啮齿目、兔形目和食虫目等动物（以下统称小型兽类）是多种人兽共患疾病病原体的宿主，能通过直接接触、携带寄生虫和产生排泄物污染等方式传播肾综合征出血热、钩端螺旋体（钩体）病和恙虫病等30余种疾病，威胁人类健康^[1]。据资料显示，鼠源疾病的人间流行强度与其相关宿主的种群构成、密度、季节消长及带病毒率等情况密切相关^[2]。重庆市地处长江中上游，地形地貌复杂，辖区内小型兽类种类繁多，对于辖区内小型兽类病原体携带情况的系统性监测研究尚未见报道，通过主动监测，获得重庆市鼠源疾病病原体监测数据，掌握媒介宿主携带病原体的基本情况，对当地鼠源疾病的风险评估和预测预警具有重要意义。

本研究从2021年1月－2022年11月，对各调查点捕获的小型兽类开展致病性钩体——问号钩体（Leptospira interrogns）、莫氏立克次体（Rickettsia typhi）、巴尔通体（Bartonella）、汉坦病毒（Hantavirus）及大别班达病毒（Dabie bandavirus）5种鼠源疾病病原体调查。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法分别对上述致病菌和病毒进行检测，通过统计分析，获取当地小型兽类相关病原体携带率等本底资料。

ABI7500型实时荧光定量PCR仪[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]，SSNP-2000A全自动核酸提取仪（江苏硕世生物科技股份有限公司），高速低温离心机[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]，低温组织研磨均质仪（上海净信实业发展有限公司），1640培养基（北京索莱宝科技有限公司），组织DNA提取试剂盒（磁珠法）、病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）均购自江苏硕世生物科技股份有限公司，大别班达病毒、汉坦病毒检测试剂盒均购自上海伯杰医疗科技股份有限公司，问号钩体、巴尔通体、莫氏立克次体检测试剂盒购自深圳生科原生物有限公司。

本次研究依托2021－2022年中央对地方卫生健康转移支付疾控类项目——重大传染病防控项目，设置了万州区、涪陵区、重庆市中心城区3个监测点，在监测区域内随机选择城镇居民区、重点行业（餐饮、食品制售、屠宰场等）、农村居民区、农田耕作地等生境开展调查采样。

采用笼夜法捕获活体小型兽类，以煮熟的猪肉为诱饵，晚放晨收。重点行业以室内环境为主，城镇、农村居民区室内外均匀布放鼠夹，农田沿直线或田埂、沟渠等自然地形布放，每5 m布放1只，行间距不少于50 m。捕获的活体小型兽类使用乙醚麻醉，形态学方法鉴定种类，逐只编号并记录捕获地点、雌雄等相关信息后，在生物安全柜内无菌操作进行解剖，取其肝、肺、脾、肾等组织分别置于冻存管内，保存于-80 ℃冰箱内。参照《全国病媒生物病原学监测方案（试行）》要求，问号钩体、莫氏立克次体、巴尔通体的检测使用肝、脾、肾组织，大别班达病毒检测使用肝、脾、肺组织，汉坦病毒的检测使用肺组织。

剪取肝、脾、肾组织共25 mg放入离心管中，低温研磨后，使用组织DNA提取试剂盒（磁珠法）提取DNA，用于问号钩体、巴尔通体、莫氏立克次体的检测。剪取肝、脾、肺组织共25 mg放入离心管中，加入1640培养基1 ml，低温研磨后，1 200×g低温离心1 min，取200 μl上清液使用病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）提取RNA，用于汉坦病毒、大别班达病毒的检测。

问号钩体、巴尔通体、莫氏立克次体检测采用TaqMan荧光探针荧光定量PCR法，反应总体系为25 μl：qPCR预混液（含酶）16 μl，引物探针4 μl，核酸样本5 μl。反应条件为：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性10 s，退火、延伸及检测荧光40 s，40个循环。大别班达病毒、汉坦病毒检测采用TaqMan荧光探针RT-qPCR，反应总体系为25 μl：反转录PCR（RT-PCR）反应液7.5 μl，酶混合液5 μl，目标病毒反应液3.5 μl，核酸样本5 μl，去RNA酶水补齐至25 μl。反应条件为：50 ℃反转录30 min；95 ℃预变性5 min；95 ℃变性10 s，退火、延伸及检测荧光40 s，45个循环。

