2022, Vol. 33扩展功能
文章信息
- 杨旭松, 江舒雅, 董昊炜, 彭恒, 马雅军
- YANG Xu-song, JIANG Shu-ya, DONG Hao-wei, PENG Heng, MA Ya-jun
- 赫坎按蚊种团分类研究进展
- Research advances in the taxonomy of Anopheles hyrcanus group
- 中国媒介生物学及控制杂志, 2022, 33(2): 313-319
- Chin J Vector Biol & Control, 2022, 33(2): 313-319
- 10.11853/j.issn.1003.8280.2022.02.028
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文章历史
- 收稿日期: 2021-12-31
杨旭松, 江舒雅, 董昊炜, 彭恒, 马雅军. 赫坎按蚊种团分类研究进展[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2022, 33(2): 313-319.
YANG Xu-song, JIANG Shu-ya, DONG Hao-wei, PENG Heng, MA Ya-jun. Research advances in the taxonomy of Anopheles hyrcanus group[J]. Chin J Vector Biol & Control, 2022, 33(2): 313-319.
赫坎按蚊种团分类研究进展
1 海军军医大学基础医学院, 上海 200433;
2 海军军医大学病原生物学教研室, 上海 200433;
3 海军军医大学海军医学系, 上海 200433
2 海军军医大学病原生物学教研室, 上海 200433;
3 海军军医大学海军医学系, 上海 200433
摘要: 赫坎按蚊种团广泛分布，其中部分种类是重要的传疟媒介，一些种类能传播丝虫病、流行性乙型脑炎等疾病，具有重要的医学意义。目前，赫坎按蚊种团分类主要依据形态学特征以及分子生物学特征，但部分蚊种的分类地位存在争议。该文就赫坎按蚊种团成员种的医学重要性、分布以及分类的研究进展进行综述。
关键词:
赫坎按蚊种团 分类 形态学 分子生物学特征 基因组
Research advances in the taxonomy of Anopheles hyrcanus group
1 College of Basic Medical Sciences, Navy Medical University, Shanghai 200433, China;
2 Department of Pathogen Biology, Navy Medical University, Shanghai 200433, China;
3 Department of Naval Medicine, Navy Medical University, Shanghai 200433, China
2 Department of Pathogen Biology, Navy Medical University, Shanghai 200433, China;
3 Department of Naval Medicine, Navy Medical University, Shanghai 200433, China
Abstract: Anopheles hyrcanus group is widely distributed. Some members are important malaria vectors, and some can transmit diseases such as filariasis and Japanese encephalitis, which have important medical significance. Nowadays, the taxonomy of An. hyrcanus group is mainly based on morphological characteristics and molecular characteristics. However there are still controversies over the taxonomic status of some species. This article reviews the medical importance and distribution of the members of An. hyrcanus group and the research advances in taxonomy of the An. hyrcanus group.
