入境集装箱口岸卫生查验时，经常会检获各类医 学媒介生物，其中以鼠类最为常见。鉴别入境鼠样品 种类，对获得国外的鼠种分布信息，评估外来鼠种的输 入性风险，以及防控鼠传疾病有重要意义。由于货物 挤压、腐败等原因，在入境集装箱检获的鼠样本，往往 已经高度腐败变形，给形态学分类鉴定带来很大难 度。近年来，应用DNA条形码技术进行种属鉴定的研 究及应用发展迅速。该技术具有特异性强、灵敏度高、 易于观察与分析、对检材质量要求低等特点，与传统的 形态学方法比较具有明显的优势^[1,2]，同时该技术的出 现可以为研究物种的进化规律、遗传变异、系统发育以 及生物多样性提供理论依据。线粒体细胞色素B （cytB）基因具有母系遗传、高突变率、基因结构简单、 无组织特异性等特点，适合于种间、种下水平的鉴别研 究，是研究种及种下水平分类的理想分子标记^[3,4,5]。本 研究尝试以形态学方法结合DNA条形码技术，对1例 入境集装箱中检获的鼠样品进行种类鉴别。 1 材料与方法 1.1 材料

2013年12月在沙特入境的集装箱中检获 1份鼠类样品残骸，标识为DX1312。 1.2 方法 1.2.1 形态学方法

观察鼠残骸的外部形态及测量其 头骨等有关数据。 1.2.2 分子生物学方法 1.2.2.1 基因组DNA提取

于鼠样品腹部用已灭菌 的手术剪剪取毛皮约0.5 cm²，放入2 ml离心管内，先 后用1.5 ml 75%无水乙醇和去离子水洗涤各3次，涡旋 振荡2 min，16 000×g高速离心1 min弃上清，取出样 品，剪成细小微粒并转移至另一干净的2 ml离心管中， 按照DNeasy Blood & Tissue试剂盒（Qiagen公司）使用 说明书提取DNA，于-20℃保存备用。 1.2.2.2 PCR扩增及序列测定

cytB基因扩增引物参 考文献^[6]，序列为：L7，5′-ACC AAT GAC ATG AAA AAT CAT CGT T-3′和H15915，5′-TCT CCA TTT CTG GTT TAC AAG AC-3′。PCR反应扩增体积为50μl，其 中10×缓冲液5μl，10mmol/LdNTP1μl，25μmol/L引 物各1μl，5U/μl Taq聚合酶0.4μl，模板DNA4μl。 PCR反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性30 s， 55℃退火60 s，72℃延伸60 s，35个循环，最后再 72℃延伸10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检 测后由上海英骏生物工程公司完成测序工作。 1.2.2.3 序列分析

测序所得的序列舍弃两端低信号 序列，进入NCBI进行Blast同源性检索。从GenBank 下载所有能够获得的板齿鼠（Bandicata indica）cytB基 因序列为参考，用Mega 5.2软件进行系统发生分析，以 邻位相连法（NJ）构建系统发生树，分析用1000次往返 （replicate）。基因距离计算采用Nucleotide：Kimura 2-parameter方法，并采用Bootstrap方法分析不同鼠种 间cytB基因序列的遗传距离。 2 结 果 2.1 外部形态

已呈干尸状，皮毛破损严重，毛色呈 黑褐色，体长252 mm，尾长220 mm，后足长40 mm。 2.2 头骨

颅骨粗大，侧面观，鼻骨前端与上门齿前 喙在垂直线上，臼齿横叶状，横叶中间变向前方，第1 上臼齿具有3个横叶，第2和第3上臼齿只有2个横叶， 下臼齿亦呈横叶状。颅全长46.8 mm，颧骨长23.2 mm， 鼻骨长14.1 mm，上颊齿列长8.0 mm，听泡长10.8 mm， 门齿孔长8.0 mm。头骨及齿式见图 1。

图 1 样品DX1312头骨及齿式

图选项

将测序获得的样品 DX1312cytB基因序列录入GenBank进行Blast，结果显 示与板齿鼠R3521和R5313cytB基因序列最为相似， 同源性达95%。与不同板齿鼠的遗传距离为0.048～ 0.175。从分子系统发育树可知，样品DX1312与板齿 鼠、小板齿鼠（B. bengalensis）位于同一分支，而与缅甸 板齿鼠（B. savilei）形成独立分支（图 2）。

图 2 不同板齿鼠cytB基因关系树

图选项

板齿鼠又称为大板齿鼠。在分类上属于鼠科 （Murida）鼠亚科（Murinae）板齿鼠属（Bandicota），该属 有3个种，另外还有小板齿鼠和缅甸板齿鼠，我国没有 分布^[7]。从已有的监测报道可知，浙江省目前尚未有 板齿鼠的分布^[8,9]，此次从宁波口岸检获浙江省首例输 入性板齿鼠，对加强口岸医学媒介的查验和监测有较 大的指导意义。

由于检获样本不完整，依据毛色、体形等数据无法 对该样品的种类进行鉴定，因此，实验人员重点对头骨 进行了分析，头骨的测量数据、头骨形态特别是齿隙特 征均说明该鼠种为板齿鼠^[10]。为了进一步核实该结 果，采用DNA条形码技术，对鼠样品皮毛中提取的 cytB基因序列进行了分析，分析结果与板齿鼠遗传距 离最为接近，因此可以确定该样品为板齿鼠。从系统 进化树可以获知，不能在GenBank获得与样品cytB基 因完全同源的板齿鼠，因此，分离样品与数据库的板齿 鼠存在一定的遗传进化差异。

志谢   论文成稿得到宁波出入境检验检疫局郑剑宁处长的指 导帮助，特此志谢