麻蝇是一种潜在的病原生物的传播媒介^[1-2]。传统麻蝇的鉴定主要根据其形态特征，特别是雄性个体的外生殖器，被视为种类鉴定的金标准^[3-6]。而雌性麻蝇的形态鉴定非常复杂，不同种类雌性麻蝇个体间外部形态极为相似，仅根据其外部形态很难准确地鉴定^[7]。

DNA条形码技术利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ），为多细胞动物种类鉴定的参考标志^[8]。自2003年Hebert等^[9]提出DNA条形码概念以来，COⅠ基因已广泛地应用于多种动物的种类鉴定^[10-13]，且非常有效^[14-15]。DNA条形码正在实施一个全球性的iBOL计划^[16]。相同物种雌雄个体DNA条形码序列变异并未超过种内变异范围，通过比对雌雄性个体的DNA序列，可以准确地鉴定雌性个体。尽管大多研究者建议完全取消形态学鉴定，但其依然被使用且在短时期内无法被取代^[17]。“整合分类学”^[18-19]或DNA条形码数据与形态特征相结合的分类学方法，将促进传统分类学的研究发展^[20]。

2011年10月25日至2013年10月27日，以腐鱼作诱饵用诱捕笼或者昆虫网共采集8种麻蝇127只，包括35对正在交配的蝇类〔其中6对白头亚麻蝇（Parasarcophaga albiceps），2对拉萨细麻蝇（Pierretia lhasae），4对波突亚麻蝇（P. jaroschevskyi），4对绯角亚麻蝇（P. ruficornis），7对多突亚麻蝇（P. polystylata），4对野亚麻蝇（P. similis），4对酱亚麻蝇（P. dux）和4对短角亚麻蝇（P. brevicornis）〕。将麻蝇置95%乙醇中或制成针插标本，标本存放在国家质检总局医学媒介生物监测重点实验室（中山）。

每只蝇各取1条后足放入1.5 ml离心管中，用200 μl PBS缓冲液洗2次，置入95%乙醇中。拔掉后腿的蝇标本做成针插的凭证标本，做好唯一性标识，保存于国家质检总局医学媒介生物监测重点实验室（中山），备用。基因组DNA的提取、扩增、PCR产物纯化及测序按文献^[21]操作。扩增引物：LCO1490：5′-GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G-3′；HCO2198：5′-TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA-3′^[22]。由宝生物工程（大连）有限公司合成。EX-Taq DNA 聚合酶、dNTP 及其他PCR 试剂均购自宝生物工程（大连）有限公司。

8种雌性麻蝇的35对配对个体70条COⅠ序列，57条雄性个体的COⅠ序列和11条来自GenBank的性别未知个体的序列，共138条构建Neighbor-Joining（NJ）树。138条序列的凭证标本采集信息、雌雄及GenBank序列号见表 1。GenBank中无拉萨细麻蝇和波突亚麻蝇的序列，均为原始获得。利用Mega 6.0软件构建 NJ树，重复步数为5 000。

表 1 138条分析序列信息 Table 1 Details of the 138 sequences used in the analysis

表选项

雄性个体的种类鉴定依据《中国蝇类》检索表进行鉴定，并经过专家确认。雌性个体的种类通过与之交配的雄性个体进行确认。分类术语依照文献^{[3, 5, 23]}。

所有个体COⅠ片段均为658 bp，无终止密码子、插入或缺失片段，可无间断地翻译成219个氨基酸，各碱基的平均含量为A（30.0%）、T（38.0%）、G（15.9%）、C（16.1%），（A＋T）的平均含量为68.0%，高于（G＋C）的含量（32.0%），与其他线粒体序列的碱基含量基本一致^[24-26]。

8种麻蝇中配对的雌性和雄性个体间最大的种内差异为1.37%，＜2%，同种雌雄性个体间的碱基差异范围与同种间个体间的差异范围一致，不同种间的变异范围为4.56%～8.81%，高于种类鉴定界限（2%），种内个体间与种间有明显的差异间隔。8个种的同种两性间和种间的碱基对差异见表 2和图 1。