Key words:
Anopheles hyrcanus group Taxonomy Morphology Molecular biological characteristics Genome
赫坎按蚊种团（Anopheles hyrcanus group）隶属于节肢动物门（Arthropoda）六足亚门（Mandibulata）昆虫纲（Insecta）有翅亚纲（Pterygota）双翅目（Diptera）蚊科（Culicidae）按蚊属（Anopheles），广泛分布于古北界和东洋界。目前具有有效学名的赫坎按蚊种团成员种共26种[1]，可传播多种病原体，包括疟原虫、马来丝虫和流行性乙型脑炎（乙脑）病毒等，具有十分重要的医学意义。
1 医学重要性按蚊是疟疾的唯一传播媒介。全球400多种按蚊中，有67种可自然感染疟原虫，在疟疾传播中起重要作用的有41种[2]。我国最主要的传疟媒介是中华按蚊（An. sinensis）[3-4]、雷氏按蚊（An. lesteri）[5]、微小按蚊（An. minimus）[6]和大劣按蚊（An. dirus）[7]，前2种属于赫坎按蚊种团。据报道，赫坎按蚊种团中的带足按蚊（An. peditaeniatus）[8]、克莱按蚊（An. kleini）[9]、近黑按蚊（An. pullus）[10]、比伦按蚊（An. belenrae）[9]、最黑按蚊（An. nigerrimus）[11]和赫坎按蚊（An. hyrcanus）[12]也可作为疟疾的传播媒介。其中，中华按蚊和雷氏按蚊还曾经是我国丝虫病的主要传播媒介。中华按蚊[13]和带足按蚊[14]还是乙脑的传播媒介。赫坎按蚊种团数量庞大，分布广泛，对杀虫剂抗药性已有多项报道[15]，给人类健康和世界经济发展带来了严峻挑战。赫坎按蚊种团部分成员种传播疾病种类见表 1。
表 1 赫坎按蚊种团部分成员种传播疾病情况
Table 1 Diseases transmitted by some members of the Anopheles hyrcanus group
赫坎按蚊种团分布广泛，东西横跨日本至地中海，南北贯穿俄罗斯至印度尼西亚。其成员种的分布具有显著的地域性，受到温、湿度气候条件和自然环境的影响（赫坎按蚊种团成员主要分布地见表 2）。如我国广泛分布的中华按蚊，在年平均气温10 ℃以北地区几乎采集不到，年平均气温10 ℃线被认为可作为我国中华按蚊分布的北界线[16]。赫坎按蚊种团中有些种类尤其是传病蚊种的分布范围尚不明确。而传病蚊种的分布对世界范围内蚊媒病的监测和防控具有重要意义。目前，我国已消除疟疾[17]，但媒介监测仍然是我国防止输入性疟疾本地传播的重要手段。特别值得注意的是，世界卫生组织疟疾报告2021[18]显示，2020年估计全球疟疾病例2.41亿例，死亡62.7万例，均比2019年增加。疟疾疫情在全球的波动提示对传疟媒介的区系研究仍需加强。
表 2 赫坎按蚊种团成员种的主要分布地
Table 2 Main distribution areas of members of the Anopheles hyrcanus group
| 蚊种 | 主要分布地 | 蚊种 | 主要分布地 | |
| 银足按蚊（Anopheles argyropus） | 泰国、缅甸、中国[19-20] | 最黑按蚊（An. nigerrimus） | 中国、巴基斯坦、伊朗 | |
| 比伦按蚊（An. belenrae） | 中国、韩国[10, 21] | 尼姆按蚊（An. nimpe） | 越南[22] | |
