小兽可直接或间接传播包括鼠疫、肾综合征出血热（hemorrhagic fever of renal syndrome，HFRS）、钩端螺旋体病（钩体病）等多种自然疫源性疾病，严重危害人类健康^[1]。本研究选取汉坦病毒（Hantavirus）、发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV）、问号钩端螺旋体（leptospira interrogns，简称钩体）、巴尔通体（Bartonella）4种病原体作为调查对象。其中汉坦病毒感染可引起HFRS，山东省自1962年发现首例HFRS病例以来^[2]，疫情几经波折，但依旧存在周期性变化；SFTSV可引起发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome，SFTS），近年来SFTS作为一种新发传染病发病率呈逐渐上升趋势，严重威胁人类健康；致病性钩体感染可引起钩体病，该病为我国法定传染病，2007年王丽娟等^[3]报道钩体病分布在山东省16地市89个县，但之后对于小兽携带该病原体情况研究较少；巴尔通体可引起巴尔通体病，山东省对于巴尔通体病原菌的检测主要局限在家猫^[4-5]、犬^[6]等宿主，2019年Qin等^[7]曾对山东省胶南县2015－2016年捕获的啮齿动物进行了巴尔通体感染情况的相关报道，证实了巴尔通体在中国东部啮齿动物中分布广泛。

山东省位于中国东部沿海，属暖温带季风气候，地形多样以山地丘陵为主，非常适合小兽的生长繁殖，而对于山东省内小兽携带病原谱及不同地区间携带病原体的差异目前还未见研究报道。为此，本研究采用TaqMan荧光PCR法检测钩体和巴尔通体，采用多重TaqMan反转录荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测SFTSV和汉坦病毒，对其在山东省东营、威海、临沂、滨州、潍坊和菏泽市小兽中的自然感染现状进行调查，掌握鼠携带相关病原微生物的基本情况，为鼠传疾病风险评估和预测预警提供科学依据。

QuantStudio5实时荧光定量PCR仪（ABI公司，中国）、组织研磨均质仪（上海静信仪器有限公司，中国）、QIAGEN RNeasy Mini Kit（QIAGEN，德国）、QIAamp DNA Mini Kit（QIAGEN，德国）、Premix Ex Taq（Probe qPCR）（2×）（TaKaRa，北京）、One Step PrimeScript Ⅲ RT-qPCR Mix（2×）（TaKaRa，北京）、各病原体的靶标序列质粒标准品（由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室提供）、探针和引物（序列选自《全国病媒生物病原学监测方案（试行）》^[8]，由北京六合华大基因科技有限公司合成。

2020－2021年在山东省东营、潍坊、威海、临沂、滨州和菏泽市进行小兽组织样本的采集，登记小兽种类、性别、采集生境等信息，解剖采集其肝、肾、脾为1管，肺单独为1管，采用冷藏运输箱进行样本运输，-80 ℃保存待检。

剪取20~30 mg组织样本使用研磨仪进行研磨，采用QIAamp DNA Mini Kit试剂盒对肝、肾、脾组织研磨液进行DNA提取，用于钩体和巴尔通体的检测；采用QIAGEN RNeasy Mini Kit试剂盒对肝、肾、脾组织研磨液进行RNA提取用于SFTSV的检测，对肺组织研磨液进行RNA提取用于汉坦病毒的检测。

采用TaqMan探针荧光PCR法进行检测。反应体系为20 μl，10 μl Premix Ex Taq（Probe qPCR）（2×），探针终浓度为400 nmol/L，正、反向引物终浓度均为200 nmol/L，DNA模板5 μl，去离子水补齐至20 μl。ABI QuantStudio5实时荧光定量PCR仪进行扩增，反应参数：95 ℃ 30 s，1个循环；95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40个循环。

采用TaqMan探针荧光RT-PCR法进行检测。反应体系为20 μl，10 μl One Step PrimeScript Ⅲ RT-qPCR Mix（2×），探针终浓度为200 nmol/L，正、反向引物终浓度各为200 nmol/L，RNA模板5 μl，去离子水补齐至20 μl。ABI Quant Studio5实时荧光定量PCR仪进行扩增，反应参数：52 ℃ 5 min，1个循环；95 ℃ 10 s，1个循环；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40个循环。

