中国媒介生物学及控制杂志  2017, Vol. 28 Issue (1): 20-22

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吴嘉彤, 张仪, 张璟, 朱丹
WU Jia-tong, ZHANG Yi, ZHANG Jing, ZHU Dan
实验室条件下血红扇头蜱的生物学特性
Study on biological characteristics of Rhipicephalus sanguineus under laboratory conditions
中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(1): 20-22
Chin J Vector Biol & Control, 2017, 28(1): 20-22
10.11853/j.issn.1003.8280.2017.01.006

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收稿日期: 2016-09-01
网络出版时间: 2016-12-06 17:10
实验室条件下血红扇头蜱的生物学特性
吴嘉彤, 张仪, 张璟, 朱丹     
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所, 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室, 世界卫生组织热带病合作中心, 上海 200025
摘要: 目的 在实验室条件下,观察不同温度下血红扇头蜱的生物学特性。 方法 将血红扇头蜱置于15、20、25和30℃下,观察其发育和产卵等情况。 结果 在实验室适宜条件下,血红扇头蜱可长期保种传代,在25℃时完成1个世代约需87 d,<15℃无法完成保种传代;根据二项式模型预测发育零点温度为12.7℃,发育历期高点温度为28.5℃。 结论 实验室条件下获得血红扇头蜱传代的生物学指标,为其人工饲养和科学实验提供参考。
关键词: 血红扇头蜱     有效积温     发育零点     人工饲养    
Study on biological characteristics of Rhipicephalus sanguineus under laboratory conditions
WU Jia-tong, ZHANG Yi, ZHANG Jing, ZHU Dan     
National Institute of Parasitic Disease, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Key Laboratory of Parasite and Vector Biology, Ministry of Health, WHO Collaborating Center for Tropical Diseases, Shanghai 200025, China
Supported by the National Basic Research Program of China(No. 2016YFC1202000, 2016YFC1202001)
Corresponding author: ZHU Dan, Email:zhudan818@126.com
Abstract: Objective To observe the biological characteristics of Rhipicephalus sanguineus under different laboratory conditions. Methods Rhipicephalus sanguineus were cultured at different temperature in the laboratory. The growth, development and oviposition were recorded. Results Rhipicephalus sanguineus can be preserved for long term under proper conditions, and complete a generation for about 87 d at 25℃. It cannot be preserved in the laboratory when the temperature is less than 15℃. According to the prediction of the binomial model, the developmental zero temperature is 12.7℃ and the developmental peak temperature is 28.5℃. Conclusion The biological characteristics of Rh. sanguineus have been obtained under laboratory conditions. It will provide reference for colonization and scientific experiments of Rh. sanguineus.
Key words: Rhipicephalus sanguineus     Effective accumulated temperature     Developmental zero     Artificial feeding    

蜱是一类专性寄生的节肢动物,血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)是蜱螨亚纲寄螨目硬蜱科扇头蜱属(Rhipicephalus),在我国分布广泛,主要集中在东部沿海、东北和西北等地区[1]。其主要寄生于犬、羊和牛等家畜体表,是犬巴贝斯虫病和Q热的主要传播媒介[2]。由于人与犬接触密切,一旦犬体表寄生蜱后,易带入室内侵袭人类。2011 年 8 月在江西、重庆、广东和湖南等 11 个省(直辖市)19 处警犬基地的警犬体表采集蜱399只,通过巢式PCR和序列测定,发现蜱体内巴贝西虫(Babesia)总阳性率为5.3%,均为佛氏巴贝西虫(B. canis vogeli[3]。本研究将采集的血红扇头蜱在实验室内饲养传代,观察其生物学特性,为实验室巴贝西虫感染等研究提供材料。

1 材料与方法 1.1 成蜱来源

实验蜱为采自江西省南昌市警犬基地警犬体表的饱血成蜱,饲养至下一代成蜱后,根据文献[4]鉴定为血红扇头蜱,在实验室饲养繁殖建立传代体系。

1.2 实验动物

饲血动物为家兔和昆明小鼠(购自中国科学院上海实验动物中心)。

1.3 蜱的饲喂和孵育 1.3.1 幼蜱和若蜱的饲养

在25 ℃普通实验室内进行蜱的放置和收集。将昆明小鼠头部用塑料项圈固定后置于鼠笼中。将血红扇头蜱幼蜱或若蜱用毛笔刷于昆明小鼠体表,将鼠笼置于两层储物箱中,盖紧盖子后分别置于温度为15、20、25和30 ℃,湿度为(80±5)%培养箱内。待蜱饱血脱落后从培养箱取出,将饱血蜱收集至50 ml塑料瓶中,继续放入不同温度的培养箱,观察并记录蜕化时间和体质量变化等。

1.3.2 成蜱的饲养

在25 ℃普通实验室内进行蜱的放置和收集操作。将尼龙绢耳套套于兔耳上,耳套下端用胶布固定于兔耳根部,用502胶水固定,兔颈部套上塑料枷锁防止耳套被抓挠脱落。将成蜱倒入耳套中,耳套上端用橡皮筋扎紧。实验和收集方法同幼蜱及若蜱,但每瓶仅放1只饱血成蜱,观察并记录产卵数量和孵化时间等。

