中国公共卫生  2010, Vol. 26 Issue (4): 464-465   PDF    
引用本文
晁漪澜, 林培政, 罗炳德, 李华峰, 万为人, 郭进强. NF-κB对小鼠冠状病毒性肝炎致病作用[J]. 中国公共卫生, 2010, 26(4): 464-465.
CHAO Yi-lan, LIN Pei-zheng, LUO Bing-de, et al. Expression of NF-κB and ThI/Th2 in mice with mouse hepatitis virus infection[J]. Chinese Journal of Public Health, 2010, 26(4): 464-465.
NF-κB对小鼠冠状病毒性肝炎致病作用
晁漪澜1, 林培政2, 罗炳德1, 李华峰2, 万为人1, 郭进强1    
1. 南方医科大学公共卫生与热带医学学院儿少卫生学系, 广州510515;
2. 广州中医药大学
收稿日期: 2009-07-21.
基金项目: 国家自然科学基金;广东省联合基金(U0632009)
作者简介: 晁漪澜(1988- ),女,内蒙古人,硕士在读,研究方向为发热的病理生理学.
通讯作者: 罗炳德,林培政
摘要: 目的 探讨肝脏核因子-κB(NF-κB)和血清辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)细胞因子方面对小鼠冠状病毒性肝炎的致病机制.方法 采用4周龄雄性BALB/c小鼠,以鼠肝炎冠状病毒(MHV-A59)和大肠埃希菌作为生物致病因子,建立MHV-A59鼠肝炎模型和大肠埃希菌鼠肝炎对照模型,以正常健康小鼠为空白对照,采用免疫组化法检测小鼠肝脏NF-κB表达〔吸光度(A)值〕,EL ISA法检测小鼠血清白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)水平.结果 冠状病毒模型组、大肠埃希菌对照组小鼠肝脏NF-κB表达分别为A=0.305,A=0.245;外周血Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)比值分别为(2.17±0.16),(2.09±0.06)pg/mL,均比正常组有明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),但冠状病毒模型组升高更明显.结论 肝脏NF-κB表达增强及血清Th1/Th2细胞因子失衡可能是小鼠冠状病毒性肝炎的致病机制之一.
关键词: 鼠肝炎冠状病毒     致病机制     肝脏核因子-κB     血清辅助性T淋巴细胞    
Expression of NF-κB and ThI/Th2 in mice with mouse hepatitis virus infection
CHAO Yi-lan, LIN Pei-zheng, LUO Bing-deet al    
Department of Child and Adolescent Health, School of Tropical Medicine and Public Health, Southern Medical University Guangzhou 510515, China
Abstract: Objective To study expressions of NFB and Thelper 1(Th1)/The lper-(Th2)in mice with mouse hepatitis virus(MHV)infection.Methods Four weeks old BALB/c male mice were divided into three groups randomly:control group,MHV model group,and Bacillus coli group.The expression of NFB in mouse livertissue was analyzed with mimunoh istochemistry.The level of interleuk in-4(IL-4)and interferon gamma(IFN-γ)in mouse serum were detected with ELISA.Results The expressions of NFB and Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)of MHV group and Bacillus coli group increased obviously compared to that of control group(P<0.05 or P<0.01).Conclusion The increased expression of NF-κB in mouse liver and the disequilibrium of Th1/Th2 in serumare one of pathogenic mechanisms of mouse hepatitis.
Key words: MHV-A59     pathogenic mechanism     NF-κB     Th1/T h2    

病毒性肝炎与NF-κB表达的关系十分密切。Toll样受 体(TLRs)是宿主细胞识别各种病原微生物的受体〔1〕,核因子 κB是其中炎症反应的中枢因子,在机体的炎症、免疫反应等 方面发挥重要作用;细胞因子是NF-κB所调控基因的表达产 物,介导和调节免疫应答和炎症反应〔2〕;许多疾病的发生也 与Thl/Th2类细胞失衡相关〔3〕。为探讨冠状病毒性肝炎与肝 脏核因子-κB(NF-κB)和血清辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2) 细胞因子的关系,本研究建立冠状病毒鼠肝炎模型与大肠埃 希菌鼠肝炎模型,结合MHV2A59的嗜肝性特征,从小鼠肝脏 NF-κB表达水平和血清Th1/Th2细胞因子〔血清白介素-4 (IL-4)、干扰素(IFN-γ)〕比值变化进行观察。现将结果报告 如下。