采用Excel 2010进行数据汇总和整理，采用SPSS 22.0软件对采集、检测的实验数据进行统计分析。构成比、率的比较采用χ²检验或Fisher确切概率法，检验水准为α=0.05。

2021－2022年，重庆市万州、涪陵区、中心城区3个监测点共计采获小型兽类9种1 188只，其中褐家鼠（Rattus norvegicus）最多，占捕鼠总数的33.50%（398/1 188）；黄胸鼠（R. tanezumi）占26.77%（318/1 188）；四川短尾鼩（Anourosorex squamipes）占26.01%（309/1 188）；小家鼠（Mus musculus）占9.85%（117/1 188）；其余还捕获小泡巨鼠（Leopoldamys edwardsi）、大足鼠（R. nitidus）、北社鼠（Niviventer confucianus）、黑线姬鼠（Apodemus agrarius）和灰麝鼩（Crocidura attenuata）。

分地区来看，重庆市中心城区监测点共计采获小型兽类3种365只，主要为褐家鼠，占比为75.07%（274/365），其次为黄胸鼠，占比为17.53%（64/365），小家鼠占比为7.40%（27/365）。万州区采获全部9种小型兽类共418只，黄胸鼠最多，占比为48.56%（203/418），其次为四川短尾鼩，占比为24.16%（101/418）。涪陵区采获小型兽类8种405只，四川短尾鼩最多，占比为51.36%（208/405），未采获灰麝鼩。不同监测点小型兽类种类构成差异有统计学意义（χ²=714.786，P < 0.001）。见表 1。

表 1 2021－2022年重庆市小型兽类采集情况 Table 1 Small mammals captured in Chongqing, 2021-2022

表选项

1 188只小型兽类样本中共计33只阳性，其中万州区发现2只黄胸鼠、1只褐家鼠同时携带问号钩体和汉城型汉坦病毒（SEOV），病原体总体携带率为2.78%（33/1 188）。其中SEOV总携带率为0.34%（4/1 188）；问号钩体总携带率为2.02%（24/1 188）；巴尔通体总携带率为0.67%（8/1 188），3种病原体的携带率差异有统计学意义（χ²=18.857，P < 0.001）。

分种群来看，在褐家鼠、黄胸鼠体内检出4只SEOV阳性，携带率分别为0.75%（3/398）、0.31%（1/318），Fisher确切概率法检验2个种群的SEOV携带率差异无统计学意义（P=2.067）。问号钩体共计24只阳性，其中褐家鼠携带率为3.02%（12/398），黄胸鼠为1.57%（5/318），小家鼠为4.27%（5/117），四川短尾鼩为0.65%（2/309），各种群间携带率差异无统计学意义（χ²=7.906，P=0.648）。巴尔通体8只阳性中，黄胸鼠携带率为0.94%（3/318）；褐家鼠、灰麝鼩、小泡巨鼠、北社鼠和黑线姬鼠各有1只检出，各种群间携带率差异有统计学意义（χ²=58.025，P < 0.05）。大别班达病毒和莫氏立克次体均未检出。见表 2。

表 2 2021－2022年重庆市小型兽类鼠传病原体携带情况 Table 2 Infection rates of rodent-borne pathogens in small mammals in Chongqing, 2021-2022

表选项

重庆市中心城区小型兽类检测出SEOV携带率为0.55%（2/365），万州区为0.48%（2/418），Fisher确切概率法检验两地SEOV携带率差异无统计学意义（P=1.325）。重庆市中心城区问号钩体携带率为2.74%（10/365），万州区为1.44%（6/418），涪陵区为1.98%（8/405），各地问号钩体携带率差异有统计学意义（χ²=1.681，P=0.048）。巴尔通体阳性全部在万州区检出，携带率为1.91%（8/418）。各地区均未检出大别班达病毒和莫氏立克次体。见表 3。

表 3 2021－2022年重庆市不同地区小型兽类鼠传病原体携带情况 Table 3 Infection rates of rodent-borne pathogens in small mammals in different regions of Chongqing, 2021-2022

