小肠结肠炎耶尔森菌病是一种人兽共患的肠道 传染性疾病。随着研究工作的深入，人们发现感染 小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）不仅能 引起肠道疾患（如腹泻），而且还能引起耶氏肝炎、关 节炎或肺炎等疾病。临床上与布鲁氏菌病（布病）相 鉴别时，在血清学诊断上会出现误诊。有关学者还 认为，由于3种致病性耶尔森菌（鼠疫耶尔森菌、假 结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌）携带的毒力质 粒pyv 具有同源性，耶尔森菌仅限于初次感染，即动 物只要感染过1次上述3种耶尔森菌的一种，就会对 另外两种致病性耶尔森菌产生一定的抵抗力。阿鲁 科尔沁旗地处松辽平原达乌尔黄鼠（Spermophilus dauricus）鼠疫疫源地，也是布病的流行地区，小肠结 肠炎耶尔森菌在该地区的分布情况尚不清楚。因此， 2009－2012年我们连续4年对活动性鼠疫疫源地绍 根地区开展小肠结肠炎耶尔森菌的调查研究工作。 1 材料与方法 1.1 样地选择及样品采集

阿鲁科尔沁旗绍根镇 是以牧为主的地区，生境属于漫沼草原。镇中心为 居民区，镇周围是耕地，再向外为漫沼草原，符合课 题设计要求的同心圆生态景观。样品采集：以绍根 镇所在地为中心，向外以同心圆方式扩展随机采集 鼠类和家畜家禽样本。由于该地区是鼠疫活动性地 区，所采集的样本均经鼠疫检验为阴性者方可带出 疫区。无菌操作采集宿主动物新鲜粪便、舌根、肠道 内容物和咽拭子标本后，立即放入50 ml或15 ml装 有改良磷酸盐缓冲液的离心管（按1∶10混合）并置 于4 ℃环境冷增菌20 d。 1.2 菌株分离培养、鉴定

将增菌后的样品，接种 于小肠结肠炎耶尔森菌选择性平板，25 ℃培养48 h； 选择形态可疑菌落接种于改良克氏双糖琼脂，25 ℃ 培养24 h；改良克氏双糖斜面：黄/黄、不产H2S的菌 落接种于尿素培养基，25 ℃培养3 h；将分解尿素的 菌株分别接种于2管半固体培养基，分别在25 ℃和 37 ℃培养24 h；取25 ℃培养有动力且37 ℃培养无 动力者，做革兰染色；再将革兰染色为阴性的杆菌或 球杆菌行Api20E系统生化鉴定，确定目的菌株。病 原学特征鉴定，血清分型采用玻片法，生物型鉴定采 用小肠结肠炎耶尔森菌生物分型指标^[1]。上述实验 所用试剂、培养基等均由中国疾病预防控制中心传 染病预防控制所提供。 1.3 毒力基因检测

采用常规PCR操作方法，并参 照文献^[2]设定引物，引物由生工生物工程（上海）股 份有限公司合成，引物序列及退火温度见表 1。PCR 反应体系中，模板1 μl，premix 10 μl，上、下游引物各 0.5 μl（20 μmol），纯水定容至20 μl。扩增参数：94℃ 预变性5 min，94℃变性15 s，退火30 s，72℃延伸30 s， 25个循环，最后72 ℃延伸10 min。检测均在中国疾病 预防控制中心传染病预防控制所实验室完成。

表 1 6种毒力基因PCR扩增引物序列 Table 1 Sequences of PCR primers used in amplification of six toxicity genes of Y. enterocolitica

表选项

所得数据采用Excel 2003软件计 算，对不同宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的检出率比 较使用SPSS 10.0软件进行χ²检验并分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 菌株分离

2009－2012 年检测各类样本共 3837 份，分离出小肠结肠炎耶尔森菌17 株，其中 2009年自猪体检出1株，年检出率为0.14%；2011年 自猪体检出13株，年检出率为4.66%，自鼠体检出3 株，检出率为0.74%，猪体检出率高于鼠体，且差异 有统计学意义（χ²＝10.75，P=0.000）。2010 年和 2012年未获得小肠结肠炎耶尔森菌（表 2）。

