莱姆病（Lyme disease）是由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）感染而引起的自然疫源性疾病，也是人兽共患传染病，主要经蜱叮咬人、兽而传播，人感染后可以引起多系统、多器官损害，临床表现为脑膜炎、关节炎、神经根炎、慢性萎缩性肢皮炎和心肌炎等。全球五大洲均有本病发生，已被WHO列为需重点加以防治研究的疾病之一^[1-2]。我国自1986年在黑龙江省海林县首次报告发现莱姆病病例以来，血清流行病学调查表明至少30个省（直辖市、自治区）的人群存在伯氏疏螺旋体感染，部分地区人群中有典型病例存在，并且从20个省（直辖市、自治区）的患者、蜱、鼠中分离到伯氏疏螺旋体，证实为莱姆病自然疫源地^[3-6]。

山西省位于我国中东部，省内大部分为山区和丘陵。山西省人群、媒介和宿主动物均存在莱姆病感染，2012年山西省大同市天镇县出现1例典型莱姆病患者^[7-9]。2014年山西省CDC上报吕梁地区方山县南阳沟林场1例典型莱姆病病例，2015年中国CDC传染病预防控制所和当地CDC人员对该地区进行了莱姆病传播媒介调查，现将结果报告如下。

2015年在吕梁市方山县南阳沟林场野外采用人工小时布旗法捕蜱^[4]，将采集蜱放至透气、有一定湿度的瓶中带回实验室进行鉴定^[10]。

将蜱用无菌的蒸馏水洗涤（去除蜱表面灰尘和杂物），滤干水后放入75%乙醇中浸泡消毒30 min，然后用0.9%NaCl及蒸馏水各冲洗数次，置于消毒滤纸上待干燥，每组5~10只，放入组织研磨器中，加0.5 ml BSKⅡ培养基，研磨后，吸取0.1 ml加入到含有5 ml BSKⅡ培养基的小试管中，于33 ℃培养，培养后每周检查1次，连续2个月培养仍为阴性则弃去。

取对数生长期的菌液10 ml，12 000×g，离心30 min。用pH 7.4磷酸盐缓冲液洗3次，每次15 min。将沉淀悬于100 μl TE中，-20 ℃备用。

水煮法制备全基因组DNA。

引物合成由生工生物工程（上海）股份有限公司完成，序列见表 1。PCR扩增反应体系总体积50 μl：2×TaqPCR Master Mix 25 μl，50 μmol/L primer1 1 μl，50 μmol/L primer2 1 μl，模板DNA 1 μl，H₂O 22 μl。预变性94 ℃5 min；变性94 ℃ 45 s；退火55 ℃ 45 s；延伸72 ℃ 45 s。共35个循环。最后延伸72 ℃ 5 min。吸取5 μl PCR产物，于2%琼脂糖凝胶电泳，100 V，1 h。采用紫外凝胶成像仪读胶成像。序列测定由华大基因（BGI）和北京六合通经贸有限公司完成。采用DNAStar和Mega 5.0软件共同完成，树状图距离根据Neighbor-Joining（NJ）法计算。

表 1 7个位点的引物序列 Table 1 Primers of 7 loci

表选项

在吕梁市方山县南阳沟林场共采蜱约300只。其中全沟硬蜱（Ixodes persulcatus）约250只，为优势蜱种；嗜群血蜱（Haemaphysalis concinna）45只，边缘革蜱（Dermacentorm marginatus）5只。

从全沟硬蜱和嗜群血蜱中分离到2株菌，分别命名为SX12和SX22。与51株参考菌株进行MLSA分型鉴定^[4]，均为Borrelia garinii基因型菌株。SX22与我国黑龙江省菌株HS2、HS3及日本参考菌株ASF聚为一支，SX12则单独一个分支，见图 1。

图 1 山西省吕梁地区分离菌株的MLSA鉴定 Figure 1 MLSA analysis of isolates from Lyuliang in Shanxi province

图选项

南阳沟林场位于山西省吕梁市方山县积翠乡以东10 km处，山上森林茂密，植被覆盖面积为38.2 km²，是山西省最大且保存最完好的森林公园，也是山西省著名旅游景区。本次调查从全沟硬蜱和嗜群血蜱中均分离到伯氏疏螺旋体，证明该地区为莱姆病自然疫源地，是山西省首次分离到伯氏疏螺旋体菌株。经MLSA分型鉴定，两株菌均为Borrelia garinii基因型，该基因型为我国伯氏疏螺旋体的主要致病基因型之一，主要分布在我国北方地区^[3-4]。且该基因型主要与人神经性莱姆病有关^[11]。

因该地区存在莱姆病典型病例，应重视莱姆病的预防。在林区工作、生活的居民及旅游人群均应采取综合性预防措施，以环境防护和个人防护相结合，避免被蜱叮咬。同时当地疾控部门和临床相关工作人员应提高对莱姆病的认识，对明确有蜱叮咬史的患者进行莱姆病相关检测，以便早期诊断，积极治疗。