2026, Vol. 56
2. 中国海洋大学三亚海洋研究院，海南省热带水产种质资源重点实验室，海南 三亚 572024;
3. 青岛海洋科学与技术中心，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室，山东 青岛 266237
岩牡蛎(Crassostrea nippona)主要分布在中国浙江、韩国东海岸的江原道以南和南海岸以及日本南部沿海。由于产卵期在8—9月，且有分批多次产卵的特点，夏季的岩牡蛎体内的糖原含量依旧处于较高的水平，因此夏季肉质较好[1]。同时，弥补了夏季长牡蛎(C. gigas)因产卵而形成的市场空缺期，深受消费者的青睐，具有很高的经济价值。然而，岩牡蛎因其生长缓慢难以满足市场的需求。多倍体育种作为一种重要的育种手段，在牡蛎产业中具有重要应用。三倍体牡蛎相较二倍体，具备生长速度快和育性差的特点[2]，三倍体化是提高岩牡蛎生长速度的途径之一。目前在长牡蛎、美洲牡蛎(C. virginica)、近江牡蛎(C. rivularis)和熊本牡蛎(C. sikamea)中已成功诱导出三倍体，但尚未有诱导岩牡蛎三倍体的报道[1]。
目前大规模生产牡蛎三倍体都是通过四倍体雄性与二倍体雌性杂交获得，通过这种方式可获得100%三倍体牡蛎[2]。然而，牡蛎四倍体的首次获得通常需要以三倍体作为基础材料[3]。因此，通过人工诱导方法获得牡蛎三倍体是实现规模化生产三倍体的前提条件。目前，牡蛎三倍体人工诱导方法主要分为两种，一种是物理法，主要包括温度刺激、压力刺激和低渗处理[3]；另一种是化学法，通过6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopurine，6-DMAP)、细胞松弛素B(Cytochalasin B，CB)、咖啡因等化学物质处理[4]。化学法虽诱导率高，但存在存活率低、成本高以及对生物和环境危害大等问题[5]。物理法具有成本低、环境危害小的优点，但存在诱导率不稳定且幼虫存活困难等缺点[6]。因此，研究诱导条件对获取三倍体岩牡蛎具有重要意义。
本研究通过比较CB和低渗两种不同方法诱导岩牡蛎三倍体的效果，获得最佳的诱导方案，并进一步分析两种诱导方法对岩牡蛎三倍体幼虫生长与存活的影响，为岩牡蛎三倍体规模化养殖提供基础资料。
1 材料与方法 1.1 实验材料2023年7月自乳山养殖海区获取二龄岩牡蛎二倍体，其中岩牡蛎是2014年从日本新潟县引进，并已人工繁育至第五代。转移至山东烟台莱州进行室内促熟暂养，水温控制在27 ℃，盐度32，促熟期间每日投喂足量小球藻(Chlorella vulgaris)[7]。
1.2 精卵获取和授精挑选外壳完整的岩牡蛎二倍体个体作为亲本。解剖后用光学显微镜鉴定雌雄。挑选卵质均匀的个体作为母本，精子活力旺盛的个体作为父本，雌雄个体分开放置。人工挤精取卵后用300目筛绢网对卵子进行过滤，去除多余组织块。将获取的卵子置于含有砂滤海水的塑料桶中熟化1 h，精子于授精前10 min取出备用。水温控制在26~28 ℃，盐度30~32[8-10]。
1.3 CB和低渗处理诱导岩牡蛎三倍体 1.3.1 CB诱导处理在最佳诱导浓度实验中将卵液均分为5份，控制卵子密度为1×107个/L[11-12]。授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵第一极体(PB1)出现20%时[13]，分别使用不同CB浓度(0.3、0.5、0.7和0.9 mg/L)[10]诱导处理15 min，对照组不加CB。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次，然后在受精卵液中加入1 mg/L二甲基亚砜[14]浸泡1 h，随后用500目筛绢网洗卵3~4次。在最佳诱导持续时间实验中，授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵PB1出现20%时，同时使用最佳CB浓度，分别持续诱导8、12、16和20 min，对照组不加CB。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次，然后在受精卵液中加入1 mg/L二甲基亚砜浸泡1 h，随后用500目筛绢网洗卵3~4次。在最佳诱导处理时机实验中，授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵PB1分别出现(20%、30%、40%和50%)时，使用最佳CB浓度处理，并同时采用最佳处理时长，对照组不加CB。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次，然后在受精卵液中加入1 mg/L二甲基亚砜浸泡1 h，随后用500目筛绢网洗卵3~4次。以上实验每组均设置3次重复，并设置正常受精组作为对照。
