项

病媒生物危害程度直接影响唐山市世园会的顺利举行。因此，在世园会召开前夕，唐山市CDC组织专业技术人员对该地近几年常见病媒生物的抗药性进行调查，确保世园会召开期间病媒生物防制工作的顺利开展。

近几年，唐山市监测蚊种以淡色库蚊为主，对传播媒介而言，唐山市世园会园区及周边区域蚊媒传染病的暴发与流行风险性较小，而骚扰叮咬的风险性极大。因此，唐山市世园会以淡色库蚊作为主要防制对象。本次调查淡色库蚊对双硫磷、毒死蜱、氯氰菊酯、胺菊酯和DDT 5种常用杀虫剂尚未产生抗性，总体处于较敏感水平。而2009－2011年淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性为1983年的2.13倍，1991年的1.39倍，与国内近些年广泛使用拟除虫菊酯类杀虫剂报道一致^[1-4]。拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性普遍增强可能与其产生交互抗性有关。因此，提示本调查在蚊虫化学防治过程中，应对优势蚊种定期进行抗药性监测，以及时掌握抗性动态^[5-7]，将抗药性监测信息纳入爱国卫生工作病媒生物防制用药指导，可有效地改善当前杀虫剂的使用状况^[8-9]。

从本次调查结果看，家蝇对胺菊酯、高效氟氯氰菊酯、顺式氯氰菊酯、溴氰菊酯和甲基吡恶磷5种常用杀虫剂均产生了不同程度的抗药性，其中家蝇对溴氰菊酯为高度抗性，与以往抗药性监测结果比较，是1983年抗性倍数（5.17倍）的19.48倍，但家蝇对溴氰菊酯的抗药性最高出现在1991年，其抗性倍数为208.00倍，说明近几年来因控制使用溴氰菊酯杀虫剂，家蝇对其抗药性已经大大降低。因多种抗性机制共同作用，家蝇具有较强的环境适应能力，在蝇类防制工作中长期大量地使用同一种卫生杀虫剂，很可能造成种群抗药性水平的迅速提高^[10-11]。因此，建议各级政府和卫生行政部门加强家蝇对常用卫生杀虫剂的抗药性监测，给予经费支持并开展与相关生化和分子生物学等检测，大力推广使用物理灭蝇方法，如粘蝇纸和捕蝇器等，在重点行业安装纱门、纱窗等，从而减少卫生杀虫剂的使用^[12-13]。

本次调查显示，德国小蠊对氯氰菊酯、溴氰菊酯、胺菊酯和高效氟氯氰菊酯均产生了高度抗性。自20世纪80年代以来，氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯得到广泛应用，随着长时间使用，大多数地区病媒生物对其产生了较高的抗药性^[14-15]。毒死蜱是一种有机磷类杀虫剂，具有快速击倒和杀灭作用，且价格低廉、使用方便，是处理外环境孳生地的主要杀虫剂。而蜚蠊多在室内活动，故德国小蠊对其抗药性相对较低，但仍为高抗水平。

综上所述，有害生物防制形势十分严峻，应选用敏感性较高的卫生杀虫剂对病媒生物进行科学合理地杀灭，是有效防制病媒生物确保世园会顺利召开的关键。