表 2 8种麻蝇的DNA条形码种内不同个体、雌雄个体间和种间的序列差异 Table 2 The differences of the intra-species,inter-sexes,and inter-species of the studied 8 species

表选项

图 1 种内个体间、雌雄个体间及种间DNA条形码序列碱基差异度比较 Figure 1 Intra-species,inter-sexes and inter-species differences of the DNA barcodes

图选项

所有雌雄性个体和同种内未知雌雄的个体聚在同一个分支，置信度为100%，结果与形态学分类完全一致，见图 2。

图 2 8种麻蝇138只个体的DNA条形码序列构建的NJ树 Figure 2 Neighbor-Joining based on the DNA barcodes of the 138 individuals of 8 species

图选项

1. 子宫骨片强烈骨化，结构空间立体感强，外形呈两熊合抱状，中部具1个膜状小窝（图 3a）

注： a. 拉萨细麻蝇〔S （P）. lhasae〕； b. 绯角亚麻蝇〔S （P）. ruficornis〕； c. 多突亚麻蝇〔S （P）. polystylata〕； d. 野亚麻蝇〔S （P）. similis〕； e. 白头亚麻蝇 〔S （P）. albiceps〕； f. 短角亚麻蝇〔S （P）. brevicornis〕； g. 波突亚麻蝇〔S （P）. jaroschevskyi〕； h. 酱亚麻蝇〔S （P）. dux〕。 图 3 8种麻蝇的子宫骨片形态特征 Figure 3 Signum morphological characteristics of 8 species

图选项

…………………………拉萨细麻蝇S（P）. lhasae子宫骨片扁平或具轻微的立体感，绝不呈现上述外形………………………………………………2

2. 子宫骨片骨化较弱，较柔软色浅………………3

子宫骨片强烈骨化，深色或浅色………………4

3. 子宫骨片三角状，前端部分内卷（图 3b）

……………………绯角亚麻蝇S （P）. ruficornis子宫骨片梯形，后缘中部具有1个突起（图 3c）

……………………多突亚麻蝇S （P）. polystylata

4. 子宫骨片浅色，瓶状，微拱起（图 3d）

……………………………野亚麻蝇S （P）. similis

子宫骨片深褐色或者黑色，交替出现浅色骨化带……5

5. 子宫骨片具数条清晰的浅色骨化带……………6

子宫骨片黑褐色，不具浅色骨化带，2片（图 3e）

………………………白头亚麻蝇S （P）. albiceps

6. 子宫骨片长明显长于宽，基部骤窄，具3个骨化条带和1个板状的基部宽带，第1条骨化带最宽，基部的板状带骨化强烈（图 3f）

……………………短角亚麻蝇S （P）. brevicornis

子宫骨片宽度大于长度，具6条骨化带，其中1条或者3条断裂（图 3g，3h）………………………7

7. 子宫骨片具3条完整的骨化带和3条断裂的骨化带，最后1条骨化带呈“V”形，子宫骨片前缘的凹陷宽浅（图 3g）……波突亚麻蝇S （P）. jaroschevskyi

子宫骨片具5条完整骨化带和1条断裂骨化带，前缘具有1个乳状突起（图 3h）

…………………………………酱亚麻蝇S （P）. dux

雄性外生殖器的形态特征是麻蝇种类鉴定的金标准，但雌性麻蝇的形态鉴定存在困难，Povoln--和Verves^[23]首次指出不同种雌性麻蝇间的子宫骨片形态特征差异较大，为根据子宫骨片的特征鉴定雌性麻蝇提供了可能。目前仅少数研究提及子宫骨片的特征但并无明确的表述^{[5, 27]}。

8种麻蝇DNA条形码的种内最大差异远低于2%的限值，而种间最小差异高达4.56%，明显高于2%的限值，与麻蝇种间差异高于3%的报道一致^[28]。麻蝇分布广泛且种类繁多，该文限于在中国收集的8种麻蝇，将子宫骨片普遍作为雌性麻蝇种类鉴定的依据，应加强研究其他种类雌性麻蝇子宫骨片的结构。