1.3.2 低渗诱导处理在最佳诱导盐度实验中将卵液均分为5份，控制卵子密度为1×107个/L[15-16]。授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵PB1出现20%时，分别使用不同盐度(5、7、9和11)[10]诱导处理15 min，对照组使用正常海水盐度。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次。在最佳诱导持续时间实验中，授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵PB1出现20%时，同时使用最佳盐度，分别持续诱导8、12、16和20 min，对照组使用正常海水盐度[17-20]。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次[21]。在最佳诱导处理时机实验中，授精后通过显微镜观察受精情况，当受精卵PB1分别出现(20%、30%、40%和50%)时，同时使用最佳盐度和诱导处理时长进行诱导，对照组使用正常海水盐度[22]。处理完成后用500目筛绢网洗卵3~4次。以上实验每组均设置3次重复，并设置正常受精组作为对照。
1.4 幼虫培育受精后，将各处理组的受精卵分别转移至含有砂滤海水的50 L塑料桶中孵化，持续通入适量氧气。孵化24 h后，对各实验组的幼虫进行选优并转移至70 L塑料桶中进行下一步培育。每日投喂3次适量等鞭金藻(Isochrysis galbana)，每日换水总体积的1/3，持续培养至8日龄。
1.5 数据测量与分析对各实验组的幼虫进行取样，用授精后4 h卵裂数与总卵数的百分比来计算幼虫的卵裂率，用D形幼虫数与受精卵的百分比来计算孵化率，用单位体积内幼虫数与选优后初始幼虫数的百分比来计算存活率，用幼虫三倍体率与孵化率的乘积来计算综合评价指数。其中，各组幼虫的三倍体率在2和8 d时使用流式细胞仪测定。采用SPSS 24.0进行实验数据分析，显著性水平设定为P < 0.05[23-25]。
2 结果 2.1 不同CB浓度与盐度处理对岩牡蛎幼虫三倍体率的影响使用不同CB浓度诱导岩牡蛎三倍体时，随着浓度的增加，各组卵裂率和孵化率逐渐降低，三倍体率与综合评价指数呈先增大后减小的趋势。当CB浓度为0.5 mg/L时，该处理组的三倍体率为(59.24± 1.88)%，综合评价指数最高(31.6%)，且与其他浓度实验组存在显著性差异(P < 0.05，见图 1A)。综上所述，CB诱导岩牡蛎三倍体的最佳诱导浓度为0.5 mg/L。
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( A. CB诱导组，图示0.3、0.5、0.7和0.9为不同诱导浓度(mg/L)，图示CG为对照组。B. 低渗诱导组，图示5、7、9和11为不同盐度，图示CG为对照组。横坐标中，1表示卵裂率，2表示孵化率，3表示三倍体率，4表示综合评价指数。不同字母上标表示差异显著(P < 0.05)，下同。A. CB induction group, the sample graphs 0.3, 0.5, 0.7, and 0.9 show different induction concentrations(mg/L), the sample graph CG show control group. B. Hyptonic induction group, the sample graphs 5, 7, 9, and 11 show different salinities, the sample graph CG show control group. In the horizontal coordinate, 1 represents the cleavage rate, 2 represents the hatching rate, 3 represents the triploidy rate, 4 represents the comprehensive evaluation index. Different superscript letters indicate significant differences (P < 0.05), and the same applies below. ) 图 1 不同CB浓度和盐度诱导岩牡蛎三倍体的卵裂率、孵化率、三倍体率和综合评价指数 Fig. 1 Cleavage rate, hatching rate, triploidy rate, and comprehensive evaluation index for inducing triploidy in Crassostrea nippona under different CB concentrations and salinities |
使用不同盐度诱导岩牡蛎三倍体时，随着盐度的不断增加，幼虫的卵裂率和孵化率逐渐增大，三倍体率和综合评价指数呈先升高后降低的趋势。当盐度达到7时，幼虫三倍体率最高((39.78±2.58)%)，综合评价指数最大(23.68%)，与盐度5的诱导组的三倍体率无显著性差异(P>0.05)，而在综合评价指数上存在显著性差异(P < 0.05)，与盐度9的诱导组在三倍体率和综合评价指数两个指标上都存在显著性差异(P < 0.05，见图 1B)。综上所述，低渗诱导组的最佳诱导盐度为7。
2.2 不同诱导持续处理时间对岩牡蛎幼虫三倍体率的影响CB持续处理不同时间诱导岩牡蛎三倍体时，随着诱导处理时间的延长，岩牡蛎幼虫的卵裂率和孵化率逐渐降低，三倍体率和综合评价指数呈先增大后减小的趋势。当诱导持续处理时间为16 min时，实验组的三倍体率最高((60.82±2.59)%)，综合评价指数最大(28.43%)，与其他实验组之间存在显著性差异(P < 0.05，见图 2A)。综上所述，在CB诱导岩牡蛎三倍体实验中，最佳的CB持续处理时间为16 min。
