中国媒介生物学及控制杂志  2015, Vol. 26 Issue (4): 353-356

扩展功能

文章信息

马婷, 龚震宇, 张严峻, 孙继民, 张磊, 张蓉, 施旭光, 任江萍, 蒋健敏
MA Ting, GONG Zhen-yu, ZHANG Yan-jun, SUN Ji-min, ZHANG Lei, ZHANG Rong, SHI Xu-guang, REN Jiang-ping, JIANG Jian-min
浙江省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的宿主媒介调查
Survey of vectors and hosts of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus in Zhejiang province, China
中国媒介生物学及控制杂志, 2015, 26(4): 353-356
Chin J Vector Biol & Control, 2015, 26(4): 353-356
10.11853/j.issn.1003.4692.2015.04.006

文章历史

收稿日期:2015-04-28
浙江省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的宿主媒介调查
马婷1,2, 龚震宇2, 张严峻2, 孙继民2, 张磊2, 张蓉2, 施旭光2, 任江萍2, 蒋健敏2    
1 宁波大学医学院, 浙江宁波315211;
2 浙江省疾病预防控制中心, 杭州310051
摘要目的 调查浙江省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)传播媒介蜱和宿主鼠形动物的种群分布、季节消长及其带病毒情况。方法 2013年分4个季度在浙江省7个市(县)采取人工布旗法和动物体表采集法采集游离蜱和寄生蜱;用鼠笼法捕获鼠形动物,取肝、脾标本;用RT-PCR方法检测SFTSV核酸。结果 共捕蜱751只,隶属于1 科6 属10 种,其中长角血蜱为优势蜱种,占58.5%(439/751),不同县(区)蜱种类分布不完全相同(χ2=1198.409,P<0.05)。3-10月为蜱的活动期,第二季度为蜱的活动高峰期。共捕获鼠形动物1078只,其中啮齿动物3科7属13种,食虫目动物2科2属2种;黑线姬鼠和黑腹绒鼠分别占捕获总数的32.9%(355/1078)和30.2%(326/1078),不同地区的鼠种构成不同(χ2=1623.480,P<0.05)。蜱及鼠形动物标本新布尼亚病毒核酸检测均为阴性。结论 浙江省具有SFTSV媒介蜱及宿主鼠形动物的分布,但其传播媒介和可能宿主需要进一步调查研究。
关键词发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒     媒介     宿主    
Survey of vectors and hosts of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus in Zhejiang province, China
MA Ting1,2, GONG Zhen-yu2, ZHANG Yan-jun2, SUN Ji-min2, ZHANG Lei2, ZHANG Rong2, SHI Xu-guang2, REN Jiang-ping2, JIANG Jian-min2     
1 Medical of Ningbo University, Ningbo 315211, Zhejiang Province, China;
2 Zhejiang Center for Disease Control and Prevention, Hangzhou 310051, Zhejiang Province, China
Abstract:Objective To investigate the distribution, species, and seasonality of ticks and rodents and detection of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus (SFTSV) in vectors and hosts. Methods In seven counties of Zhejiang province, the free ranging ticks were collected by flagging and the parasitic ticks were collected from the host skin by hand searching on a 3-month basis of 2013. Rodents were captured by squirrelcage method. The specimens of liver and spleen were collected with sterile operations. The SFTSV nucleic acid in the viscera of rodents and in the ticks were detected by fluorescence quantitative RT-PCR. Results A total of 751 ticks were collected, consisting of 2 families, 5 geniuses and 6 species, including 439(58.5%) Haemaphysalis longicornis, which were the predominant species in Zhejiang province. The ticks species distribution varied in different counties in Zhejiang province (χ2=1198.409, P < 0.05). Ticks were active from March to October and the peak was in the second 3-month of the year. The total number of captured rodents was 1078, the rodentia belonged to 13 species in 7 genera in 3 families. The insectivora belonged to 2 species in 2 genera of 2 families. The predominant captures were 355(32.9% ) of Apodemus agrarius and 326(30.2% ) of Eothenomys melanogaster. The distribution of the rodent species also varied in different counties in Zhejiang province (χ2=1623.480, P < 0.05). The results were negative in RNA detection of SFTSV in the specimens of ticks and rodents by RT-PCR. Conclusion The vectors and the host animals of SFTSV were found in Zhejiang province. But the vectors and the possible hosts need further studies.
Key words: Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus     Vector     Host    

