小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）隶属 于肠杆菌科（Enterobacteriaceae），耶尔森菌属（Yersinia）。 目前，耶尔森菌属包括11个种，其中致病的有3个种。 它们为鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）、假结核耶尔森菌 （Yersinia pseudotuberculosis）和小肠结肠炎耶尔森菌。 小肠结肠炎耶尔森菌广泛存在于自然界的各种动物宿 主，家畜、家禽的带菌率较高。历史研究文献显示猪是 该菌致病性菌株的主要宿主^{[1, 2, 3]}，尤其是猪扁桃体及猪 回盲部内容物中小肠结肠炎耶尔森菌分离率较高。为 了解登封市猪扁桃体及回盲部内容物携带小肠结肠炎 耶尔森菌现状，在登封市生猪屠宰场采集猪咽拭子及 猪肛拭子标本，对其进行常规培养、生化鉴定、生物分 型、血清分型、毒力基因检测等。进而分析生猪携带该 菌的病原学特征，为预防小肠结肠炎耶尔森菌传播提 供科学依据。 1 材料与方法 1.1 标本

来源2013年，在登封市定点生猪屠宰场， 用消毒好的棉拭子（特制加长）采集刚屠宰后的生猪咽 拭子及肛拭子各196份，立即放入已备好的10 ml改良 PBS培养基带回实验室。屠宰场生猪来源于登封市周 边农户（散养）。 1.2 方法 1.2.1 菌株的分离培养

将采集标本于4 ℃冷增菌培 养，分别于7、14、21 d后转种小肠结肠炎耶尔森菌选择 性培养基，25 ℃培养24～36 h，挑取疑似菌落转种克 氏双糖斜面25 ℃培养24 h，选择克氏双糖+/+、不产 气、H2S-，接种于尿素培养基及半固体培养基，选择尿 素酶+、25 ℃培养动力+、37 ℃培养动力-，镜检为革兰 阴性杆菌或椭圆或球杆菌细菌者，使用API20E（法国 生物梅里埃公司API20E肠道菌生化鉴定板条）生化板 条进行系统生化鉴定。 1.2.2 生物分型

生化反应是小肠结肠炎耶尔森菌鉴 定的主要依据，同时将检测结果作为生物分型的依 据。具体参照文献^[4]的生物分型方法进行。 1.2.3 菌株的血清分型

对鉴定结果为小肠结肠炎耶 尔森菌的菌株进行血清学分型。在血清学分型过程中 设盐水对照。 1.2.4 PCR检测

借助PCR检测技术对小肠结肠炎 耶尔森菌黏附侵袭点基因（ail）、耐热性肠毒素基因 （ystA）、生物1A 型携带的肠毒素基因（ystB）、黏附素 （yadA）、yop调节子转录活化作用因子（virF）等进行检 测。PCR 产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离（170 V， 30 min）。引物序列见表 1。

表 1 各检测基因PCR扩增引物序列

表选项

小肠结肠炎耶尔森菌选择性 培养基和配套抗生素为美国BD公司产品，0.1 mol/L磷 酸盐缓冲盐水（pH 7.4，改良PBS）、克氏双糖铁琼脂 （KIA）、动力吲哚尿素培养基（MIU）购自上海市疾病预 防控制中心，哥伦比亚营养琼脂购自英国Oxoid 公 司。小肠结肠炎耶尔森菌分型血清购自日本生研株式 会社（包括O∶1，2、O∶3、O∶5、O∶8、O∶9），菌株鉴定用 API20E生化板条及配套试剂均购自法国生物梅里埃公 司，PCR扩增相关试剂及引物合成来自上海生工生物工 程技术服务有限公司，PCR热循环仪、电泳仪、凝胶成像 仪均为美国BioBad公司产品。PCR扩增用Premix、 2000 bp DNA Ladder（DL2000）购自TaKaRa公司。PCR 引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 2 结果 2.1 标本检出情况