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( A. CB诱导组。B. 低渗诱导组。图示中，8、12、16和20为不同诱导持续时间(min)，CG为对照组。横坐标中，1表示卵裂率，2表示孵化率，3表示三倍体率，4表示综合评价指数。A. CB induction group. B. Hyptonic induction group. The sample graphs 8, 12, 16, and 20 show different induction durations(min), the sample graph CG show control group. In the horizontal coordinate, 1 represents the cleavage rate, 2 represents the hatching rate, 3 represents the triploidy rate, 4 represents the comprehensive evaluation index. ) 图 2 不同诱导持续时间下诱导岩牡蛎三倍体的卵裂率、孵化率、三倍体率和综合评价指数 Fig. 2 Cleavage rate, hatching rate, triploidy rate, and comprehensive evaluation index for inducing triploidy in Crassostrea nippona under different induction durations |
低渗持续处理不同时间诱导岩牡蛎三倍体时，随着低渗处理时间的延长，岩牡蛎幼虫的卵裂率和孵化率逐渐降低，三倍体率和综合评价指数呈先增大后减小的趋势。当诱导持续处理时间为16 min时，实验组的三倍体率为(39.36±1.79)%，综合评价指数最高(23.51%)，且16 min处理组与12 min处理组在三倍体率上无显著性差异(P>0.05)，在综合评价指数上有显著性差异(P < 0.05)；16 min处理组与20 min处理组在三倍体率和综合评价指数上都存在显著性差异(P < 0.05，见图 2B)。综上所述，在低渗诱导岩牡蛎三倍体实验中，最佳的低渗持续处理时间为16 min。
2.3 不同诱导处理时机对岩牡蛎幼虫三倍体率的影响采用不同时机进行CB诱导处理时，随着PB1排出率的增加，各组间岩牡蛎幼虫的卵裂率和孵化率无显著性差异(P>0.05)，三倍体率和综合评价指数呈先增大后减小的趋势。当PB1排出率达到30%时，实验组的三倍体率最高((69.71±2.59)%, 见图 3A)，综合评价指数最高(42.39%)，与其他实验组之间存在显著性差异(P < 0.05，见图 4A)。综上所述，在CB诱导岩牡蛎三倍体实验中，最佳的诱导处理时机为PB1排出率达30%。
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( A. CB诱导组。B. 低渗诱导组。横坐标中，PB450-A表示荧光素标记抗体；纵坐标中，Count表示被荧光标记的细胞数量。A. CB induction group. B. Hyptonic induction group. In the horizontal coordinate, PB450-A indicate the fluorescently labeled antibody; in the vertical coordinate, Count indicate the number of cells labeled with fluorescence. ) 图 3 不同诱导方法诱导岩牡蛎三倍体的幼虫倍性 Fig. 3 Larval ploidy of triploid Crassostrea nippona under different induction methods |
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( A. CB诱导组。B. 低渗诱导组。图示中，20%、30%、40%和50%为不同诱导处理时机，CG为对照组。横坐标中，1：卵裂率；2：孵化率；3：三倍体率；4：综合评价指数。A. CB induction group. B. Hyptonic induction group. The sample graphs 20%, 30%, 40%, and 50% show different induction treatment timings, the sample graph CG show control group. In the horizontal coordinate, 1 represents the cleavage rate, 2 represents the hatching rate, 3 represents the triploidy rate, 4 represents the comprehensive evaluation index. ) 图 4 不同诱导处理时机下诱导岩牡蛎三倍体的卵裂率、孵化率、三倍体率和综合评价指数 Fig. 4 Cleavage rate, hatching rate, triploid rate, and comprehensive evaluation index of triploid Crassostrea nippona under different induction treatment timings |