| 乔杜基按蚊（An. chodukini） | 乌兹别克斯坦[23] | 小洁按蚊（An. nitidus） | 中国、泰国[24] | |
| 克劳按蚊（An. crawfordi） | 中国、印度、泰国、柬埔寨、越南、马来西亚、印度尼西亚 | 巴拉按蚊（An. paraliae） | 马来西亚、文莱、泰国[25] | |
| 恩加罗按蚊（An. engarensis） | 日本[26] | 带足按蚊（An. peditaeniatus） | 斯里兰卡[27]、阿富汗、巴基斯坦 | |
| 海拉尔按蚊（An. hailarensis） | 中国、朝鲜 | 伪色按蚊（An. pseudopictus） | 法国、西班牙、意大利、罗马尼亚 | |
| 黑河按蚊（An. heiheensis） | 中国 | 伪中华按蚊（An. pseudosinensis） | 菲律宾 | |
| 赫坎按蚊（An. hyrcanus） | 中国、伊朗、阿富汗、法国、意大利、俄罗斯 | 近黑按蚊（An. pullus） | 中国、日本、韩国、朝鲜、俄罗斯 | |
| 克莱按蚊（An. kleini） | 中国、韩国[28-29]、俄罗斯 | 普萨按蚊（An. pursati） | 泰国[25]、柬埔寨、马来西亚 | |
| 昆明按蚊（An. kunmingensis） | 中国[30] | 中华按蚊（An. sinensis） | 中国、日本[31]、印度尼西亚 | |
| 贵阳按蚊（An. kweiyangensis） | 中国 | 类中华按蚊（An. sineroides） | 中国、韩国 | |
| 雷氏按蚊（An. lesteri） | 中国、韩国、日本[26]、俄罗斯、菲律宾 | 越南按蚊（An. vietnamensis） | 越南[32] | |
| 凉山按蚊（An. liangshanensis） | 中国[33] | 许氏按蚊（An. xui） | 中国[34] | |
| 注：表中分布记录未标注引证文献者，均出自《中国动物志. 昆虫纲. 双翅目：蚊科（下卷）》。 | ||||
按蚊传统的分类方法主要以成虫形态学特征为依据，但由于赫坎按蚊种团成员种的成虫形态相似度高，存在个体多态性，容易引起分类上的争议，部分成员种几乎无法从形态学层面进行准确鉴别。随着分子生物学技术手段的进步，基于基因序列差异层面的比对催生出新的分类方法[35]。目前，赫坎按蚊种团的分类方法仍以形态学特征为基础，结合分子生物学鉴别方法并用。
3.1 形态学分类成虫触须有4个白环，唇基两侧各有一暗色鳞簇是赫坎按蚊种团各成员种成虫均具有的形态学特征。赫坎按蚊种团各成员种成虫的形态学鉴别主要依据触须、足、翅、胸、腹、雄蚊尾器的特征。我国分布的赫坎按蚊种团成员种成虫主要鉴别特征见表 3。
表 3 我国赫坎按蚊种团成员种成虫形态学鉴别特征
Table 3 Morphological identification characteristics of adult members of the Anopheles hyrcanus group in China
| 蚊种 | 触须 | 足 | 翅 | 胸 | 腹 | 雄蚊尾器 |
| 银足按蚊[19] （An. argyropus） |
白环窄，末2白环的长度均比其间黑环短 | 前基节有时仅有少数淡鳞，中和后基节有小淡鳞簇 | 前缘基部呈暗色，部分有少数棕色鳞 | 盾片暗色，前胸侧鬃4~8根 | 腹板Ⅱ~Ⅶ各有1对舌形白斑，侧膜上有明显“T”形暗斑 | 2亚基刺通常不很发达 |
| 比伦按蚊[28] （An. belenrae） |
