, 目前, 恶性肿瘤引起的死亡率有逐年上升的趋势, 药物治疗依然是治疗恶性肿瘤的重要手段之一, 但大多数化疗药都有明显的毒副作用。研究开发具有抗肿瘤作用, 同时又能调节机体免疫力, 增强机体自身抗肿瘤功能和增加放射敏感性等具有多重功效的抗肿瘤药物, 正是当今众多科学工作者追求的目标之一。E838能显著提高受照射小鼠30d存活率和保护指数, 具有较强的辐射防护作用[1], 对肺癌、宫颈癌[2]、S 180等有明显的抑瘤作用[3], 本次研究就E838对肝癌H22的抑瘤效果及合用137Csγ射线是否具有协同作用进行探讨。
1 材料和方法 1.1 试剂用注射茶油配制E838使用液, 浓度分别为100、150、200μg/0.2ml。环磷酰胺(CTX)为上海华联制药有限公司产品, 批号040805, 用生理盐水配制, 使用剂量为25mg/kg。
1.2 动物及瘤株肝癌H22瘤株, 由天津市药品检验所提供。IRM-2小鼠是我所课题组自己培育的近交系小鼠, 雌雄各半, 体重为22~23g。饲料为清洁级全价鼠料, 由北京科奥协力饲料有限公司提供。
1.3 照射本所137Csγ源(加拿大产, CAMMA-CELL 40), 照射剂量为1Gy, 剂量率为0.84Gy/min。
1.4 荷瘤鼠模型的建立肝癌H22肿瘤组织捣碎后用生理盐水稀释约5 ×107/ml瘤细胞。取细胞悬液0.2ml/只接种于小鼠腋部皮下, 24h后将荷瘤小鼠随机分为9组, 每组10只。
1.5 实验方法实验设对照组、单放组、E838低、中、高药物治疗组、药物+照射组、阳性对照(CTX)组。药物组、药物合用放疗组ip给药, 每天1次, 0.2ml/只, 连续给药7d, CTX隔日1次, 共4次, 药物合用放疗组于给药的第4d进行全身1Gy照射, 连续5次。隔日观察各组动物的肿瘤体积, 用游标卡尺测量肿瘤长径a和短径b, 根据公式V=ab2/2(a-长径, b-短径)计算体积[4]。并绘制肿瘤生长变化曲线。
1.6 肿瘤生长延迟曲线分别求出每次测量所得到的肿瘤直径相对比(第n天肿瘤直径/第0天直径)的平均值, 做出肿瘤生长延迟曲线[5]。
1.7 指标检测末次给药后第三天处死动物, 计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数、股骨有核细胞数及脾结节数。抑瘤率=(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100%。
1.8 统计学处理实验数据以x±SD表示, 组间比较采用t检验。
2 结果 2.1 E838对荷瘤小鼠的抑瘤作用(表 1)
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表 1 E838对小鼠移植性肿瘤H22的治疗结果 |
不同剂量的E838对肝癌H22显示不同程度的抑制作用, 低剂量到高剂量的抑瘤率分别为50.60%、62.73%和54.82%, 与对照组比较经统计学处理差异有显著性(P < 0.01)。
2.2 E838合用γ射线对荷瘤小鼠的抑瘤作用(表 2)|
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表 2 E838合用射线对小鼠移植性肿瘤H22的治疗结果 |
E838合用γ射线治疗小鼠肝癌比单放组和单纯给药组的抑瘤效果更好, 低、中、高剂量组对肿瘤的抑瘤率分别为52.98%、67.61%和59.15%, 与对照组相比差异有显著性(P < 0.01), 7.5mg/kg和10mg/kg剂量组与对照组差异非常显著(P< 0.001)。E838 +γ射线与单放组比较经统计学处理差异有显著性(P < 0.05), 其疗效明显高于单放组和单纯给药组。
2.3 E838治疗后荷瘤鼠免疫系统指标变化E838治疗后H22荷瘤鼠胸腺指数、脾重指数、脾结节及骨髓有核细胞数变化结果见表 3, 三个不同浓度组小鼠的胸腺指数、脾重指数及BMNC骨髓有核细胞的数量均高于对照组, E838高剂量、中剂量BMNC与对照组相比差异有显著性, 与CTX组比较三个剂量差异均有显著性。
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表 3 E838治疗后H22荷瘤鼠免疫功能的变化 |