采用不同时机进行低渗诱导处理时，随着PB1排出率的增加，岩牡蛎幼虫的卵裂率和孵化率无显著性差异(P>0.05)，三倍体率和综合评价指数呈先增大后减小的趋势。当PB1排出率达到30%时，实验组的三倍体率最高((41.82±1.79)%，见图 3B)，综合评价指数最高(24.82%)，与其他实验组之间存在显著性差异(P < 0.05，见图 4B)。综上所述，在低渗诱导岩牡蛎三倍体实验中，最佳的诱导处理时机为PB1排出率达30%。
2.4 不同诱导方法对岩牡蛎幼虫三倍体率的影响在幼虫存活率方面，CB组和低渗组的幼虫存活率始终低于对照组，CB组幼虫存活率在6日龄之前显著低于低渗组(P < 0.05)，但8日龄之后CB组显著高于低渗组(P < 0.05)。CB组在12日龄的幼虫存活率为(20.97±5.25)%，低渗组为(8.63±2.14)%，对照组为(43.69±6.58)%。2日龄幼虫存活率对照组显著高于低渗组和CB组(P < 0.05)，低渗组显著高于CB组(P < 0.05)；4日龄结果与2日龄相同；6日龄幼虫存活率对照组显著高于低渗组和CB组(P < 0.05)，低渗组高于CB组，但无显著性差异(P>0.05)；8~12日龄幼虫存活率对照组显著高于CB组和低渗组(P < 0.05)，CB组显著高于低渗组(P < 0.05，见图 5)；在6~8日龄期间，低渗组出现了大规模死亡，存活率低于CB组。
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图 5 不同诱导方法最佳诱导条件下诱导岩牡蛎三倍体的幼虫存活率 Fig. 5 Survival rate of triploid Crassostrea nippona larvae under optimal induction conditions with different induction methods |
CB是一种有效的诱导剂，能够抑制微管的聚合，导致纺锤体无法形成，从而影响染色体的正常分离[26-29]。因此，通过在合适的浓度和作用时间下，CB可抑制卵或胚胎的染色体分离，从而诱导出非整倍体细胞，最终发育形成三倍体[12]。低渗盐度处理通过改变细胞外渗透压影响胚胎发育，从而在一定程度上干扰卵细胞减数分裂的正常进行。低渗环境可以导致胚胎细胞内外的水分重新分布，从而改变细胞形态和分裂过程中纺锤体的稳定性[26-29]。这种作用类似于物理性应激处理，通过延迟染色体的分离，促使极体释放异常，进而形成三倍体胚胎。
3.2 两种诱导方法诱导岩牡蛎三倍体的影响因素本研究发现，随着CB浓度的增加，三倍体率呈现出一定的变化趋势[11]。这是因为CB浓度过低可能无法有效抑制纺锤体形成，而过高的浓度可能导致细胞毒性增加，从而影响胚胎发育的质量。因此，适宜的CB浓度是确保高效三倍体率的关键。CB的作用效果还与处理时间密切相关，过短的处理时间可能不足以抑制纺锤体形成，而过长的处理时间可能对胚胎发育造成不可逆的损害[26-29]。自1984年，Stanley等[14]通过CB抑制受精卵第一极体或第二极体的排出，首次成功诱导出三倍体美洲牡蛎成贝，CB作为牡蛎三倍体诱导剂的应用已有约40年历史。但影响CB诱导牡蛎三倍体效率的因素有很多，本研究旨在探究最佳的CB诱导条件组合。
适中的低渗盐度能够有效提高三倍体的诱导率，同时对胚胎的生长和发育表现出较低的负面影响[20]。然而，过低的盐度可能导致细胞胚胎死亡率增加，原因在于过度应激会破坏细胞膜的稳定性[30]。孔静等[24]研究发现，随着盐度的不断升高，牡蛎三倍体的诱导率显著下降，而随着盐度降低，虽然三倍体率有所提高，但胚胎的卵裂率和孵化率却显著降低[10]。本研究未采用Guo等[27]使用的最佳持续诱导时间15 min，由于岩牡蛎卵径显著小于长牡蛎[1]，其细胞体积与表面积的比值可能不同，这可能导致诱导剂渗透或低渗刺激的效率存在差异，因此，本研究重新设计了时间梯度，旨在找出更加符合岩牡蛎的持续处理时间。
在三倍体诱导过程中，CB和低渗处理两种途径都是通过抑制第二极体(PB2)的排出，从而保留来自卵母细胞的两个染色体组，其与来自精子的一个染色体组共同形成三倍体[27]。如果诱导时机与PB1的排出进程不匹配，卵子可能已经完成了PB2排出或者减数分裂进程过早终止，导致无法有效干预染色体组数目，进而降低三倍体率[28]。
3.3 两种诱导方法诱导岩牡蛎三倍体的效果比较在牡蛎三倍体诱导研究中，化学诱导(6-DMAP、CB)和物理诱导(低渗、静水压)是两种常用的方法[31]。在进行岩牡蛎三倍体诱导时，CB组最高诱导率为69.71%，低渗组最高诱导率为41.82%，与于瑞海等、孔静等[24]用相同诱导方法诱导长牡蛎的三倍体率(89.13%)相比存在一定差距。这可能是种质不同造成的，岩牡蛎的卵径比长牡蛎小很多，导致同样的方法很难获得相同的实验效果[1]。
在幼虫生长存活方面，相较CB组低渗组前期有着较高的存活率和生长速率，但后期低渗组幼虫发生大量死亡，原因可能是诱导出大量非整倍体。Nell等[22]通过6-DMAP诱导出的悉尼岩牡蛎(Saccostrea glomerata)三倍体中含有最高11%非整倍体，而非整倍体由于缺失完整遗传物质，导致其无法正常发育，从而出现大批死亡现象[31]。