1　材料与方法 1.1 材 料

(1)动物与饲料：清洁级BALB/c雄性小鼠,4周 龄,体重(13±2)g(南方医科大学动物实验中心,动物合格证 号：NO.0030668);普通饲料(南方医科大学动物实验中心); 内生热饲料(广东省医学实验动物中心)配方：80%基础饲料 +8%蜂蜜+12%猪油。(2)试剂与仪器：NF-κB一抗(美国 Santacruze公司);NF-κB二抗,二氨基联苯胺DAB显色试剂 盒(上海西唐科技有限公司);IL24原装试剂盒、IFN2γ原装试 剂盒(上海轩昊试剂公司,IL24批号：A1010A0104U,IFN2γ批 号：A1010A0123U)。BX50型显微镜(日本OLYMPUS公司); PowerwaveHT型酶标仪(美国Bio-tek公司);JD801数码医学 显微图像分析系统(江苏省捷达科技发展有限公司)。

1.2 方 法 1.2.1 动物分组及造模

根据文献〔4〕造模。将BALB/c小 鼠18只随机分为正常组、冠状病毒模型组和大肠埃希菌对照 组,每组6只。正常组予以普通饲料,自由饮水及自然环境饲 养。模型组和肠菌组小鼠先予以内生热饲料、自由饮水和自然环境饲养;至第10d,分别予以腹腔注射MHV-A590.5mL (浓度为10-5.5)和大肠埃希菌(浓度为109/mL)0.4mL/10g灌胃感染1次,第12d上午分别重复给药1次。感染后第1,3,5d上午放入气候模拟舱内,温度(32±0.5)℃,相对湿度(60±5)%;最后1次出气候模拟舱时造模完毕。动物出现明显的倦怠嗜卧、耸毛、大便烂、进食少、体重减轻、舌质黯红 或黄腻为造模成功。

1.2.2 取材及样本预处理

取材前动物禁食不禁水12h。将小鼠肝脏右叶放入多聚甲醛中固定,放入4℃环境中保存待测;摘眼球取血,静置30min后,1500r/min离心15min,取上清液保存于4℃,待测。

1.2.3 肝脏NF-kB表达的检测

采用免疫组化法〔5〕染色,脱水,透明,封片。每张切片分别在显微镜下放大200倍,随机选取视野,对其中有代表意义的阳性结果进行拍照,并用图像分析系统,分析平均吸光度(A)值。

1.2.4 血清IFN-γ、IL-4水平检测

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法。试剂盒平衡至室温(20~25℃);严格按说明书操作。

1.3统计分析

使用SPSS11.5软件进行F分析及q检验。

2 结 果 2.1小鼠肝脏NF-kB表达(图 1)

图 1可见,2个感染组与 正常组比较,肝脏NF-kB表达均升高,差异有统计学意义(分 别P＜0.05,P＜0.01),其中冠状病毒模型组比大肠埃希菌组 升高更明显(P＜0.01)。

注: 与正常组比较,aP＜0.05,bP＜0.01;与冠状病毒模型组比较,cP＜0.01。 图 1 各组小鼠肝脏NF􀀁􀀁B表达的吸光度值
2.2小鼠肝脏NF-kB表达的光镜观察(图 2)

图 2可见,病毒和细菌感染后的小鼠肝细胞中均可见NF-kB的活化和 阳性表达,其中冠状病毒模型组比大肠埃希菌对照组的阳性 表达更为明显。阳性细胞主要为浸润于病灶中的炎性细胞,活化的NF-kB表达于细胞核中,呈棕黄色颗粒。

2.3小鼠血清Th1/Th2比值变化(表 1)

表 1可见,2个感染组与正常组比较,IL-4含量差异无统计学意义(P＞0.05),而IFN-γ含量均升高,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);与正常组比较,冠状病毒模型组、大肠埃希菌对照组IFN-γ/IL-4比值均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),但前者比后者升高更明显。

图 2 小鼠肝脏NF-kB的表达

表 1 不同组别外周血Th1 /Th2比值变化( ±s, pg/mL)
3讨论

本实验结果显示,2种病原感染组小鼠肝脏NF-κB表达均比正常组升高,而冠状病毒模型组比大肠埃希菌对照组升高更明显,提示冠状病毒性肝炎与NF-κB的过度表达有关。MHV-A59嗜肝性可能是造成2种病原感染组小鼠肝脏NF????B表达有明显差异的原因。同时,与正常组比较,冠状病毒模型组、大肠埃希菌对照组小鼠血清NF-κB/IL-4比值升高差 异有统计学意义,而前者比后者升高更明显,表明冠状病毒性肝炎与Th1/Th2失衡有关。有研究表明,小鼠被病毒感染后,TLRs表达明显升高,从而会诱导细胞中NF-κB过度活化〔6〕。结合本实验结果,推测病毒感染小鼠TLRs的表达量增加,其下游基因NF-κB过度活化,导致血清中NF-κB含量增加,IFN-γ/IL-4比值升高,Th1/Th2向Th1漂移,细胞免疫占优势,从而造成肝脏的损伤可能是小鼠冠状病毒性肝炎的致病机制之一。

参考文献
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