采用Excel 2016和SPSS 20.0软件进行统计分析，率的比较采用χ²检验，不符合χ²检验要求的采用Fisher确切概率法，以P < 0.05为差异有统计学意义。

本次调查共捕获小兽973只，其中褐家鼠（Rattus norvegicus）454只，占捕获总数的46.66%；小家鼠（Mus musculus）441只，占45.32%；黄胸鼠（R. tanezumi）21只，占比2.16%；黑线姬鼠（Apodemus agrarius）52只，占5.35%；鼩鼱（Sorex spp.）4只，小仓鼠（Little Cricetulus）1只。见表 1。

表 1 2020－2021年山东省部分地区小兽鼠传病原体检测结果 Table 1 Detection results of rodent-borne pathogens in small mammals in some areas of Shandong province

表选项

山东省小兽病原体携带率为7.09%（69/973），其中汉坦病毒汉城型病毒（SEOV）感染率为2.67%，未检出汉滩型病毒（HTNV）；钩体感染率为1.34%，巴尔通体感染率为3.70%；未检出SFTSV（表 1），不同病原体感染率差异有统计学意义（χ²=10.921，P=0.004）。

不同种类小兽感染病原体种类不同（表 1），褐家鼠总感染率为11.45%（52/454），存在汉坦病毒、钩体、巴尔通体3种病原体感染，感染率分别为5.73%、1.32%和4.41%，差异有统计学意义（χ²=12.636，P=0.002）；小家鼠总感染率为2.49%（11/441），存在钩体、巴尔通体2种病原体感染，感染率分别为1.59%和0.91%，差异无统计学意义（χ²=0.829，P=0.363）；黑线姬鼠总感染率为23.08%（12/52），检出1种病原体为巴尔通体；黄胸鼠、鼩鼱和小仓鼠4种病原体均未检出。

不同种类小兽同一病原体的感染率不同，褐家鼠与小家鼠的钩体感染率分别为1.32%和1.59%，感染率差异无统计学意义（χ²=0.110，P=0.740）；褐家鼠、小家鼠、黑线姬鼠的巴尔通体感染率分别为4.41%、0.91%和23.08%，感染率差异有统计学意义（χ²=63.387，P < 0.001）。此外褐家鼠中存在汉坦病毒和巴尔通体复合感染的情况，复合感染率为0.62%（6/973）。

本次调查主要包括农村居民区、城镇居民区、重点行业、农田、灌丛5种生境（表 2），除SFTSV在5种生境无感染外，巴尔通体感染在5种生境中均存在，农村居民区、城镇居民区、重点行业感染率分别为4.59%、3.57%和1.65%（χ²=5.746，P=0.057），灌丛和农田中小兽也存在巴尔通体感染，感染率分别为20.00%和18.18%，差异无统计学意义（P=1.000）；农村居民区和重点行业小兽存在钩体感染，感染率分别为1.59%和1.10%，差异亦无统计学意义（χ²=0.382，P=0.537）；农村居民区小兽有汉坦病毒感染，感染率为4.59%。

表 2 2020－2021年山东省部分地区不同生境小兽病原体感染情况 Table 2 The prevalence of pathogen infection of small mammals in various habitats in some areas of Shandong province

表选项

农村居民区小兽汉坦病毒、巴尔通体的感染率均为4.59%，高于钩体的感染率（1.59%），差异有统计学意义（χ²=9.828，P=0.007）；重点行业小兽存在钩体感染（1.10%）和巴尔通体感染（1.65%），但二者差异无统计学意义（χ²=0.406，P=0.524）。

本次调查范围包括东营、潍坊、威海、临沂、滨州和菏泽市共6个地区，小兽病原体携带率分别为1.99%、20.36%、5.84%、9.33%、1.74%和3.45%（表 3），潍坊市最高，滨州市最低，不同地区间小兽病原体携带率差异有统计学意义（χ²=63.119，P < 0.001）。

表 3 2020－2021年山东省不同地区小兽病原体感染情况 Table 3 The prevalence of pathogen infection of small mammals in various areas of Shandong province

