蜱作为重要的媒介节肢动物之一，其刺叮宿主、吸食血液，不仅造成血液损失，在刺伤处形成溃疡，引发过敏反应和毒素伤害，并可传播人兽共患疾病，蜱传疾病已成为全球关注的重要公共卫生问题^[1-2]。目前，我国的蜱类已有2科10属117种^[3]，在西藏地区分布2科9属41种^[4]。西藏自治区作为与尼泊尔接壤的边境地区，随着中国与周边国家的商贸往来日益频繁，存在蜱传疾病的传播风险。因此，开展西藏地区蜱媒携带病原体的调查研究，对加强我国口岸地区传染病疫情监测，防范蜱传疾病跨境传播具有重要意义。

选取西藏地区的樟木口岸为调查点，根据其地形和植被特点，选择草地、草原、灌木、林区、林缘、河滩灌木丛草地、荒漠化草原、针阔混交林、林缘草地针阔混交林和针叶林边草地等生境作为调查地点。

2012-2014年在樟木口岸的各类生境中采用人工布旗法采集游离蜱。在口岸附近地区，随机抽取一定数量家畜（牛、羊、犬），从其体表采集寄生蜱，并进行分类鉴定。

无菌操作每只蜱用75%乙醇浸泡20 min后，用pH 7.4的PBS缓冲液漂洗3次，分装于2 ml的EP管中，加入500 μl PBS缓冲液，研磨后分别取60和140 μl的组织研磨液，按试剂盒说明书提取基因组DNA和RNA。

以提取的DNA为模板，按表 1的引物进行PCR扩增，检测立克次体（Rickettsia）和贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii）。扩增反应体系包括Taq DNA聚合酶0.5 μl，10×PCR Buffer 5 μl，dNTPs mixture 4 μl，10 μmol/L的上、下游引物各1 μl，模板DNA 2 μl，补充无菌水使总体积达到50 μl。94 ℃预变性5 min，然后按照表 1列出的扩增条件进行PCR循环，最后72 ℃延伸5 min。贝氏柯克斯体第2次PCR反应体系与第1次相同，模板为3.0 μl的第1次PCR产物。

表 1 蜱类样本的PCR反应条件 Table 1 The PCR reaction conditions for tick samples

表选项

以提取的RNA为模板进行反转录，8 μl模板RNA和2 μl随机引物95 ℃孵育2 min，冰浴10 min，加入15 μl反转录缓冲液（含200 μmol/L dNTPs、20 U RNAsin、10 U AMV反转录酶）42℃孵育1.5 h，72℃ 10 min。取2 μl反转录产物进行PCR扩增，用于检测森林脑炎病毒，按照表 1的引物和扩增条件进行PCR扩增，反应体系同PCR扩增。

2012-2014年在西藏樟木口岸各类生境共采集蜱1 779只，隶属于2属3种，分别为尼泊尔血蜱（Haemaphysalis nepalensis）、台湾血蜱（H. formosensis）和微小扇头蜱（Rhipicephalus microplus），各采样点蜱的分布见图 1。

图 1 西藏樟木口岸蜱的分布 Figure 1 Tick species distribution of Zhangmu ports in Tibet

图选项

送检蜱样本232份，其中微小扇头蜱、尼泊尔血蜱和台湾血蜱分别为86、69和5份，另有72份蜱样本未进行分类。病原体总阳性率为8.19%（19/232）。其中11份样本检出巴尔通体，包括台湾血蜱3份、微小扇头蜱6份和未分类蜱2份；5份样本检出立克次体，包括台湾血蜱2份和未分类蜱3份；3份检出伯氏疏螺旋体，总阳性率为1.29%（3/232）。微小扇头蜱是伯氏疏螺旋体的主要传播媒介，见表 2。

表 2 西藏樟木口岸蜱携带病原体情况 Table 2 The pathogens harbored by tick species in Zhangmu ports in Tibet

表选项

随着社会经济发展，环境与生态的变迁，新发传染病逐渐成为全球经济和公共卫生重点^[5-6]。自然疫源地疾病和媒介传播疾病在新发传染病中占有重要地位^[7]。蜱作为重要的媒介生物，广泛寄生于多种脊椎动物，吸血时可获得并传播病原体，多分布在开阔的自然界，如森林、灌木丛、草原及半荒漠地带，在我国蜱呈点状和带状分布^[8]。由于西藏地区情况特殊，对该地区媒介传染性疾病的研究较少^[9]。本次西藏地区送检样本的伯氏疏螺旋体总阳性率为1.29%，与张大荣等^[10]采用免疫荧光法对林芝地区的136名藏族居民血清进行伯氏疏螺旋体IgG抗体检测，检出可疑阳性3份，确诊2份，阳性率分别为2.21%和1.47%的结果相近，但是该研究仅从人体血清携带IgG抗体的角度分析，并未提及该病原体由何种蜱或何种媒介生物传播，因此，伯氏疏螺旋体在该地区的分布情况仍有待进一步研究。本研究结果证实微小扇头蜱是伯氏疏螺旋体的主要蜱类传播媒介。

立克次体为东北地区优势病原体，但西藏地区感染立克次体或流行病学研究较少^[11]。根据黄鹏^[12]对藏南地区124份正常人血清检测发现斑疹伤寒（普氏立克次体）阳性率为4.03%（5/124），该研究结果与本次调查的立克次体总阳性率（2.16%）较为相近，证实了藏南地区有立克次体感染。对西藏边境口岸145名尼泊尔人进行立克次体的血清抗体检测，阳性率为8.28%（12/145）。西藏地区蜱传立克次体的感染情况仍有待深入研究。

此前西藏地区从未有巴尔通体相关的文献报道^[13]，与西藏地区经纬度相似、气候及地形地貌相近的青海地区在2013年发现存在巴尔通体，但其宿主为蚤类^[14]。栗冬梅等^[15]于2005年在微小扇头蜱中分离出巴尔通体1株，且该蜱寄生于云南省的牛体，提示我国西南地区蜱可能传播病原体而感染人类。本次调查为首次在我国西藏地区分离出巴尔通体，且分布于台湾血蜱和微小扇头蜱及未分类的蜱，该两种蜱均为巴尔通体的传播媒介。但西藏地区巴尔通体的感染、流行及传播等仍有待深入探究。