宁夏六盘山境内地理景观丰富多样。从南至北，生态环境包括西北地区草原、森林、农田等所有的生态类型。多样的生态环境形成了啮齿动物种类的多样性。宁夏六盘山记录的啮齿动物有23种，其中兔形目3种，啮齿目20种^[1]。丰富的啮齿动物种类，导致宁夏地区为多种鼠传疾病的自然疫源地。宁夏回族自治区东北部属于内蒙古高原长爪沙鼠（Meriones unguiculatus）鼠疫疫源地^[2]，六盘山生态经济圈的南华山和月亮山则属于甘宁黄土高原阿拉善黄鼠（Spermophilus alaschanicus）鼠疫疫源地^[3]，六盘山南麓则存在姬鼠型的肾综合征出血热（HFRS）自然疫源地^[4]。对啮齿动物为主的小型兽类准确分类和科学防治是宁夏多种重要传染病预防和控制的基础。为提高宁夏地区啮齿动物的分类鉴定水平，采集小型兽类标本，利用DNA条形码技术对啮齿动物进行鉴定，现将结果报告如下。

2015年在宁夏六盘山地区原州区和泾源县等不同生境采集小兽标本。

使用QIAGEN DNeasy Blood & Tissue Kit试剂盒提取肝脏或肌肉总DNA，4℃保存备用。

扩增时首先选用下列通用引物^[5]扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因片段。当通用引物扩增反应失败时，则选用Ivanova等^[6]设计的鸡尾酒引物（表 1）。PCR反应扩增体系：10×缓冲液2.5μl，dNTP 0.5μl，引物各0.5μl，LA Taq DNA聚合酶0.15μl，模板DNA 1μl，加ddH2O至25μl。PCR反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性45 s，54℃退火1 min，72℃延伸1 min，35个循环，最后再72℃延伸10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，送北京奥科鼎盛生物科技有限公司进行双向测序。

表 1 PCR扩增COⅠ基因的相关引物序列 Table 1 PCR primer sequences used to amplify COⅠgene

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首先利用DNAStar中的Seqman进行序列拼接。然后利用Clustal W软件进行多重序列比对，并进行适当的手工调整。同时将测定的序列在NCBI网站上运行Blast程序（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）进行序列同源性比较，以确保所获得的序列是目标序列。同时将Blast结果中相似度＞95%，或相似度最大的近缘种序列用于系统树构建，判断形态鉴定的准确性。

运用Mega 6.0软件分析各基因序列的碱基组成和变异，基于Kimura-2-parameter（K2P）模型的遗传距离。采用邻接法构建全部COⅠ基因序列Neighbor?Joining（NJ）树。

共捕获小兽84只，隶属于3目（啮齿目、兔形目和鼩鼱目）4科8属11种，见表 2。其中黑线姬鼠（Apodemus agrarius）占捕获总数的30.95%，洮州绒鼠平（Caryomys eva）和朝鲜姬鼠（Apodemus peninsulae）分别占20.24%和21.43%，为优势种群，其中姬鼠群落占55.95%。

表 2 2015年4月宁夏六盘山自然保护区小型兽类调查结果 Table 2 The small mammals capturedin Liupanshan area of Ningxia in April 2015

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现场采集的84份标本中，选择黑线姬鼠以外的58份标本，通过通用引物和鸡尾酒引物共扩增得到51条序列，成功率为87.93%。扩增片段长度符合引物设计的预期，并经过Blast比对后确认为线粒体COⅠ基因片段。

捕获的10个形态种小兽中，通过COⅠ基因分析鉴定为11个种（黑线姬鼠除外）。构建NJ树，形成11个具有高支持度的分支，即由11个有效种类构成，见图 1，形态上鉴定为洮州绒鼠平的标本存在2个种，但仅凭形态上较难区分六盘山地区洮州绒鼠平和苛岚绒鼠平。但通过DNA条形码鉴定，易准确判定，从而更正形态学鉴定可能导致的错误；原定的达乌尔鼠兔（Ochotona daurica）准确鉴定为黄河鼠兔（O. huangensis）；原定的根田鼠（Microtus oeconomus）准确鉴定为东方田鼠（M. fortis）。其他种类个体的Blast结果均与形态学鉴定结果一致，证明形态学鉴定结果基本准确。

注：分支上的数字分别表示自展支持率（Bootstrap support value）。 图 1 宁夏六盘山地区啮齿动物COⅠ基因序列NJ树 Figure 1 Neighbor?Joining tree based on COⅠsequence of the rodents from Liupanshan of Ningxia

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宁夏六盘山区域独特的地理环境和丰富的植物资源，为哺乳动物生息繁衍提供了良好的栖息条件。宁夏中部和南部为包虫病的流行区^[7]，鼠类在该类疾病的传播中起重要作用。本次调查比较系统地采集了宁夏南部六盘山地区的常见小兽，未捕到稀有种，有待进一步调查。

宁夏六盘山独特的地理环境使啮齿动物得以进化和发展，已有20多种^[1]。其中洮州绒鼠平是我国华北地区常见种，仅凭形态特征难与苛岚绒鼠平区分，尤其是幼鼠种类的鉴定，存在困难。通过DNA条形码技术，有效地更正了形态学鉴定可能的错误。其中洮州绒鼠平主要分布在海拔较高、湿度较大的云杉林生境中，而岢岚绒鼠平则生活在海拔较低、相对干旱的稀疏阔叶林生境中。同样长期以来六盘山地区捕获的田鼠被定为根田鼠，但通过DNA条形码鉴定为东方田鼠；六盘山野荷谷景区捕获的达乌尔鼠兔，通过DNA条形码技术鉴定为黄河鼠兔。而野荷谷林地生境也符合黄河鼠兔的生境特点。通过DNA条形码技术纠正了在六盘山地区小型兽类鉴定中的错误。

本次调查黑线姬鼠占30.95%，朝鲜姬鼠占21.43%，中华姬鼠占3.57%，姬鼠群落为该地区优势种群，同时姬鼠在六盘山地区也是HFRS的重要宿主。随着宁夏地区退耕还林政策的实施，宁夏南部六盘山地区的植被状态与过去不同，黑线姬鼠的分布范围也逐渐从宁夏六盘山地区向北部扩散。本次调查在六盘山最北边的禅塔山自然保护区和云雾山草原保护区均发现黑线姬鼠，其主要分布在年降雨量＞400 mm的区域。因此，应在宁夏六盘山地区外围对黑线姬鼠的分布范围和密度进行本底调查和监测，做好宁夏野鼠型HFRS监测工作，防止其暴发流行。