山西省吕梁地区莱姆病自然疫源地调查研究
  中国媒介生物学及控制杂志  2017, Vol. 28 Issue (6): 550-552

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侯学霞, 张琳, 李国华, 郝琴
HOU Xue-xia, ZHANG Lin, LI Guo-hua, HAO Qin
山西省吕梁地区莱姆病自然疫源地调查研究
Investigation on natural foci of Lyme disease in Lyuliang area, Shanxi province
中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(6): 550-552
Chin J Vector Biol & Control, 2017, 28(6): 550-552
10.11853/j.issn.1003.8280.2017.06.008

文章历史

收稿日期: 2017-08-15
网络出版时间: 2017-10-10 13:35
山西省吕梁地区莱姆病自然疫源地调查研究
侯学霞1, 张琳1, 李国华2, 郝琴1     
1 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所, 传染病预防控制国家重点实验室, 北京 102206;
2 山西省疾病预防控制中心, 太原 030012
摘要: 目的 对山西省吕梁市方山县南阳沟林场进行莱姆病传播媒介调查,明确是否存在莱姆病自然疫源地。方法 2015年采用布旗法在方山县南阳沟林场捕蜱,鉴定后采用BSKⅡ培养基对其进行分离培养;采用多位点序列分析(MLSA)法对分离菌株进行分型鉴定。结果 共采蜱约300只,包括全沟硬蜱、嗜群血蜱和边缘革蜱,其中全沟硬蜱为当地优势蜱种。从全沟硬蜱和嗜群血蜱中分离出2株伯氏疏螺旋体菌株,经MLSA鉴定为Borrelia garinii基因型。结论 山西省吕梁市方山县南阳沟林场为莱姆病自然疫源地。应加强对当地人群、媒介及宿主的调查,为防控莱姆病提供科学依据。
关键词: 莱姆病     媒介     自然疫源地    
Investigation on natural foci of Lyme disease in Lyuliang area, Shanxi province
HOU Xue-xia1, ZHANG Lin1, LI Guo-hua2, HAO Qin1     
1 State Key Laboratory of Infectious Disease Prevention and Control, National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China;
2 Shanxi Center for Disease Control and Prevention
Supported by the National Science and Technology Major Project of China (No. 2016ZX10004001-004)
Corresponding author: HAO Qin, Email:haoqin@icdc.cn
Abstract: Objective Investigateon on vectors was carried out to identify the natural foci of Lyme disease in Nanyanggou forest area of Fangshan county of Lyuliang, Shanxi province. Methods Flagging and trapping methods were used to collect ticks, BSKⅡ media was used to isolate Lyme spirochetes from ticks. MLSA method was used to genotype the isolates. Results About 300 ticks were collected from Nanyanggou forest area, including Ixodes persulcatus, Haemaphysalis concinna, and Dermacentorm marginatus. Ixodes persulcatus was the predorminant species, which was accounted for 80% among the ticks. Two strains were isolated from I. persulcatus and H. concinna, respectively. MLSA analysis showed that 2 strains isolated from ticks belonged to Borrelia garinii. Conclusion There exists natural foci of Lyme disease in Lyuliang, Shanxi province. Detailed survey on people, vector and rodents should be carried out to provide data for prevention and control of Lyme disease in this area.
Key words: Lyme disease     Vector     Natural foci    

莱姆病(Lyme disease)是由伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)感染而引起的自然疫源性疾病,也是人兽共患传染病,主要经蜱叮咬人、兽而传播,人感染后可以引起多系统、多器官损害,临床表现为脑膜炎、关节炎、神经根炎、慢性萎缩性肢皮炎和心肌炎等。全球五大洲均有本病发生,已被WHO列为需重点加以防治研究的疾病之一[1-2]。我国自1986年在黑龙江省海林县首次报告发现莱姆病病例以来,血清流行病学调查表明至少30个省(直辖市、自治区)的人群存在伯氏疏螺旋体感染,部分地区人群中有典型病例存在,并且从20个省(直辖市、自治区)的患者、蜱、鼠中分离到伯氏疏螺旋体,证实为莱姆病自然疫源地[3-6]