表 2 绍根地区宿主动物小肠结肠炎耶尔森菌检出情况 Table 2 Detection of Y. enterocolitica in animal hosts in Shaogen

表选项

调查所获得的17株小 肠结肠炎耶尔森菌，包括2种血清型，即16株为O∶5 血清型，1株为O∶3血清型；包括两种生物型，即16 株为生物1A型，1株为生物3型。17株菌中有16株 携带ystB 肠毒素基因，阳性率为94.12%，1株携带ail （黏附侵袭位点基因）、ystA（耐热性肠毒素基因）和 rfbC 3种毒力基因，阳性率均为5.88%（表 3）。

表 3 绍根地区动物小肠结肠炎耶尔森菌分型 及毒力检测结果 Table 3 Classification of Y. enterocolitica and detection of toxicity genes in animal hosts in Shaogen

表选项

2009－2012年，对阿鲁科尔沁旗的调查结 果首次证实阿鲁科尔沁旗境内的宿主动物猪和鼠携 带小肠结肠炎耶尔森菌，而且从猪体检测出O∶3血清 型致病性小肠结肠炎耶尔森菌。猪中小肠结肠炎耶 尔森菌的检出率明显高于其他宿主动物。此与我国 其他一些地区的检测结果基本一致^{[3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10]}，提示该地区 人群与猪接触有感染小肠结肠炎耶尔森菌的可能。 3.2 致病性小肠结肠炎耶尔森菌对当地人群构成 威胁

小肠结肠炎耶尔森菌感染性疾病是一种食源性疾病，目前已遍及全世界。我国在20世纪80年代 中期（1986年）在甘肃省兰州市一个奶牛场曾发生 过一次由致病性小肠结肠炎耶尔森菌（O∶3血清型， 生物3型）感染引起的该病暴发流行^[4]。1987年辽 宁省沈阳市某中学食堂也曾因O∶9血清型致病性 小肠结肠炎耶尔森菌感染引起该病流行。本次在该 地区猪粪中检出的O∶3血清型，生物3型致病性小 肠结肠炎耶尔森菌携带着3种致病性毒力基因，尽管 目前在人群中还未发现该菌感染的病例，但应该引起 当地人群，尤其是集体用餐食堂的高度警惕，以防止 被致病性小肠结肠炎耶尔森菌感染而造成疾病流行。 3.3 绍根地区是以牧为主的地区，近些年布病十分 活跃

本次调查结果确定该地区的家畜体内携带小 肠结肠炎耶尔森菌。由于小肠结肠炎耶尔森菌感染 的病例与布病在临床症状上有时很相似（如关节痛 等）。为了避免误诊，建议当地医务人员对来自该地 区的相关患者加以辨别以获得更好疗效。 3.4 继续深入调查小肠结肠炎耶尔森菌的意义

阿鲁科尔沁旗绍根地区是历史鼠疫疫区，20世纪60 年代以后再未检出过鼠疫菌，但动物鼠疫血清阳性 材料却有间断出现，有时甚至达到我国规定的动物 鼠疫现疫流行标准。时隐时现的动物间鼠疫疫情迹 象，病原学又检不出鼠疫菌，从而使这片历史鼠疫疫 源地更耐人寻味。1990年春季绍根鼠疫监测站检 测人员利用鼠疫选择敏感培养基，从大批死鼠（有腹 泻症状）体内分离到一种疑似鼠疫菌，后经内蒙古自 治区鼠疫专家鉴定为非鼠疫菌。本次调查结果显示 17株小肠结肠炎耶尔森菌有13株来自猪粪，3株检 自鼠肠。鼠肠检出的小肠结肠炎耶尔森菌均为O∶5 血清型，生物1A型，携带ystB毒力基因。3株检自鼠 体的小肠结肠炎耶尔森菌有1株是采自距村庄1.5 km 的达乌尔黄鼠。达乌尔黄鼠是黄鼠鼠疫疫源地的主 要宿主动物，本次调查结果表明该鼠疫疫源地的主 要宿主动物达乌尔黄鼠携带了O∶5血清型，生物1A 型的小肠结肠炎耶尔森菌。提示继续调查研究小肠 结肠炎耶尔森菌在该地区宿主动物间和人间的分布 规律，对深入认识该鼠疫疫源地很有意义，可为疾病 防治提供科学依据。