鳞片细长，顶白环较其余3个白环略宽 | 前足、中足股节和胫节背侧顶端有白鳞，股节、胫节、跗节1腹侧有部分淡鳞，后足跗节4末端有白鳞 | 前缘暗色，亚前缘脉白斑、亚端白斑小 | 盾片深棕色，通常混杂淡黄至淡棕色鳞；前突部正中具白色鳞；前胸背鬃14~24根；翅前鬃4~13根 | 背板和腹板深棕色至黑色，覆盖有淡棕色至亮棕色刚毛 | 有2粗壮亚基刺；小抱器背叶有3毗邻等长刺，腹叶2长刺；阳茎分4~6叶 |
| 克劳按蚊[19] （An. crawfordi） |
末2白环均窄，黑环的长度约为白环的2倍 | 中足基节外侧有淡色长鳞，前足和后足基节上均无淡鳞 | 前缘脉一致暗色，亚缘脉白斑完整 | 盾片灰色，无明显的暗色纵线，两侧在翅基前方各有一明显暗色眼点 | 各节暗色，舌形白斑不明显，腹板Ⅶ中央后缘有一浓黑色鳞簇 | 抱肢基节背面有少数淡鳞 |
| 海拉尔按蚊[19] （An. hailarensis） |
细长，有4个白环，基部背侧具稀疏白鳞 | 前足和中足跗节1~3顶端有狭窄等宽白环；后足跗节1顶端有白环，跗节2~4有3个宽白环，跗节5常有基部白环 | 翅上黑白分明，翅前缘除亚前缘脉白斑、亚端白斑外一致暗色 | 中胸盾片灰色，前部至翅前区有一深色纵线；前胸侧鬃4~7根；翅前鬃6~10根；中胸后侧上部鬃6~9根 | 背侧深棕色，腹侧淡色，腹板Ⅶ后缘中央有暗鳞簇 | 抱肢基节背侧与外侧有暗鳞和刚毛 |
| 黑河按蚊[19] （An. heiheensis） |
粗糙，有白环4个，基白环较窄，其余3个白环则较宽 | 各足基节均有淡鳞簇。前、中跗节1~3均有明显的端白环 | 翅鳞黑白分明，前缘脉基部一致暗色 | 中胸盾片黄棕色，气门鬃4根，中胸上后侧鬃14根；上腹侧鬃约15根 | 舌形白斑明显，腹板Ⅶ中央具暗鳞簇，侧膜上有边缘不清的圆形暗斑 | 抱肢基节背侧与外侧有许多暗鳞，端节基部有一些细微的刺状毛 |
| 赫坎按蚊[19] （An. hyrcanus） |
细长，末2白环以及其间的黑环三者约等宽 | 各足的基节和转节上都有明显的淡色鳞簇 | 前缘的基部一致暗色，径脉干区一致乳白色 | 中胸盾片有毛状棕色鳞，前胸侧鬃4~6根，气门鬃4~5根，腹侧片上有平覆淡鳞区 | 舌形白班较明显，腹板Ⅶ上的暗鳞簇由浅棕色鳞片组成 | 侧片背面自基部到末端有乳白色鳞片遮盖 |
| 克莱按蚊[28] （An. kleini） |
鳞片细长，共有4个白环，顶白环比其余3个白环略宽，基部背侧有单个深色垂直长刚毛 | 前足、中足股节和胫节背侧顶端有白鳞，后足跗节4顶端有白鳞 | 亚尖端白斑比亚缘脉白斑短或等长，有明显的尖端白斑 | 中胸盾片深棕色，前部有2条亚中纵线和1对眼点；前突部中央有白鳞；前胸背鬃13~18根；翅前鬃5~18根 | 背板和腹板深棕色至黑色，覆盖有淡棕色至亮棕色刚毛 | 有2粗壮亚基刺；小抱器背叶有3毗邻等长刺，腹叶2长刺；阳茎分5叶 |
| 昆明按蚊[19] （An. kunmingensis） |
较粗糙，有4个白环，基白环较窄，其余3个白环则较宽 | 前、中、后足附节白环较宽，后足第4附节有基白环 | 翅鳞黑白分明，前缘脉基部一致暗色，亚缘脉白斑宽 | 中胸盾片棕色，被覆较多的淡色毛鳞和棕色刚毛，前胸侧鬃4~7根，气门鬃3~4根，翅前鬃7~9根 | 腹板Ⅶ中央具暗鳞簇，腹板上的舌形白斑明显；侧膜上有边缘不清的圆形暗斑 | 抱肢基节背侧与外侧有许多暗鳞；端节基部有一些细微的刺状毛 |
| 贵阳按蚊[19] （An. kweiyangensis） |
颜色较暗，白环都窄 | 各足的基节都有明显的淡色鳞簇 | 基部肩横脉的附近还有一个特殊的肩白斑 | 盾片棕色，中央有1条暗色纵纹 | 舌形白斑明显，腹板Ⅶ上的暗色鳞簇大而显著 | 侧片的背面有少数淡色鳞片 |