E838三个剂量组肿瘤生长速度均慢于对照组, 小鼠的肿瘤体积明显低于对照组。
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图 1 E838各组肿瘤生长曲线 |
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图 2 E838合并照射各组肿瘤生长曲线 |
从图中可以看出经过E838合用放疗后, 各组肿瘤生长均慢于对照组和单放组, 相对生长速率也减慢。
2.6 肿瘤生长延迟曲线(图 3)
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图 3 肿瘤生长延迟曲线 |
免疫系统作为机体抗肿瘤的第一道防线, 在恶性转化细胞的识别和清除过程中发挥着重要作用, 荷瘤宿主自身免役状态的好坏与肿瘤的发生、发展及预后密切相关[6]。当肿瘤细胞侵入机体时, 机体的免疫系统对外来抗原物质出现应答。而调节机体的免疫功能是抗肿瘤作用的机制之一。我们以往进行的药效学实验已证实:E838具有疗效高、毒副作用小的特点[1], 对小鼠宫颈癌(U14)[2]、S 180肉瘤[3]均有明显抑制作用。为进一步扩大瘤谱, 应用IRM-2小鼠作肿瘤模型, 我们对H22肿瘤细胞的抑瘤及免疫功能的作用, 以及合用放疗进行了实验研究。从实验结果可以看出, 经E838治疗后, 三个药物剂量组小鼠的肿瘤生长速度均慢于对照组(依据瘤体截面积大小), 每组个体间差异较小, 瘤重明显小于对照组, 三个药物剂量组的抑瘤率经统计学处理与对照组比较差异有显著性(P < 0.01), 最高抑瘤率可达到62.73%(P < 0.001)。各剂量组的胸腺指数、脾重指数、CFU-S及骨髓有核细胞的数量与对照组比较有所提高, 但差异无显著性。在本次实验中, 给予E838小鼠的生存质量有明显的好转, 其摄食、饮水量增加, 活动正常, 体重扣除瘤重后有所增加, 说明药物本身毒性低, 对机体恢复有一定益处。
E838合用放疗各组肿瘤的生长均慢于对照组、单放疗组和E838单药组。抑瘤率最高可达到67.61%, 与对照组比较差异有显著性(P < 0.01), 与单放组比较差异有显著性(P < 0.05)。说明E838合并适当剂量的射线可增强其对肿瘤的杀伤, 减少肿瘤细胞的加速再增殖, 并且导致肿瘤坏死使肿瘤体积缩小, 由于照射条件所限, 无法采用局部照射, 为减轻对机体的辐射损伤, 采用了1Gy全身照射, 如能用较大剂量的局部照射, 效果可能会更好。通过对E838药效的进一步研究, 有望获得疗效更好的抗肿瘤新药。
| [1] |
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| [2] |
王月英, 周则卫, 王汝勤, 等. E 838对小鼠移植性肿瘤的治疗研究[J]. 中国辐射卫生, 2006, 15(1): 6-8. DOI:10.3969/j.issn.1004-714X.2006.01.003 |
| [3] |
王月英, 张良安, 王汝勤, 等. E 838对小鼠移植瘤S 180放疗增敏的实验研究[J]. 中国辐射卫生, 2006, 15(4): 388-389. DOI:10.3969/j.issn.1004-714X.2006.04.002 |
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| [5] |
管宏, 赵慧云, 沈磊, 等. 血管生长抑制剂TNP-470合并放射增敏治疗肿瘤的研究[J]. 中华放射医学与防护杂志, 2003, 23(2): 96-97. DOI:10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2003.02.007 |
| [6] |
马凌娣, 张彦, 文世宏, 等. 苦参碱对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究[J]. 中华肿瘤杂志, 2005, 27(6): 339-341. DOI:10.3760/j.issn:0253-3766.2005.06.006 |