在诱导操作方面，CB组的优势在于诱导效率高且操作相对简单，但对实验条件要求较高，需要严格控制浓度和作用时间[14]；低渗组的优势在于无化学毒性，更加安全和环保，但诱导效率易受到盐度梯度和处理时间的限制[24]。综上所述，若需快速高效获得岩牡蛎三倍体，建议采用CB诱导法；若需大规模养殖获得岩牡蛎三倍体，建议采用低渗诱导法，但考虑到低渗诱导法诱导效率较低，可能需要配合其他技术以提升整体效果。
4 结语本研究发现，CB诱导法诱导岩牡蛎三倍体，最佳CB浓度为0.5 mg/L，最佳诱导持续时间为16 min；最佳诱导处理时机为PB1排出率达30%；低渗诱导法诱导岩牡蛎三倍体，最佳盐度为7，最佳诱导持续时间为16 min，最佳诱导处理时机为PB1排出率达30%。CB和低渗两种方法在诱导岩牡蛎三倍体方面各有优劣，CB诱导效率高但毒性风险较大，而低渗方法安全环保但诱导效率稍低。在本研究条件下，CB诱导法获得的三倍体率及后续幼虫存活率均高于低渗诱导法，这可能是更有效诱导岩牡蛎三倍体的方法。
| [1] |
李文姬. 岩牡蛎的生物学及其养殖[J]. 水产科学, 2007(12): 689-690. Li W J. Biology and cultivation of oyster Crassostrea nippona[J]. Fisheries Science, 2007(12): 689-690. (  0) |
| [2] |
Li Q, Liu W G, Shirasu K, et al. Reproductive cycle and biochemical composition of the Zhe oyster Crassostrea plicatula Gmelin in an eastern coastal bay of China[J]. Aquaculture, 2006, 261(2): 752-759. DOI:10.1016/j.aquaculture.2006.08.023 ( 0) |
| [3] |
Guo X M, DeBrosse G A, Allen S K, et al. All-triploid Pacific oysters Crassostrea gigas(Thunberg) produced by mating tetraploids and diploids[J]. Aquaculture, 1996, 142(3-4): 149-161. DOI:10.1016/0044-8486(95)01243-5 ( 0) |
| [4] |
Downing S L, AllenS K. Induced triploidy in the Pacific oyster, Crassostrea gigasOptimal treatments with cytochalasin B depend on temperature[J]. Aquaculture, 1987, 61(1): 1-15. ( 0) |
| [5] |
Richard R D, André G, Jean-Marie P, et al. A novel method to produce triploids in bivalve molluscsby the use of 6-dimethylaminopurine[J]. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 1993, 170(1): 29-43. DOI:10.1016/0022-0981(93)90127-A ( 0) |
| [6] |
Guo X M, Cooper K, Hershberger W K, et al. Genetic consequences of blocking polar body Ⅰ with cytochalasin B in fertilized-eggs of the Pacific oyster, Crassostreagigas: Ⅰ. ploidy of resultant embryos[J]. Biological Bulletin, 1992, 183(3): 381-386. DOI:10.2307/1542013 ( 0) |
| [7] |
EudelineB, Allen S K, Guo X M. Optimization of tetraploid induction in Pacific oysters, Crassostrea gigas, using first polar body as a natural indicator[J]. Aquaculture, 2000, 187(1-2): 73-84. DOI:10.1016/S0044-8486(00)00302-1 ( 0) |
| [8] |
Qin Y, Li X, Noor Z, et al. A comparative analysis of the growth, survival and reproduction of Crassostrea hongkongensis, Crassostrea ariakensis, and their diploid and triploid hybrids[J]. Aquaculture, 2020, 520: 734946. DOI:10.1016/j.aquaculture.2020.734946 ( 0) |