表选项

本次调查中，餐饮、食品制售、屠宰场等重点行业和农村居民区小型兽类检出SEOV阳性各2只，携带率分别为0.44%（2/450）、0.55%（2/363），Fisher确切概率法检验2种生境间SEOV携带率差异无统计学意义（P=0.604）。城镇居民区小型兽类问号钩体携带率为2.73%（5/183），重点行业为0.44%（2/450），农村居民区为2.48%（9/363），农田耕作地为4.17%（8/192），各生境问号钩体携带率差异有统计学意义（χ²=10.969，P=0.012）。农村居民区小型兽类巴尔通体携带率为1.93%（7/363），农田耕作地为0.52%（1/192），采用Fisher确切概率法检验2种生境巴尔通体携带率差异无统计学意义（P=0.841）。各生境均未检出大别班达病毒和莫氏立克次体。见表 4。

表 4 2021－2022年重庆市不同生境小型兽类鼠传病原体携带情况 Table 4 Infection rates of rodent-borne pathogens in small mammals in different habitats in Chongqing, 2021-2022

表选项

本次调查采集的小型兽类，重庆市中心城区以褐家鼠为主，而位处三峡库区的万州区、涪陵区分别以黄胸鼠、四川短尾鼩为主，与2018年重庆市国家级监测点鼠类生态学监测^[3]结果有所不同，而与左磊等^[4]的调查结果相似。这种结果的差异性是多方面原因造成的，首先，本次调查在选点上更侧重鼠密度较高的餐饮店、食品加工厂和农田耕作地等场所，布笼的方式也与常规密度监测有所不同，其次，近年来随着重庆市城镇化进程加快和爱国卫生运动的深入开展，城市周边地区农业用地大量减少，建筑、工业用地增多，并且三峡库区由于水库蓄水造成的人口大规模迁移，人类生活场所的改变，使得小型兽类生存的生态环境发生了改变，对当地小型兽类的种群和密度都产生了影响。

本次调查中，问号钩体的携带率最高，涉及重庆市中心城区、万州区、涪陵区3个监测点，并且在各种生境类型中都有检出，与陶晓颖等^[5]在沙坪坝区的研究结果相似，重庆市虽然不是问号钩体的主要流行省份，但近年来也有钩体感染的散发病例报道，问号钩体在当地小型兽类中较高频率的检出，提示了感染暴发的潜在可能性，在日常的鼠源疾病防控中应该重点加强对问号钩体的监测预警，同时在水涝、雨季、洪水来临的季节以及水田作业时节应加强当地的健康宣传，提醒居民做好鼠类防制和个人防护。本次调查共计发现汉坦病毒阳性4份（只），全部为SEOV，与彭靖尧等^[6]在三峡库区重庆段做的调查结果相似，与辽宁、云南、黑龙江等地主要以SEOV为主的型别分布相同，而安徽、江西等地则以汉滩型汉坦病毒（HTNV）为主^[7-8]。发现汉坦病毒阳性的场所主要在城镇居民区和重点行业，宿主为褐家鼠、黄胸鼠，而在其他一些研究中，臭鼩（Suncus）、黑线姬鼠等也是常见的汉坦病毒宿主^[9]，本次在重庆市未捕获，具体原因有待下一步更深入的研究。巴尔通体全部在万州区检出，提示我们在渝东北三峡库区附近应警惕巴尔通体的感染致病，宿主种群涉及褐家鼠、黄胸鼠、灰麝鼩、小泡巨鼠、北社鼠、黑线姬鼠，生境主要在农村居民区和耕作地，与韩英男等^[10]在山东省部分地区的研究结果类似，而农村地区防鼠意识和基础设施相较城镇较弱，鼠类栖息环境相对广泛，可以在住宅与田地相互迁移的鼠种有将病原体传播给人的风险，提示我们对城、乡鼠类防制都应重视^[11]。

重庆市作为长江中上游重要的港口城市，人口众多，交通便利，对媒介生物的监测研究一直是预防媒介生物传染病、保障群众健康的重点。本次调查获取了一定的本底资料，但也有很多方面有待深入研究，首先调查的范围应进一步扩大，目前的3个监测点主要涉及中心城区和三峡库区，接下来可在渝西的丘陵地带、渝东南武陵山地区开展相关调查，以获取更多有价值的科学信息；其次在病原体的研究上，应加强对病原体的基因序列、分子特征以及菌、毒株分型等方面的研究^[12-13]。总之，通过本次调查，初步掌握了重庆部分地区小型兽类鼠传病原体感染情况，后续会加强和深化媒介生物传染病病原体方面的研究，为指导当地鼠源疾病防控提供更多的科学依据。

利益冲突  无