微小按蚊（Anopheles minimus）在我国南部和东南亚特别是湄公河流域国家广泛分布，是该地区疟疾流行的主要传播媒介^[1-6]，为国内外媒介生物学和疟疾防治研究的热点^[7-8]。云南省作为我国疟疾的高流行区，多年来采取以传染源控制和媒介防制结合的疟疾防治策略，针对微小按蚊采取了有效的控制措施，疟疾发病率逐年下降^{[3, 9]}。自2010年以来，随着我国消除疟疾项目的启动，该地区疟疾病例数从2010年的729例下降至2015年的21例^[10-11]。在有效控制疟疾传播的同时，对输入性疟疾引起的继发传播风险逐渐被关注^[12-14]。特别是中国-缅甸（中缅）边境地区，毗邻缅甸一侧疟疾流行严重，跨境人口流动频繁且存在高效传疟媒介，成为我国消除疟疾的重点和难点区域，也是进行疟疾传播风险评估研究的热点地区^[15-22]。随着疟疾疫情不断减少，2010年消除疟疾项目启动后，该地区仍持续开展疟疾防治研究和监测，但关于主要传疟媒介（如微小按蚊）分布及其生态习性的调查较少。因此，通过对云南省中缅边境地区微小按蚊种群密度及其生态习性进行现场调查和实验室检测，为该地区疟疾传播风险评估和消除后疟疾监测提供科学依据。

选择位于云南省中缅边境地区的腾冲市（98°05′~98°45′E、24°38′~25°52′N），采用点面结合法在25° N以南，沿龙川江流域选择芒棒、五合、团田、蒲川和新华乡作为研究现场，每个乡选取2个自然村作为媒介调查点。

于2015年5月下旬至12月下旬采用诱蚊灯诱捕法在每个自然村不同方位设置人房和牛房各3处作为调查点，日落前（约20：00）挂灯，次日日出（约06：00）收灯。将捕获的成蚊用氯仿麻醉后进行形态学鉴定和登记，并将标本用EP管单管收集，带回实验室进行分子生物学鉴定。每月上下旬各监测1次，连续监测7个月。

以定人、定时、定点原则，在调查点所在的自然村每村布点3处（村内2处、村外1处），采用双帐人诱法监测。在人诱点附近50 m处选择开放式牛房1处同时进行观察。自日落（20：00）至次日日出（06：00）每小时捕蚊1次并计数。每月上下旬各监测1次。

在调查点所在的自然村内，于日出后（08：00-09：00）选择人房15间、牛房5间进行人工全捕，将捕获的饱血按蚊立即用氯仿处死后进行干燥，装入EP管，带回实验室，采用多重PCR方法进行胃血来源鉴定^[23-26]。

采用定人、定时、定点的捕捞法，选择水源比较稳定的水体作为调查点，在孳生地边缘或有遮阴的缓流处捞取10~20勺，每勺捞取1 m宽水面蚊幼虫，以每勺捞取的蚊幼虫和蛹数作为蚊密度（条/勺）。对捕获的1~3龄蚊幼虫记录密度，4龄蚊幼虫进行形态学鉴定后记录密度。

共捕获按蚊4 089只，经形态学鉴定分别为中华按蚊（An. sinensis）、微小按蚊、带足按蚊（An. peditaeniatus）、库态按蚊（An. culicifacies）、美彩按蚊（An. splendidus）、银足按蚊（An. argyropus）和多斑按蚊（An. maculatus）共7种，以中华按蚊（2 055/4 089，50.26%）、带足按蚊（1 315/ 4 089，32.16%）和微小按蚊（563/4 089，13.77%）为优势种；在人房和牛房分别捕获微小按蚊182和381只，见表 1。微小按蚊密度高峰出现在9月，牛房和人房微小按蚊密度分别为32.70和12.20只/（灯·夜）；牛房微小按蚊密度始终高于人房，见图 1。

表 1 2015年5-12月腾冲市不同场所按蚊构成及其种群密度季节消长 Table 1 Seasonal fluctuation and population density of adult mosquitoes in different places

