由于淋病双球菌对多种抗生素的耐药性逐年上升, 使临床治疗越来越棘手。为掌握其对各种抗生素的耐药性, 对深圳市2006-2007年分离到的240株淋病双球菌进行了抗生素耐药性测定, 同时进行了产β内酰胺酶淋球菌的检测, 为进-步了解深圳市淋病双球菌对多种抗生素的耐药性及淋病的防治提供科学依据。

(1)菌株:从深圳市慢性病防治中心性病门诊(2006年1月-2007年6月)急性淋病患者尿道或宫颈口脓性分泌物中分离培养所得。经革兰染色、糖发酵试验及氧化酶试验鉴定后置于-7O℃冰箱备用; 淋球菌标准菌株(全国性病控制中心)。(2)抗生素:青霉素及四环素(美国Amres-co公司); 环丙沙星(浙江新昌制药公司); 壮观霉素(美国Upjohn公司); 头孢三嗪(瑞士Roche公司)。

(1)将巧克力琼脂培养基(GC)基础粉溶于100 mL蒸馏水中(用500 mL烧瓶), 充分混匀, 边加热, 边搅匀, 直至煮沸1 min, 使完全溶解。(2)将2 g血红蛋白粉溶于100 mL水中制成2%溶液。混合时血红蛋白先加水2~3 mL, 研成糊状, 再逐步加入蒸馏水。(3)将上述二液分别高压121℃灭菌15 min、冷却到50℃左右备用。(4)每瓶增菌剂、抑菌剂以无菌手续加入蒸馏水2 mL使充分溶解。(5)以无菌操作将100 mL 2%血红蛋白溶液、2 mL增菌液、2 mL抑菌液和100 mL GC培养基混合, 分装至直径为65 mm平皿中, 每个平皿l3 mL, 封严后冷藏备用。

采用琼脂稀释法测定5种抗生素对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC), 以倍比稀释法制备含不同药物浓度的琼脂培养基。抗生素最终浓度为:青霉素0.03~8 mg/L, 四环素0.125-16 mg/L, 环丙沙星0.002 -2.0 mg/L, 壮观霉素4~128 mg/L, 头孢三嗪0.002~2.0 mg/L。并根据美国疾病控制中心(CDC)标准判断其对抗生素的敏感性。每批试验均由标准菌株质控。

以改良碘定量法测定淋球菌的B内酰胺酶。用已知的β内酰胺酶阳性和阴性菌株作对照。

表 1

表 1 24O株淋病双球菌对5种抗生素耐药结果

表 1 24O株淋病双球菌对5种抗生素耐药结果

240株淋病双球菌对青霉素、四环素、环丙沙星及头孢三嗪的耐药率分别为71.67%, 78.33%, 37.50%及6.67%, 其中30株是质粒介导高度耐四环素(MIC=16 mg/L)菌株(TRNG), 占12.5%;同时对这3种抗生索耐药的菌株有76株, 占31.67%。

壮观霉素MIC范围4-128 mg/L, 其中4株耐药菌株, MIC=128 mg/L, 耐药率为1.67%。头孢三嗪MIC为0.002~1 mg/L, 其中8株耐药菌株, MIC=1 mg/L, 耐药率为3.33%。另外, 4株对壮观霉素耐药的菌株同时对青霉素、四环素及环丙沙星耐药, 但对头孢三嗪敏感。8株对头孢三嗪耐药的菌株也同时对青霉素、四环素及环丙沙星耐药, 但对壮观霉素敏感。

(1)青霉素G: MIC为0.03 mg/L 3株; MIC为0.06 mg/L 3株; MIC为0.125 mg/L 4株; MIC为0.25 mg/L 7株; MIC为0.5 mg/L 24株; MIC为l mg/L 23株; MIC为2 mg/L 90株; MIC为4 mg/L 62株; MIC为8 mg/L 24株。(2)四环素:MIC为0.125 mg/L 2株; MIC为0.25 mg/L 10株; MIC为0.5mg/L 44株; MIC为l mg/L 56株; MIC为2 mg/L 8株; MIC为4 mg/L 90株; MIC为16 mg/L 30株。(3)环丙沙星:MIC为0.002 mg/L 4株; MIC为0.004 mg/L 2株; MIC为0.0078 mg/L 16株; MIC为0.015 mg/L 38株; MIC为0.03 m e/〔.88株; MIC为0.06 mg/L 24株; MIC为0.125 mg/L 68株。(4)壮观霉素:MIC为4mg/L 4株; MIC为8mL 28株; MIC为16 mg/L 74株; MIC为32 mg/L 70株; MIC为64 mg/L 60株; MIC为128 mg/L 4株。(5)头孢三嗪:MIC为0.002 mg/ L 6株; MIC为0.004 mg/L 24株; MIC为0.0078 mg/L 36株; MIC为0.015 mg/L 50株; MIC为0.03 mg/L 76株; MIC为0.06 mg/L l2株; MIC为0.125 mg/L 12株; MIC为0.25 mg/L 10株; MIC为0.5 mg/L 6株; MIC为1 mg/L 8株。

240株淋病双球菌中检出PPNG菌株32株, 阳性率为13.33%。

本实验结果显示, 淋球菌对青霉素的耐药率为71.67%, 其中PPNG菌株为13.33%;对四环索的耐药率为78.33%, 其中TRNG菌株为12.5%。表明深圳市淋球菌的流行菌株对这2种抗生素存在广泛的耐药性。随着青霉素在临床上的广泛应用和不正规使用, 淋球菌对青霉素的耐药率日益增高, WHO在2005年对西太平洋地区的淋球菌监测中发现, 淋球菌对青霉素的耐药率很高^〔1-2〕。

2O世纪90年代初, CDC推荐使用单剂量口服环丙沙星500 mg或氧氟沙星400 mg作为治疗无合并症淋病的2个主要药物。但是, 近年来对此2种抗生素耐药的菌株迅速增多。特别是淋球菌对环丙沙星的耐药率高达94.9%^〔3-4〕。本实验结果显示, 淋球菌对环丙沙星的耐药率为37.50%, 与国内近年的报道差距很大^〔3-6〕。根据CDC制定的淋球菌对抗生素耐药菌株超过5%则该药不能作为治疗淋病的首选用药的标准, 深圳市已不宜将环丙沙星作为治疗淋病的首选用药, 且对环丙沙星敏感性降低的菌株对其他氟喹诺酮类药物的敏感性亦下降, 应引起重视。

本研究检测的5种抗生素中, 壮观霉素及头孢三嗪均显示了较强的抗淋球菌能力, 淋球菌95.40%对壮观霉素敏感, 4.60%中度敏感; 76.25%对头孢三嗪敏感, 17.08%中度敏感; 6.67%耐药。且检出的32株PPNG菌株100%对头孢三嗪及壮观霉素敏感; 30株TRNG菌株100%对头孢三嗪敏感。因此, 头孢三嗪及壮观霉素仍可作为深圳市淋病治疗的首选用药。