| [9] |
Barreto-Hernández A, Velasco L A, Winkler F M. Effect of three triploidy induction methods on the growth and survival of larvae and post-larvae of the Caribbean scallop Argopecten nucleus[J]. Aquaculture Research, 2018, 49(4): 1578-1587. DOI:10.1111/are.13612 ( 0) |
| [10] |
周建民, 姜高伟, 徐成勋, 等. 细胞松弛素B和低盐诱导长牡蛎"海大3号"四倍体的效果比较[J]. 水生生物学报, 2023, 47(4): 617-623. Zhou J M, Jiang G W, Xu C X, et al. Tetraploid induction of the Pacific oyster "Haida No. 3" using cytochalasin B and low salinity[J]. Journal of Hydroecology, 2023, 47(4): 617-623. ( 0) |
| [11] |
Qin Y P, Shu X, Ma H T, et al. Effects of salinity and temperature on the timing of germinal vesicle breakdown and polar body release in diploid and triploid Hong Kong oysters, Crassostrea hongkongensis, in relation to tetraploid induction[J]. Aquaculture Research, 2018, 49(11): 3647-3657. DOI:10.1111/are.13833 ( 0) |
| [12] |
Guo X, Allen S K. Reproductive potential and genetics of triploid Pacific oysters, Crassostrea gigas (Thunberg)[J]. The Biological Bulletin, 1994, 187(3): 309-318. DOI:10.2307/1542288 ( 0) |
| [13] |
王如才, 王昭萍, 田传远, 等. 我国太平洋牡蛎三倍体育苗与养殖技术研究进展[J]. 青岛海洋大学学报, 2002, 32(2): 193-200. Wang R C, Wang Z P, Tian C Y, et al. Advances in triploid breeding and culturing techniquesin the Pacific oyster (Crassostrea gigas) in China[J]. Journal of Qingdao Ocean University, 2002, 32(2): 193-200. ( 0) |
| [14] |
Stanley J G, Allen S K, Hidu H, et al. Polyploidy induced in the American oyster, Crassostrea virginica, with cytochalasin B[J]. Aquaculture, 1981, 37(1-4): 1-10. ( 0) |
| [15] |
Desrosiers R R, Gerard A, Peignon J M, et al. A novel method to produce triploids in bivalve mollusks by the use of 6-Dimethylaminopurine[J]. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 1993, 170(1): 29-43. DOI:10.1016/0022-0981(93)90127-A ( 0) |
| [16] |
Yang H P, Zhang F S, Guo X M, et al. Triploid and tetraploid zhikong scallop, Chlamys farreri Jones et Preston, produced by inhibiting polar body Ⅰ[J]. Marine Biotechnology, 2000, 2(5): 466-475. DOI:10.1007/PL00021688 ( 0) |
| [17] |
李海昆, 张哲, 于瑞海, 等. 6-DMAP和不同盐度诱导长牡蛎"海大1号"四倍体的比较研究[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2021, 51(S1): 136-145. Li H K, Zhang Z, Yu R H, et al. A comparative study on the effectiveness of 6-DMAP and different salinities in inducing tetraploid Crassostrea gigas "Haida No. 1"[J]. Periodical of Ocean University of China, 2021, 51(S1): 136-145. DOI:10.16441/j.cnki.hdxb.20190324 ( 0) |