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图 1 腾冲市微小按蚊成蚊密度季节消长 Figure 1 Seasonality of An. minimus adult population density

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微小按蚊在日落后通宵均有吸血活动，以牛房为主，人房与牛房捕获吸血活动的微小按蚊比例为1:10。吸血活动出现2个高峰，分别在23：00和02：00，见图 2。微小按蚊叮人率以9月下旬最高，达2.0只/（人·夜），见图 3。

图 2 微小按蚊夜间吸血活动时间变化 Figure 2 Active time of An. minimus host seeking behavior

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图 3 微小按蚊叮人率季节变化 Figure 3 Seasonal fluctuation of An. minimus human bite rate

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检测微小按蚊胃血42份，其中猪源血22份，人畜（猪或牛）混合血液各6份，人源血和牛源血各4份，微小按蚊偏吸牲畜血液，人血指数为0.23（图 4）。

注：M.分子质量标准；1~10.蚊胃血；犬、猪、牛、人.血阳性对照；Mix.混合阳性对照。 图 4 微小按蚊胃血PCR检测结果 Figure 4 PCR results for blood meal sources in An. minimus

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在孳生地共捕获微小按蚊幼虫423条，其中池塘、水沟和稻田分别为266、40和117条，见表 2。在海拔1 200~1 300 m附近地区微小按蚊幼虫密度较高，见表 2。

表 2 不同海拔的微小按蚊幼虫数量 Table 2 Larval density of An. minimus in different altitudes

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微小按蚊作为云南省的主要传疟媒介，是我国疟疾防治研究重点关注的蚊种之一^[27]。新中国成立以来，我国学者对微小按蚊开展了深入详细的调查研究，关于其地理分布、生态习性及传疟作用等均有报道^{[1, 28-33]}，为制定有针对性的疟防措施提供了科学依据。随着我国疟疾流行的逐渐减弱，本地疟疾病例数持续大幅下降，传疟媒介相关研究也相应减少。同时，随着我国消除疟疾工作的不断深入推进，本地疟疾的流行区域进一步缩小^{[10, 34]}。因此，疟疾监测和再传播风险评估成为重点工作。国内已开展的疟疾风险评估研究资料多采取定性或半定量方法^{[22, 35-37]}，以弥补媒介资料的缺失。

腾冲市位于我国云南省西部，是云南省与缅甸接壤的25个边境县之一，曾为疟疾高流行区，微小按蚊是该地区低海拔区域的主要传疟媒介^{[1, 38]}。通过实施以媒介控制措施为主的疟疾防治策略^[3]，腾冲市疟疾流行得到有效控制，自2013年已连续3年无本地疟疾病例报告，但输入性疟疾病例报告数仍较多，以县为单位的报告病例数居全国前列^{[10, 12, 15]}。

本调查发现，腾冲市微小按蚊种群密度和叮人率与文献比较有所下降^{[1, 39-41]}，且更偏吸牲畜血。同时，微小按蚊构成比也有所下降，仅为13.77%，曾有报道最高为61.68%^{[1, 38]}，该结果与同期媒介监测结果一致^[42]，可能是当地疟疾流行大幅下降的原因。本研究发现，在相对较静止的孳生环境（池塘），微小按蚊数量多于有流动水的孳生环境（水稻田和溪沟），与文献报道的微小按蚊孳生地多在有遮阴的缓流和水稻田有所不同^{[3, 39]}，可能与当地水田及森林面积减少，而种植烟草和经济类植物的旱地增加有关。需进一步开展土地利用和覆盖状况对微小按蚊生态习性影响的研究，为该地区微小按蚊的监测、防治及疟疾传播风险评估提供参考。

腾冲市微小按蚊偏吸牲畜血，说明当前人蚊接触的风险较低。随着当地经济的发展、耕作制度的改变及水牛等大型牲畜数量逐渐减少或地区生物屏障发生变化，可能导致微小按蚊叮人习性的改变，在今后的监测中也应加强关注。