近年来,我国多个省份出现不明原因以发热、胃肠道症状、血小板和白细胞减少为主要临床表现的病例,其中部分患者有蜱叮咬史。2010年我国从患者血液样本和蜱中分离到发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome bunyavirus,SFTSV)[1],提示蜱为该病的传播媒介[2, 3]。江苏等省在鼠体内检测出SFTSV,提示鼠类可能是SFTSV的宿主动物之一[4]。浙江省2011年7月首次确诊发热伴血小板减少综合征(SFTS)病例,截止2013 年共报告65 例[5, 6]。为了解浙江省SFTSV传播媒介和动物宿主的分布情况,结合SFTS病例的生境分布和地理地貌特征,我们于2013年分4个季度在浙江省7个县(市)开展蜱和鼠形动物本底调查,现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 调查时间、地点

根据浙江省地理类型,选择沿海丘陵平原区的舟山市岱山县、浙北平原区的嘉兴市海宁市、浙南中山区的丽水市、浙西中山丘陵区的湖州市安吉县、浙中丘陵平原地区的义乌市、浙东盆地低山区的台州市仙居县和中部沿海丘陵区的宁波市象山县为调查地区,选择植被相对完好,鼠形动物和媒介蜱孳生地为调查点,分别于2013年3、6、9和12月每季度进行一次调查。 1.2 蜱类调查

①人工布旗法:采用人工布旗法采集游离蜱。用长方形纯棉白色布料,长× 宽为100 cm×60 cm,将旗系于100 cm左右长的布旗杆上,手执布旗杆,旗的下缘至少40 cm拖于地面,在草丛、灌木丛中慢速直线行走,每5 min查看1次。捕获蜱进行分类鉴定,放于有盖螺口管中,置-20 ℃保存(有条件的-80 ℃保存)。②动物体表捕蜱法:采用宿主动物体表拾蜱法采集寄生蜱。在家畜(犬、羊、牛)体表进行捡拾,将每头(只)家畜体表捡拾的蜱放入同一管内并编号,分类鉴定,置-20 ℃保存(有条件的-80 ℃保存)。 1.3 鼠形动物调查

采用鼠笼法捕鼠。每次每个调查点布鼠笼100个,用油条作诱饵,连续布放2 d,分类鉴定后,无菌操作取肝、脾,一式二份,置于-20 ℃保存(有条件的-80 ℃保存)。对捕获的啮齿动物,采集全血标本,枸橼酸钠抗凝,4 ℃冷藏保存送检。 1.4 SFTSV检测

①蜱携带SFTSV检测:取单组蜱样本,用75%乙醇消毒及生理盐水反复清洗3次,滤纸吸干后,捣碎加入90 ml TE使蜱细胞悬浮起来,再按照RNA提取试剂盒说明步骤进行RNA提取,采用ABI AgPath-ID one-step RT-PCR 试剂盒进行检测。②鼠形动物携带SFTSV 检测:将鼠形动物的肝、脾标本取出后加入0.6 ml DMEM 细胞培养液以及研磨用钢弹珠(QIAGEN)。将EP 管装入组织研磨仪中,50 振幅研磨3~5 min。参照高纯度病毒RNA 提取试剂盒操作说明书提取总RNA。用荧光定量RT-PCR法进行SFTSV核酸检测。 1.5 统计学处理

数据用Excel软件录入,应用SPSS 17.0 软件进行统计分析。率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 蜱的种类及分布

浙江省7个县(市)共捕获蜱751只,隶属于1科6属10种,其中长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)439只(58.5%),中华硬蜱(Ixodes sinesis)96只(12.8%),微小牛蜱(Boophilusmicroplus)49只(6.6%),卵形硬蜱(I. ovatus)46只(6.1%),其他蜱种〔血红扇头蜱(Rhipicephalussanguineus)、镰形扇头蜱(Rh. haemaphysaloideshaemaphysaloi)、龟形花蜱(Amblyomma testudinarium)、粒形硬蜱(I. granulates)、亚东璃眼蜱(Hyalommaasiaticum kozlovi olenev)和锐附硬蜱(I. acutitarsus)〕共121只(16.1%)。浙江省优势蜱种为长角血蜱,不同县(市)蜱种群分布有所不同,且差异有统计学意义(χ2=1198.409,P<0.05),岱山和象山县以长角血蜱为主,其中岱山县共采集蜱110只,长角血蜱104只(94.5%),象山县共采集蜱30只,长角血蜱29只(96.7%)。丽水市以卵形硬蜱为主。在海宁市共采集蜱14只,均为镰形扇头蜱(表 1)。