| 雷氏按蚊[19] （An. lesteri） |
较细，末2白环较宽 | 各足的基节外侧常无鳞片，附节白环比中华按蚊的窄 | 鳞片黑白分明，翅前缘的基部一致黑色 | 侧毛较少，前胸侧片鬃2~6根；气门鬃2~5根；翅前鬃3~9根；上腹侧鬃2~6根；中胸上后侧鬃3~10根 | 舌形白斑不明显，腹板Ⅶ上暗色鳞簇较小，侧膜上无“T”字形暗斑 | 侧片背面无淡色鳞片，仅有暗色鳞片与刚毛 |
| 凉山按蚊[19] （An. liangshanensis） |
触须有4个白环，基白环稍窄，其余2个白环约等宽 | 后足跗节1~4具窄的端环 | 前缘脉基部一致暗色，亚缘脉白斑和亚端白斑均完整 | 文献资料未见描述 | 腹节第2~7侧膜上有长方形暗斑，腹板Ⅶ后缘中央有明显的暗鳞簇 | 抱肢基节背侧与外侧均有暗鳞 |
| 最黑按蚊[19] （An. nigerrimus） |
较细，白环明显，末2白环有时连接 | 各足基节都有明显的淡鳞簇 | 前缘脉上除亚缘脉白斑和亚端白斑外，尚有若干散在的淡鳞 | 中胸盾片灰色，上有不明显暗色纵线和1对眼点；前胸侧鬃4~9根；气门鬃3~5根；翅前鬃2~5根 | 腹板Ⅶ中央有一簇暗鳞；第8背板后缘也常有一些暗鳞 | 抱肢基节的背面与侧面有许多淡鳞 |
| 小洁按蚊[19] （An. nitidus） |
4个白环都较窄，节2背面有许多淡色鳞 | 各足基节均有明显的淡鳞簇 | 翅前缘除亚缘白斑和亚端白斑外，基部尚有明显的膊白斑 | 中胸盾片灰色，两侧有1对明显的“眼点”；前胸侧鬃2~6根，气门鬃3~5根，中胸后侧鬃4~8根 | 舌形白斑明显；腹板Ⅶ上的暗鳞簇较小 | 肢基节背面与侧片有许多宽阔淡鳞 |
| 带足按蚊[19] （An. peditaeniatus） |
末2白环较宽，基部鳞片蓬松，背面中央有白鳞 | 前足与后足基节均无淡鳞簇，后股节和胫节背面暗色，腹面淡色，胫节有明显的端白环 | 前缘脉基部暗色，亚缘脉白斑小而不完整；径脉干区淡色；肩横脉无鳞 | 盾片浅棕色，上有暗色的正中纵条和中侧纵条；前胸侧鬃3~5根，气门鬃3~4根，翅前鬃7~10根 | 文献资料未见描述 | 抱肢基节的背面与侧面有许多淡鳞 |
| 近黑按蚊[19] （An. pullus） |
基部起第2白环宽且显著 | 各足基节都有明显的淡色鳞簇 | 翅上黑白分明，淡色鳞片呈乳白色，暗色鳞片呈浓黑色 | 盾片无鳞，前胸侧鬃3~10根，气门鬃4~9根 | 舌形白斑明显，腹板Ⅶ上的暗鳞簇大而明显，侧膜上有“T”形暗斑 | 侧片背面上有许多淡色鳞片，鳞片的数量比中华按蚊多 |
| 中华按蚊[19] （An. sinensis） |
粗壮，末尾2个白环一般等宽 | 前足基节的前缘和中腿、后腿基节的外侧各有1~2个淡色鳞簇 | 前缘基部有散在的淡色鳞片 | 盾片浅棕色，中央有1对暗棕色纵线，小盾片具黄色长刚毛及细弯淡鳞；前胸侧鬃4~10根，气门鬃2~5根 | 舌形白斑明显，腹板Ⅶ上有一个深棕色鳞片簇，侧板有一“T”字形暗斑 | 侧片的背面有许多淡色鳞片 |
| 类中华按蚊[19] （An. sineroides） |
4个白环均较窄 | 各足基节有白鳞，胫节末端有白斑 | 翅形较粗钝，前缘脉基部有2个小白斑 | 中胸盾片、前胸前背片具毛状鳞，后背片光裸 | 腹板Ⅶ暗鳞簇的附近有一淡鳞区 | 抱肢基节无淡鳞 |
| 许氏按蚊[24] （An. xui） |
深褐色，共有4个白环，白环窄而常不完整 | 各足基节淡褐色，无鳞；前足跗节1~5有不明显的端白环；中足和后足跗节1~5有窄端白环 | 前缘脉基部2/3一致暗色，亚前缘白斑狭小 | 中胸盾片淡褐色，前突部两侧有少许淡鳞，正中有一深褐色纵线；前胸侧鬃4~6根，中胸前侧板下鬃4~5根 | 背板淡褐色，有分布不均的淡斑，腹板色较淡，具端暗带，正中有褐色纵条 | 抱肢基节粗壮，亚基刺2根，内短外细长 |