1.4 统计学处理

每个温度组均实验3个世代,计算平均数并进行分析,有效积温按张臣臣等[5]报道方法计算,有效积温公式:K=NT-C),其中K为幼蜱发育的有效积温,N为蜱的发育历期,T为发育时的温度,C为发育零点温度。根据公式:V=1/N,将发育历期(N)转化为发育速度(V)。并将VT拟合二项式曲线,根据方程式计算发育起点温度和最佳发育温度。根据t检验计算各组均数t值。P<0.05为差异有统计学意义[6]

2 结果 2.1 温度对血红扇头蜱发育的影响

血红扇头蜱完成生活史需经过卵、幼蜱、若蜱和成蜱4个阶段,该蜱为三宿主蜱。在温度为20、25和30 ℃下蜱的各阶段均能正常孵化发育,随着温度的增加,发育时间逐步缩短。在15 ℃下幼虫期若虫和成虫均无法完成饱血,将25 ℃组蜱卵和饱血幼虫置于15 ℃下可完成孵化,但饱血若虫和成虫未完成孵化,并于2周内全部死亡。25 ℃组与20 ℃组和30 ℃组蜱的发育周期差异均有统计学意义(t=4.250,P<0.05;t=24.630,P<0.05),不同温度下血红扇头蜱各发育历期见表 1

表 1 温度对血红扇头蜱各发育历期(d)的影响(x±s Table 1 Effects of temperature on the life cycle of Rh. sanguineus (x±s

将蜱发育历期转换为VT做二项式拟合曲线,y=-0.000 047x2+0.002 716x-0.026 882,计算出发育零点温度为12.7 ℃,发育历期高点温度为28.5 ℃。

2.2 温度对血红扇头蜱产卵的影响

饱血成蜱在30、25和20 ℃温度下平均产卵量分别为1 178、1 246和1 356枚,每天的产卵量见图 1;各组间产卵量差异无统计学意义(t<0.810,P>0.05)。

图 1 不同温度下血红扇头蜱的产卵量 Figure 1 The amount of Rh. sanguineus spawned eggs at different temperature
2.3 血红扇头蜱吸血前后体质量变化

血红扇头蜱在吸血时,体质量成倍增长。幼蜱、若蜱和成蜱附着在宿主体表,初期吸血缓慢,体质量变化较小,饱血前24 h内增加,见表 2

表 2 各发育阶段血红扇头蜱吸血前后体质量变化(x±s Table 2 The weight variance of prefeeding and engorged Rh. sanguineusx±s
3 讨论

血红扇头蜱为世界性广泛分布蜱种,属于三宿主蜱,在我国大多数地区均有发现,主要寄生于犬等动物,人为其潜在宿主。蜱在动物体表广泛寄生并经常更换宿主,可将动物疾病传播给人类。因此,蜱在传播自然疫源性疾病中起重要作用,并严重威胁公共卫生安全。

蜱的发育过程受温度、湿度和光周期等条件的影响,温度是重要因素之一。在自然条件下1年可发育1~2个世代。当家畜感染严重时可致被感染的动物消瘦贫血[7]。Ali等[8]研究表明,血红扇头蜱完成1个世代需127.9 d。本研究表明,在人工饲养合适条件下血红扇头蜱能正常繁殖传代,同一株血红扇头蜱4年中完成了11代的繁殖。在25 ℃条件下完成1个世代需87 d左右。

将血红扇头蜱置于5 ℃条件,温度降低,其寿命显著延长[8]。但达到一定温度后发育反而受抑制,说明蜱的发育存在高温临界值[9]。本研究发现在15 ℃下血红扇头蜱无法完成正常传代,提示可能进入滞育阶段。>15 ℃时发育周期随温度升高而缩短,主要因温度升高增加其代谢速度,并提高营养物质的吸收与利用。本研究采用有效积温法则和拟合二项式模型方法,对血红扇头蜱的发育零点温度和有效积温等进行测算,其发育零点温度为12.7 ℃,发育高点温度为28.5 ℃,与实验结果有一定差异,表明预测模型有待进一步探讨。且蜱在恒温培养箱中与外界变温条件下的发育状态可能不同,其在自然环境中的发育情况有待验证。

袁改玲等[10]研究发现青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensis)产卵量随温度升高而减少。本研究发现蜱进入非活动期后,在30 ℃产卵量较少,产卵期较短,随温度下降产卵期相应延长,产卵量增加,但各温度组间产卵量差异无统计学意义。人工饲养环境中血红扇头蜱不同发育阶段吸血后体质量均成倍增加,若蜱吸血前后的增重倍数最高,与Dantas-Torres和Otranto[11]、Eiden等[12]报道一致。经过5年的实验室观察研究,基本掌握了血红扇头蜱生物学特性和正常饲养繁殖方法,为深入研究蜱传播疾病和致病机制提供了依据。

参考文献
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