表 1 2013年浙江省7个县(市)蜱的构成比 Table 1 Tick distribution of seven counties in Zhejiang province, 2013
2.2 蜱的季节消长

各调查点第一季度就可以从灌木丛、草丛等蜱的孳生地采集到蜱,共采集蜱140只(18.6%);第二季度采蜱数最多为355只(47.3%),其中长角血蜱占第二季度采蜱总数的177只(49.9%);第三季度蜱的数量减少至177只(23.6%),第四季度仅捕获79只(10.5%)。浙江省不同季节蜱的构成不同,且差异有统计学意义(χ2=432.283,P<0.05)。第一季度共采集到长角血蜱、血红扇头蜱、粒形硬蜱、卵形硬蜱、中华硬蜱及微小牛蜱6种,其中微小牛蜱只在第一季度采集到。第二季度采集的蜱种类最为丰富,有长角血蜱、血红扇头蜱、镰形扇头蜱、粒形硬蜱、卵形硬蜱、中华硬蜱、龟形花蜱、亚东璃眼蜱及锐跗硬蜱9种,为蜱的活动高峰期。第三和第四季度蜱的种类集中,有长角血蜱、镰形扇头蜱及中华硬蜱。2013年全省各调查点不同月份捕蜱数量见图 1

图 1 2013年浙江省各调查点不同月份捕蜱情况 Figure 1 Tick collection of each site by month in Zhejiang province, 2013
2.3 鼠形动物的种群构成

7个县(市)共捕获鼠形动物1078只,其中啮齿动物3科7属13种,食虫目动物2科2属2种。野栖鼠中黑线姬鼠(Apodemusagrarius)占捕获总数的32.9%,黑腹绒鼠(Eothenomysmelanogaster)占30.2%,北社鼠(Niviventer confucianus)占11.6%,黄毛鼠(Rattus losea)占8.3%。家栖鼠捕获数量较少,其中臭鼩鼱(Suncus murinus)占捕获总数的7.7%,此外还有黄胸鼠(R. tanezumi)、褐家鼠(R. norvegicus)、小家鼠(Mus musculus)等,其他鼠种数量较少。浙江省7个县(市)的鼠形动物分布有所不同,且差异有统计学意义(χ2=1623.480,P<0.05),在海宁市,黑线姬鼠的捕获数量最多,共94只,占全县捕获总数的88.7%,为海宁市的优势种。在义乌市,黑腹绒鼠和黑线姬鼠共捕获453只,占全市捕获总数的90.4%,为优势种群。在丽水市和安吉县,北社鼠的捕获比例最高。小家鼠、松鼠(Sciurus vulgaris)、刺猬(Erinaceus europaeus)、青毛鼠(Berylmys bowersii bowersi)及仓鼠(Cricetidae)捕获数量较少,在安吉县共捕获22只,占捕获总数的2.0%(表 2)。

表 2 2013年浙江省7个县(市)捕获鼠类种群构成 Table 2 Rodent species composition of seven counties in Zhejiang province, 2013
2.4 鼠的季节消长

2013年每季度捕获鼠数的比例,间接反映鼠类的季节消长,秋季的比例较高,占29.1%。浙江省不同季度鼠的种群构成不同(χ2=153.874,P<0.05)。黑腹绒鼠和黑线姬鼠的捕获数量在全年均保持较高水平,黑腹绒鼠在第三季度捕获数量最多,占32.5%(106/326),而黑线姬鼠则在第一季度捕获最多,占30.7%(109/355)。 2.5 SFTSV检测