196份生猪扁桃体中共分离出107 株小肠结肠炎耶尔森菌，检出率为54.59%；196份生猪回 盲部内容物分离出36株小肠结肠炎耶尔森菌，检出率为 18.37%；猪咽拭子与猪回盲部内容物标本中同时携带小 肠结肠炎耶尔森菌的有28份，占采集总数的14.29%。 2.2 生物分型及血清学分型

生猪咽拭子及肛拭子检 测出的143株小肠结肠炎耶尔森菌经API20E生化鉴定 板条鉴定，生物分型为3型；因日本生研的血清类型有限， 143株小肠结肠炎耶尔森菌中只能鉴定出O∶3血清型。 2.3 毒力基因检测

对生猪咽拭子检测出的107株菌 株进行ail、ystA、ystB、yadA 和virF 5种毒力基因检测， 结果见表 2。Ⅰ型为ail＋、ystA＋、ystB－、yadA＋、virF＋，Ⅱ型 为ail＋、ystA＋、ystB－、yadA－、virF－，Ⅲ型为ail－、ystA－、 ystB－、yadA－、virF－。其中Ⅰ型和Ⅱ型为致病性菌株， Ⅲ型为非致病性菌株。其毒力基因分布特征为Ⅰ型占 71.33%（102/143），Ⅱ型占3.50%（5/143），Ⅲ型未检出。 对生猪肛拭子检测出的36株菌株进行毒力基因 检测，结果见表 2。其毒力基因分布特征为Ⅰ型占 22.37%（32/143），Ⅱ型占2.80%（4/143），Ⅲ型未检出。

表 2 不同容器类型下淡色库蚊野外种群对3种杀虫剂的敏感性

表选项

小肠结肠炎耶尔森菌是一类人兽共患病原菌，动 物宿主分布广泛，包括家畜、家禽、啮齿动物等^[5]。猪 的携带率较高，是小肠结肠炎耶尔森菌主要的宿主动 物^[6]。2013年在登封市生猪屠宰场采集标本进行检 测，进一步掌握该菌的病原学特点。

登封市生猪屠宰场猪扁桃体及回盲部内容物的带 菌率分别为54.59%和18.37%。猪扁桃体及回盲部内 容物标本中小肠结肠炎耶尔森菌分离率不同，猪扁桃 体的带菌率高于猪回盲部内容物的带菌率。这一结果 与国内外研究结果相符^{[1, 2, 7, 8]}。小肠结肠炎耶尔森菌 的血清型众多，国内已报道58个^{[8, 9]}。目前的研究认 为仅有少数几种血清型为致病性菌株，其中O∶3血清 型为最常见的一种^{[7, 10]}。本次分离的菌株血清型较为 集中，均检出O∶3致病型，与历史文献相符。结果证 明登封市生猪携带的小肠结肠炎耶尔森菌为致病性菌 株。由于登封市西部乡镇以农业种植及家畜饲养业为 主，传统的家庭式圈养弊端明显，卫生条件差，防范意 识低，极易发生养殖户与猪及其粪便接触而感染的事 件。这也提醒我们今后在预防该病过程中要重点关注 这一环节。

根据生化反应实验小肠结肠炎耶尔森菌生物型分 为1A、1B、2～5型共6个，其中生物1A型为非致病性 菌株，而生物1B、2～5型为致病性菌株^[11]。登封市生 猪生物分型检测均为致病性菌3型。毒力基因检测分 为3型，Ⅰ型为ail＋、ystA＋、ystB－、yadA＋、virF＋，Ⅱ型为 ail＋、ystA＋、ystB－、yadA－、virF－，Ⅲ型为ail－、ystA－、 ystB－、yadA－、virF－。其中Ⅰ型和Ⅱ型为致病性菌株， Ⅲ型为非致病性菌株。登封市毒力基因检测结果显示 均为Ⅰ型、Ⅱ型致病性菌株。这一检测结果从另一侧 面证实登封市生猪所携带的小肠结肠炎耶尔森菌有致 病性，具有感染人群的潜在危险。

志谢 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所景怀琦研究 员及其团队在课题完成过程中给予帮助，特此志谢