应用形态学分类方法对赫坎按蚊种团所有成员种进行鉴别存在一定困难，主要体现在形态学特征的确立对标本的数量和完整性要求比较高，结果受观察工具分辨率的影响，不同地区的相同物种之间也可能存在变异，部分成员种之间形态相似，现有的分类依据难以区分。此外，在韩国[36]和我国（未发表资料）均发现自然界存在中华按蚊和克莱按蚊自然杂交的后代个体。鉴别这些个体的形态学特征更加复杂。
3.2 分子生物学鉴别分子生物学技术的引入，使赫坎按蚊种团的分类方法变得更加丰富且严谨[35]。分子生物学鉴别方法通常是比对分析基因序列，在基因序列层面寻找赫坎按蚊种团各蚊种之间的差异，基于基因序列的差异进行种类鉴别。分子生物学鉴别方法主要包括：限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）[37]、核糖体DNA内转录间隔二区（rDNA-ITS2）基因序列比较法[38-39]、基于线粒体基因组（mtDNA）基因序列比较法[39]、限制酶片段长度差异分析（RFLDs）法[40]等。各分子生物学鉴别法主要分类成果见表 4。分子生物学鉴别法辅以杂交实验、染色体核型分析和赫坎按蚊种团生态分布的相关证据，对于传统的形态学分类是一个良好的补充，可使实验结果更客观明确。
表 4 分子生物学鉴别法在赫坎按蚊种团分类中的应用
Table 4 Molecular identification methods used in taxonomy of the Anopheles hyrcanus group
| 方法 | 分类应用（引自原文表述） |
| PCR-RFLP酶切法 | 鉴别了赫坎按蚊种团中的中华按蚊、嗜人按蚊（An. anthropophagus）、雷氏按蚊和八代按蚊4个成员种。较形态学鉴别方法更准确。适合于赫坎按蚊种团近缘种按蚊的蚊种鉴别[37] |
| rDNA-ITS2区段特征基因序列比较法 | 澄清了筠连按蚊和八代按蚊、昆明按蚊和凉山按蚊的分类地位，突破了嗜人按蚊仅分布于北纬34°以南和以卵甲板宽度为分类依据的传统模式。经过多年研究，确认嗜人按蚊是雷氏按蚊的同物异名[38] |
| 基于mtDNA基因序列比较法 | 构建中国按蚊属按蚊亚属的分子系统发育树，客观地阐释了各蚊种之间的亲缘关系，mtDNA-COⅠ基因序列和多基因联合具足够的信息贡献量[39] |
| RFLDs分析法 | 建立了能显示蚊基因组中重复序列的最佳酶切条件，筛选出了3种限制性内切核酸酶：BgⅢ、HaeⅢ、PstⅠ，消化基因组后比对重复序列可将各亲缘种及地理株区别开来[40] |
| 注：PCR-RFLP表示限制性片段长度多态性聚合酶链反应；rDNA-ITS2表示核糖体DNA内转录间隔二区；mtDNA表示线粒体DNA；RFLDs表示限制酶片段长段差异分析；mtDNA-COⅠ表示线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因。 | |