表选项

不同地区小兽同一病原体感染率不同，东营、潍坊、滨州、菏泽市的钩体感染率分别为1.99%、2.40%、1.74%和1.48%，但差异无统计学意义（χ²=0.440，P=0.932）；潍坊、威海、临沂、菏泽市的巴尔通体感染率分别为5.99%、5.84%、9.33%和1.97%，差异有统计学意义（χ²=9.245，P=0.026）。

不同地区小兽感染病原体种类不同（表 3）。潍坊市小兽中携带汉坦病毒（15.57%）、钩体（2.40%）和巴尔通体（5.99%），3种病原体感染率差异有统计学意义（χ²=21.083，P < 0.001）；菏泽市小兽中携带钩体（1.48%）和巴尔通体（1.97%），2种病原体感染率差异无统计学意义（P=1.000）；东营、滨州市小兽病原体感染种类单一，为钩体，感染率分别为1.99%和1.74%；威海、临沂市小兽单一感染巴尔通体，感染率分别为5.84%和9.33%。各地区均未检测到SFTSV。

本次调查捕获的小兽以褐家鼠和小家鼠为主，与2010－2018年山东省优势鼠种为褐家鼠和小家鼠的报道基本一致^[9]，符合山东省鼠的种类和占比情况。除SFTSV外，汉坦病毒、钩体、巴尔通体均有感染，以巴尔通体感染为主，这些病原体在山东省小兽种群中自然存在，且在与人居环境较密切的褐家鼠和小家鼠鼠群中较为流行，对居民环境健康构成威胁^[8]。此外褐家鼠中存在2种病原体复合感染的情况，黑龙江省逊克县^[10]、福建省三明市^[11]、浙江省台州市^[12]等地小兽也存在类似情况，小兽病原体的复合感染模式下，一种病原体的感染会影响对其他病原体的感染，从而可能增加不同病原体的传播概率，使得居民相关疾病的风险增加^[13]。

本次调查结果显示，汉坦病毒只在褐家鼠体内检测到SEOV型感染，其他小兽中均未检测到汉坦病毒，与2015年山东省胶南县褐家鼠中存在汉坦病毒HTNV型和SEOV型感染，小家鼠存在HTNV型感染，鼩鼱存在SEOV型感染的报道结果存在差异^[14]，对于山东省内汉坦病毒携带宿主的情况需进一步探讨研究。同时在调查的6个地区中，仅在潍坊市小兽中检测到汉坦病毒，和山东省2010－2016年HFRS的调查结果较一致^[15]，潍坊市既往为HFRS病例集中区，鼠感染占比较高，后续应针对该地区采取重点防治措施。其他地区感染病原体种类主要是巴尔通体和钩体，表明不同地区小兽病原体的感染种类和感染率不同，应加强对山东省小兽病原体感染的监测，进一步摸清山东省不同地区小兽病原体感染情况，为各地区鼠传疾病预防控制提供数据支持。

本研究监测采样重点生境为城镇居民区、重点行业（餐饮、食品制售、建筑工地、屠宰场、酿造厂等）和农村居民区，在样本采集中尚存在一定的局限性，从研究结果可以看出，本次调查的小兽组织样本主要存在于与人居环境较密切的农村居民区、城镇居民区、重点行业等生境，灌丛、农田2种生境中小兽数量很少，但是巴尔通体感染率却很高。山东省耕地率为全国最高省份，是中国的农业大省，农田分布广泛，故除持续监测与人居环境较近的生境外，也应加强农田和灌丛生境中小兽病原体的监测。

本次调查选取了与山东省常见鼠传疾病相关的4种病原体，但目前已知鼠类传染人类的疾病有57种，其中病毒性疾病有31种、细菌性疾病14种、立克次体病5种、寄生虫病7种^[16]，恙虫病、无形体病等媒介生物传染病也有报道。因此，今后除继续开展对上述4种病原体的监测外，还应加强对恙虫病东方体^[10]、嗜吞噬细胞无形体、立克次体^[7]等其他病原体感染情况进行摸底调查，逐步构建山东省小兽常见病原体感染病原谱并摸清基本流行规律，为有效预防和控制鼠传疾病提供科学依据。

利益冲突  无