| [18] |
陆莉莉, 高云云, 徐成勋, 等. 三种方法诱导福建牡蛎三倍体的比较研究[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2024, 54(11): 157-164. Lu L L, Gao Y Y, Xu C X, et al. A comparison of three triploid induction methods in Crassostrea angulate[J]. Periodical of Ocean University of China, 2024, 54(11): 157-164. DOI:10.16441/j.cnki.hdxb.20230225 ( 0) |
| [19] |
于瑞海, 王昭萍, 王如才, 等. 三种化学诱导剂诱导太平洋牡蛎三倍体的比较研究[J]. 青岛海洋大学学报, 2000, 30(4): 589-592. Yu R H, Wang Z P, Wang R C, et al. Comparative studies on triploidy induction using three chemicals in Pacific oyster[J]. Journal of Qingdao Ocean University, 2000, 30(4): 589-592. ( 0) |
| [20] |
岳超, 李永国, 李琪. 长牡蛎壳橙品系三倍体的人工诱导[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2021, 51(S1): 128-135. Yue C, Li Y G, Li Q. Artificial triploid induction of orange-shell line of the Pacific oyster Crassostrea gigas[J]. Periodical of Ocean University of China, 2021, 51(S1): 128-135. DOI:10.16441/j.cnki.hdxb.20190170 ( 0) |
| [21] |
Qin Y P, Noor Z, Li X Y, et al. Tetraploid induction of Crassostrea hongkongensis and C. sikamea by inhibiting the polar body I release in diploid fertilized eggs[J]. Marine Life Science & Technology, 2021, 3: 463-473. ( 0) |
| [22] |
Nell J A, Perkins B. Studies on triploid oysters in Australia: Farming potential of all-triploid Pacific oysters, Crassostrea gigas (Thunberg), in Port Stephens, New South Wales, Australia[J]. Aquaculture Research, 2005, 36(6): 530-536. DOI:10.1111/j.1365-2109.2005.01229.x ( 0) |
| [23] |
程庚, 徐成勋, 李永国, 等. 6-DMAP和低渗诱导长牡蛎"海大2号"三倍体的研究[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2023, 53(2): 44-50. Cheng G, Xu C X, Li Y G, et al. A study on the effects of 6-DMAP and hypotonic treatment ininducing triploid Crassostrea gigas "Haida No.2"[J]. Periodical of Ocean University of China, 2023, 53(2): 44-50. ( 0) |
| [24] |
孔静, 王昭萍, 于瑞海, 等. 低渗诱导太平洋牡蛎三倍体以及与其他诱导方法的比较[J]. 中国水产科学, 2011, 18(3): 581-587. Kong J, Wang Z P, Yu R H, et al. Triploid induction in Pacific oyster (Crassostrea gigas) by hypotonic treatment and comparison with other induction methods[J]. Chinese Journal of Fisheries Science, 2011, 18(3): 581-587. ( 0) |
| [25] |