应用分子生物学鉴别技术，不仅发现了赫坎按蚊种团新的成员种，也使赫坎按蚊种团中原有蚊种分类进行了调整[39]。2005年，Rueda[28]对基于ITS2基因片段的韩国赫坎按蚊种团分子研究成果进行总结分析，描述了此前Li等[41]发现的2新种，分别命名为比伦按蚊和克莱按蚊。近黑按蚊、八代按蚊、筠连按蚊（An. junlianensis）从形态学、细胞遗传学、分子生物学鉴别以及杂交实验多方面被论证为同一物种[42]。2008年，Ponçon等[43]计算赫坎按蚊和伪色按蚊ITS2、细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）和细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ（COⅡ）序列的遗传距离，结果均属于种内水平差异。之后Djadid等[44]对比采自伊朗的赫坎按蚊和伪色按蚊（An. pseudopictus）的ITS2序列差异，认为伪色按蚊是赫坎按蚊的同物异名蚊种。2013年，Taai等[45]进行了雷氏按蚊与巴拉按蚊（An. paraliae）的杂交实验，发现后代可育；并计算ITS2、COⅠ和COⅡ序列的种间遗传距离，结果相差甚小，推测二者可能为同一物种。2007年，Hwang[42]计算得出克莱按蚊与恩加罗按蚊（An. engarensis）ITS2序列遗传距离仅为0.065，认为二者属于同一物种。昆明按蚊与凉山按蚊在形态上极为相似[30, 34]，其实验室交配显示二者无生殖隔离[33]，一度被认为是同一物种，之后发现二者的ITS2区存在13处固定差异，确定二者为不同物种[46]。
同时，研究人员利用rDNA-ITS2序列重建的分子系统发育树客观地阐明了中国按蚊属按蚊亚属各种团及蚊种之间的亲缘关系，证实昆明按蚊与凉山按蚊为不同物种[47]；在原有基础上扩增、分析雷氏按蚊mtDNA-COⅠ基因序列，发现韩国和我国辽宁群体雷氏按蚊与其他分布地群体间差异大，已出现明显分化[48]。
前期大量研究表明，rDNA-ITS2序列在赫坎按蚊种团各蚊种基因序列中特异性较强，是较为理想的分子生物学鉴别特征[38, 46]。迄今为止，共有19种赫坎按蚊种团成员种的rDNA-ITS2基因序列登记在GenBank中（表 5）。这些序列经过多年验证，可作为蚊种分子生物学鉴别的参考序列。
表 5 赫坎按蚊种团部分成员种rDNA-ITS2基因序列GenBank登记号
Table 5 GenBank accession numbers of the rDNA-ITS2 gene of some members of the Anopheles hyrcanus group
| 蚊种 | rDNA-ITS2基因标准序列号 | 蚊种 | rDNA-ITS2基因标准序列号 | |
| 银足按蚊（Anopheles argyropus） | AB826061.1 | 最黑按蚊（An. nigerrimus） | AB778786.1 | |
| 比伦按蚊（An. belenrae） | AY187728.1 | 小洁按蚊（An. nitidus） | AB777802.1 | |
| 克劳按蚊（An. crawfordi） | AF261949.1 | 巴拉按蚊（An. paraliae） | AB733490.1 | |
| 恩加罗按蚊（An. engarensis） | AB159604.1 | 带足按蚊（An. peditaeniatus） | KC808755.1 | |
| 赫坎按蚊（An. hyrcanus） | AF261149.1 | 伪色按蚊（An. pseudopictus） | AM773810.1 | |
| 克莱按蚊（An. kleini） | FJ875072.1 | 近黑按蚊（An. pullus） | MF535209.1 | |
| 昆明按蚊（An. kunmingensis） | AY170920.1 | 普萨按蚊（An. pursati） | AB826072.1 | |