采集的蜱及鼠形动物肝、脾标本经RT-PCR检测SFTSV特异核酸均为阴性。 3 讨论

浙江省存在多个蜱种和鼠形动物。本次调查发现10种硬蜱,长角血蜱占58.5%,为浙江省的优势蜱种,与河南省的调查结果相类似[3],而长角血蜱是SFTSV的传播媒介[1, 3],提示浙江省人群有被长角血蜱叮咬而感染SFTSV的风险。蜱类的生存、繁衍有其赖以生存的自然环境,不同县(市)往往生境不同,蜱的种群分布也会不同。据调查显示,长角血蜱主要生长在灌丛中[7],已有病例报告的岱山、象山和安吉县主要是丘陵地形,植被以灌丛为主,适宜长角血蜱生长。在适宜的温度范围内,温度升高可以提高蜱的代谢和繁殖速度,温度降低使其代谢率下降,发育迟缓,第二季度温度及湿度适于蜱的繁殖和栖息,为蜱的活动高峰期,与郑洪远[7]的研究类似。蜱的季节变化与浙江省SFTS病例的发病时间相一致,尤其是与发病高峰期相吻合[6]

本次调查还发现15种鼠类,义乌市以黑腹绒鼠和黑线姬鼠为主,与陈劲华等[8]在义乌市对鼠类种群构成的调查基本一致。黑腹绒鼠以义乌市为主,而其他调查点很少见,可能与黑腹绒鼠的生活习性有关,黑腹绒鼠主要栖息于潮湿森林草甸草原,义乌市是丘陵平原区,适宜黑腹绒鼠的生长繁殖。野栖鼠如黑线姬鼠及黑腹绒鼠捕获数量较多,而家栖鼠类捕获较少,可能与居民防鼠、灭鼠意识提高有关。黑腹绒鼠秋季捕获数量多可能与秋收季节鼠密度高有关。

河南、山东等地已在蜱体内检测到SFTSV核酸阳性,并分离出SFTSV,提示蜱很可能为SFTSV的传播媒介[3, 9]。江苏省从黑线姬鼠、褐家鼠等鼠形动物体内检测到SFTSV核酸[4]。而此次在浙江省的蜱和鼠形动物体内均未检测出SFTSV特异核酸,可能与样本量较少或者样本运输、保存不当、检测方法需要提高有关,所以不能排除蜱和鼠作为该病毒传播媒介和宿主的可能性。SFTSV传播媒介和宿主调查还需要进一步深入研究。

志谢 岱山县、海宁市、丽水市、安吉县、义乌市、仙居县和象山县疾病预防控制中心对本次调查给予支持和配合,特此志谢

参考文献
[1] Yu XJ,Liang MF,Zhang SY,et al. Fever with thrombocytopenia associated with a novel bunyavirus in China[J]. N Engl J Med,2011,364(16):1523-1532.
[2] 许汴利. 新布尼亚病毒感染致发热伴血小板减少综合征的发现、认识与启示[J]. 中华预防医学杂志,2012,46(2):99-102.
[3] 刘洋,黄学勇,杜燕华,等. 河南发热伴血小板减少综合征流行区蜱类分布及媒介携带新布尼亚病毒状况调查[J]. 中华预防医学杂志,2012,46(6):500-504.
[4] 王庆奎,葛恒明,胡建利,等. 发热伴血小板减少综合征病毒在鼠体内携带情况的调查[J]. 现代预防医学,2013,40(15):2902-2904.
[5] Li SB,Xue C,Fu YF,et al. Sporadic case infected by severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus in a non -epidemic region of China[J]. Biosci Trends,2011,5(6):273-276.
[6] Sun JM,Chai CL,Lv HK,et al. Epidemiological characteristics of severe fever with thrombocytopenia syndrome in Zhejiang province,China[J]. Int J Infect Dis,2014,25:180-185.
[7] 郑洪远. 长角血蜱的野外生态学研究[D]. 石家庄:河北师范大学,2009.
[8] 陈劲华,朱志宏,傅涛,等. 2007-2011年浙江省义乌市历史鼠疫疫源地宿主和媒介种群调查[J]. 疾病监测,2012,27(3):208-210.
[9] 姜晓林,王显军,李建东,等. 家养动物体表蜱中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒分离及鉴定[J]. 病毒学报,2012,28(3):252-257.