山西省位于我国中东部,省内大部分为山区和丘陵。山西省人群、媒介和宿主动物均存在莱姆病感染,2012年山西省大同市天镇县出现1例典型莱姆病患者[7-9]。2014年山西省CDC上报吕梁地区方山县南阳沟林场1例典型莱姆病病例,2015年中国CDC传染病预防控制所和当地CDC人员对该地区进行了莱姆病传播媒介调查,现将结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 蜱的采集和鉴定

2015年在吕梁市方山县南阳沟林场野外采用人工小时布旗法捕蜱[4],将采集蜱放至透气、有一定湿度的瓶中带回实验室进行鉴定[10]

1.2 伯氏疏螺旋体分离培养

将蜱用无菌的蒸馏水洗涤(去除蜱表面灰尘和杂物),滤干水后放入75%乙醇中浸泡消毒30 min,然后用0.9%NaCl及蒸馏水各冲洗数次,置于消毒滤纸上待干燥,每组5~10只,放入组织研磨器中,加0.5 ml BSKⅡ培养基,研磨后,吸取0.1 ml加入到含有5 ml BSKⅡ培养基的小试管中,于33 ℃培养,培养后每周检查1次,连续2个月培养仍为阴性则弃去。

1.3 多位点序列分析(MLSA)[3] 1.3.1 菌株的收集

取对数生长期的菌液10 ml,12 000×g,离心30 min。用pH 7.4磷酸盐缓冲液洗3次,每次15 min。将沉淀悬于100 μl TE中,-20 ℃备用。

1.3.2 全基因组DNA的制备

水煮法制备全基因组DNA。

1.3.3 PCR

引物合成由生工生物工程(上海)股份有限公司完成,序列见表 1。PCR扩增反应体系总体积50 μl:2×TaqPCR Master Mix 25 μl,50 μmol/L primer1 1 μl,50 μmol/L primer2 1 μl,模板DNA 1 μl,H2O 22 μl。预变性94 ℃5 min;变性94 ℃ 45 s;退火55 ℃ 45 s;延伸72 ℃ 45 s。共35个循环。最后延伸72 ℃ 5 min。吸取5 μl PCR产物,于2%琼脂糖凝胶电泳,100 V,1 h。采用紫外凝胶成像仪读胶成像。序列测定由华大基因(BGI)和北京六合通经贸有限公司完成。采用DNAStar和Mega 5.0软件共同完成,树状图距离根据Neighbor-Joining(NJ)法计算。

表 1 7个位点的引物序列 Table 1 Primers of 7 loci
2 结果 2.1 蜱的鉴定

在吕梁市方山县南阳沟林场共采蜱约300只。其中全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)约250只,为优势蜱种;嗜群血蜱(Haemaphysalis concinna)45只,边缘革蜱(Dermacentorm marginatus)5只。

2.2 MLSA分型鉴定

从全沟硬蜱和嗜群血蜱中分离到2株菌,分别命名为SX12和SX22。与51株参考菌株进行MLSA分型鉴定[4],均为Borrelia garinii基因型菌株。SX22与我国黑龙江省菌株HS2、HS3及日本参考菌株ASF聚为一支,SX12则单独一个分支,见图 1

图 1 山西省吕梁地区分离菌株的MLSA鉴定 Figure 1 MLSA analysis of isolates from Lyuliang in Shanxi province
3 讨论

南阳沟林场位于山西省吕梁市方山县积翠乡以东10 km处,山上森林茂密,植被覆盖面积为38.2 km2,是山西省最大且保存最完好的森林公园,也是山西省著名旅游景区。本次调查从全沟硬蜱和嗜群血蜱中均分离到伯氏疏螺旋体,证明该地区为莱姆病自然疫源地,是山西省首次分离到伯氏疏螺旋体菌株。经MLSA分型鉴定,两株菌均为Borrelia garinii基因型,该基因型为我国伯氏疏螺旋体的主要致病基因型之一,主要分布在我国北方地区[3-4]。且该基因型主要与人神经性莱姆病有关[11]

因该地区存在莱姆病典型病例,应重视莱姆病的预防。在林区工作、生活的居民及旅游人群均应采取综合性预防措施,以环境防护和个人防护相结合,避免被蜱叮咬。同时当地疾控部门和临床相关工作人员应提高对莱姆病的认识,对明确有蜱叮咬史的患者进行莱姆病相关检测,以便早期诊断,积极治疗。

参考文献
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