| 贵阳按蚊（An. kweiyangensis） | AF261150.2 | 中华按蚊（An. sinensis） | AJ004942.2 | |
| 雷氏按蚊（An. lesteri） | AJ004941.3 | 类中华按蚊（An. sineroides） | AJ620895.1 | |
| 凉山按蚊（An. liangshanensis） | AY170922.1 | |||
| 注：rDNA-ITS2表示核糖体DNA内转录间隔二区；表中列举的rDNA-ITS2基因序列除银足按蚊、类中华按蚊、最黑按蚊、小洁按蚊、巴拉按蚊、伪色按蚊、近黑按蚊、普萨按蚊、恩加罗按蚊的序列外，其余10种按蚊rDNA-ITS2基因序列均由本课题组上传。 | ||||
赫坎按蚊种团成员种分类的主要争议原因在于其部分种间分化不大，共享祖代的形态学特征，在形态结构上很类似，以传统的形态学分类无法进行准确区分。随着研究的深入，在世界各地发现了赫坎按蚊种团中存在的众多隐种[49]。研究表明，赫坎按蚊种团中的某些蚊种在基因层面是可再细分的，存在同物异名也需要进一步探讨[42-45]。前文所提到的近黑按蚊、八代按蚊和筠连按蚊，伪色按蚊与赫坎按蚊，雷氏按蚊与巴拉按蚊，克莱按蚊与恩加罗按蚊属于同物异名的结论仍需进一步确认。
基于基因层面的比对，虽解决了一些争议，但往往通过某个或某几个基因片段进行分类的结果是局部而非整体的比较，不够全面[40-41]，其争论仍未完全解决。在自然界中存在部分基因不同但交配能产生后代，且后代具有繁殖能力的现象。因此，在赫坎按蚊种团基因层面上的研究有待进一步深入，需要通过更多的数据比对得出一个客观可信的分类结论。
4 结语和展望赫坎按蚊种团中蚊种分类与亲缘关系的争论由来已久，当前分类方法都不同程度的存在局限性[37-39]。经典的形态学分类法已经无法完全满足分类的需求，随着分子技术的不断成熟，形态学分类法与分子生物学鉴别法联合使用成为当前研究方法的主流。如克莱按蚊与中华按蚊、昆明按蚊与凉山按蚊都是通过形态学加之rDNA-ITS2区段特征基因序列才得以区分；二者结合，既节省时间，减少工作量，又有较高的可信度。
自然界生物处在不断变化中，新的蚊种不断被发现[50]，现有基于基因片段的分子生物学鉴别法存在局限性，无法全面比对分析。线粒体属于细胞质细胞器，其基因组mtDNA严格遵循母体遗传，含有丰富的遗传和系统发育群体研究信息，并且其基因序列点突变率较高，可作为双翅目昆虫分类和系统进化研究的有力手段[51]。通过现有二代基因测序法或者改良多重PCR法扩增出赫坎按蚊线粒体基因组序列，比较蚊种间线粒体基因组的差异，并根据所得信息构建赫坎按蚊种团进化树，目前已经有一定数量的基于线粒体基因组的赫坎按蚊种团系统发育研究。Chen等[51]通过二代测序技术获得了中华按蚊线粒体基因组全长序列，并对中华按蚊线粒体结构进行了分析。Zhu等[52]基于线粒体基因COⅠ+tRNA+COⅡ、ATP6+COⅢ、ND1以及lrRNA片段探讨了6种赫坎按蚊种团成员种的系统发育关系，认为在赫坎按蚊种团中比伦按蚊、中华按蚊、克莱按蚊的亲缘关系较近，而雷氏按蚊、类中华按蚊、八代按蚊的关系较近。这些基于线粒体基因组的研究为赫坎按蚊种团分类探讨提供了新的数据支撑。研究发现，中华按蚊线粒体基因的数量、顺序和转录方向与其他库蚊科种类相近[51]，因此，用线粒体基因组做分析有一定的难度。但总体来说，通过线粒体全组基因的测序和研究，可得出较为系统、客观的赫坎按蚊种团分类结果，为赫坎按蚊的系统发育和群体遗传研究提供理论基础，为我国蚊媒病的防控提供帮助。
利益冲突 无
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