张国范, 常亚青, 宋坚, 等. 不同方法制备的三倍体长牡蛎养殖效果的比较[J]. 水产学报, 2000, 24(4): 324-328. Zhang G F, Chang Y Q, Song J, et al. Comprehensive comparison between triploid oysters induced with CB and 6-DMAP[J]. Journal of Fisheries of China, 2000, 24(4): 324-328. ( 0) |
| [26] |
Piferrer F, Beaumont A, Jean-Claude F, et al. Polyploid fish and shellfish: Production, biology and applications to aquaculture for performance improvement and genetic containment[J]. Aquaculture, 2009, 293(3-4): 125-156. DOI:10.1016/j.aquaculture.2009.04.036 ( 0) |
| [27] |
Guo X M, Hershberger W K, Cooper K, et al. Genetic consequences of blocking polar body Ⅰ with cytochalasin B in fertilized eggs of the Pacific oyster, Crassostrea gigas: Ⅱ. segregation of chromosomes[J]. Biological Bulletin, 1992, 183(3): 387-393. DOI:10.2307/1542014 ( 0) |
| [28] |
Xu L, Li Q, Xu C X, et al. Genetic diversity and effective population size in successive mass selected generations of black shell strain Pacific oyster (Crassostrea gigas) based on microsatellites and mtDNA data[J]. Aquaculture, 2019, 500: 338-346. DOI:10.1016/j.aquaculture.2018.10.007 ( 0) |
| [29] |
王昭萍, 赵婷, 于瑞海, 等. 一种新方法——低渗诱导虾夷扇贝三倍体的研究[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2009, 39(2): 193-196. Wang Z P, Zhao T, Yu R H, et al. A new method for triploid induction by hypotonic treatment in scallop Patinopecten yessoensis[J]. Periodical of Ocean University of China, 2009, 39(2): 193-196. DOI:10.16441/j.cnki.hdxb.2009.02.004 ( 0) |
| [30] |
陈洪发, 王昭萍, 于瑞海, 等. 不同盐度海水对低盐诱导长牡蛎三倍体的影响[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 2016, 46(9): 24-28. Chen H F, Wang Z P, Yu R H, et al. Effect of salinity on the induction of triploid oyster (Crossotrea gigas)[J]. Periodical of Ocean University of China, 2016, 46(9): 24-28. DOI:10.16441/j.cnki.hdxb.20150212 ( 0) |
| [31] |
Qin Y P, Shi G P Y, Wan W T, et al. Comparative analysis of growth, survival and sex proportion among tetraploid-based autotriploid (Crassostrea gigas and C. angulata) and their allotriploid oysters[J]. Aquaculture, 2023, 563: 739026. DOI:10.1016/j.aquaculture.2022.739026 ( 0) |
2. Key Laboratory of Tropical Aquatic Germplasm of Hainan Province, Sanya Oceanographic Institution, Ocean University of China, Sanya 572024, China;
3. Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao Marine Science and Technology Center, Qingdao 266237, China