呼吸道感染是常见的一种感染性疾病，是由于机体免疫低下、病原微生物入侵等多种因素综合作用造成呼吸道微生态平衡的结果，至今无特效的预防手段。Belliveau早在1973年就提出了呼吸道正常菌群与病原菌感染的关系。近年来，研究呼吸道微生态也成为了研究者关注的焦点^{[1, 2]}。如何在保护微生态的基础上，通过恢复和调整菌群平衡达到治疗疾病、消除感染成为呼吸病学领域的新课题。为了解青年上呼吸道正常微生物菌群情况，本研究在2012年3月—2012年12月抽取辽宁省沈阳市43名18~23岁青年进行上呼吸道分泌物检查，并分析其菌群构成和比例，现将结果报告如下。 对象与方法

(1)对象：随机抽取沈阳医学院身体健康，不吸烟不喝酒，近3个月无呼吸系统疾病发生，无抗生素药物服用史，无特殊粉尘、气体接触史的43名18~23岁大学生，其中男生20人，女生23人。(2)方法：①主要实验仪器与试剂：生化培养箱(上海一恒公司 BPC-150F型)、厌氧培养箱(美国THERMO公司 1029型)、CO₂培养箱(日本SL公司 TC2323型)、医用超净工作台(苏州净化 SW-CJ-FD型)、立式压力蒸汽灭菌器(日本HIRAYAMA公司 HVE-50型)、生物显微镜(日本 OLYMPUS BX41型)、TAB细菌鉴定仪(法国梅里埃公司 ATB new型)。ATB细菌鉴定条和试剂由法国梅里埃公司提供、其他试剂由北京奥博星生物技术有限公司提供、血培养基用羊血由沈阳医学院实验动物研究中心提供。②标本采集及细菌培养：研究对象清晨空腹状态，以无菌生理盐水漱口后，以无菌咽拭子在咽后壁涂抹取样，立即放人装有 2 mL 无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)及 玻璃珠的小安培瓶中，震荡以使标本均匀分散于缓冲液体中。2 h内在超净工作台中进行10倍稀释，并分别接种培养于普通血琼脂平皿、厌氧血琼脂平皿、沙保弱琼脂平皿、MRS琼脂平皿、巧克力琼脂平皿。其普通血琼脂平皿 、沙保弱琼脂平皿置于 37 ℃ 需氧培养 18～24 h；巧克力琼脂平皿置于 35～37 ℃ 5％ CO 培养箱培养18～24 h；MRS琼脂平皿和厌氧血平板置于37 ℃厌氧箱培养 48～72 h。应用菌落计数法，观察各平板上的菌落种类和计数菌落种类、菌株数、优势菌所占的比例，并做详细记录。③分离纯化及镜检：挑选每种单个菌落分别转种于上述5种培养基上，培养方式同上，分离纯化直到得到纯菌株。分别挑取每种单菌落涂片、应用革兰氏染色法染色、用15×100倍光镜下观察，依据《临床常见细菌鉴定表解》^[3]进行细菌形态特征、革兰氏染色性质、排列及结构的鉴别，并详细描述和记录。④生化鉴定：根据镜检结果，将细菌制备菌悬液，按试剂说明书，加样到法国梅里埃公司细菌生化鉴定试剂条，生化培养箱37 ℃培养4 h，应用TAB细菌鉴定仪鉴定出菌种和菌属名称。(3)统计分析:应用SPSS10.0软件描述性分析,需氧菌及厌氧菌检出率用百分数表示，菌群密度为lgn,n为每个检出标本的细菌数，用x±s表示。 结 果

(1)菌群测定结果：43名18~23岁青年咽后壁菌群检测结果为需氧菌92 655×10⁷ CFU/mL，厌氧菌26 835×10⁷ CFU/mL，需氧菌与厌氧菌数量之比为3.5∶1。(2)需氧菌检出率及密度：需氧菌检出率从高到低依次为口腔链球菌(0.63%)、灰色奈瑟菌(0.50%)、缓症链球菌(0.33%)、白假丝酵母菌(0.33%)、中间链球菌(0.30%)、表皮葡萄球菌(0.30%)等；菌群密度从高到低依次为缓症链球菌、白假丝酵母菌、口腔链球菌、灰色奈瑟菌、中间链球菌，菌群密度分别为(7.024 9±0.778 0)、(6.792 3±0.618 2)、(6.674 5±0.634 1)、(6.614 1±0.675 3)、(6.339 3±0.769 8)log10ⁿ。(3)厌氧菌的检出率及密度：厌氧菌检出率从高到低依次为小韦容球菌(0.70%)、解脲拟杆菌(0.50%)、麻疹孪生球菌(0.30%)、不解乳真杆菌(0.30%)、生痰二氧化碳嗜纤维菌属(0.30%)等；菌群密度依次为小韦容球菌、解脲拟杆菌、不解乳真杆菌、麻疹孪生球菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌属，菌群密度分别为(6.277 0±0.338 2)、(5.975 3±0.509 7)、(5.930 3±0.633 3)、(5.841 8±0.983 4)、(5.681 0±1.171 3)。 讨 论

正常情况下，健康人呼吸道存在着不同种类和数量的微生物，多达21个菌属200多个菌种^[4]，这些菌种成为人体的固有“正常菌群”。研究报道定植于上呼吸道“正常菌群” 它们与宿主环境相互协调、相互制约、保持呼吸道微生态体系的动态平衡，构成抵御外环境变化的微生物屏障^[5]。其作用机制^{[6, 7]}为“正常菌群”阻止病原微生物附着在粘膜上，特异性地刺激免疫系统，诱导抗体的合成。本实验结果显示，沈阳市18~23岁青年人呼吸道检出的需氧菌和厌氧菌数量之比为 3.5∶1，与肖纯凌等报道的7~9岁儿童上呼吸道微态状况比较有明显不同^[8]。从检出率来看，需氧菌的优势菌从高到低依次为口腔链球菌、灰色奈瑟菌、缓症链球菌、白假丝酵母菌、中间链球菌；厌氧菌检的优势菌从高到低依次为小韦容球菌、解脲拟杆菌、麻疹孪生球菌、不解乳真杆菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌属。从菌群密度看，需氧菌菌群密度也高于厌氧菌菌群。从菌株的检出率和构成比看，厌氧菌小韦容球菌检出率为70%，构成比为21%；需氧菌口腔链球菌检检出率为63%，构成比为20.8%。提示检出率高的菌种与其构成比基本呈正比。