环磷酰胺是临床上常用的肿瘤化疗药物, 但作为一种免疫抑制剂, 临床应用时其毒副作用明显, 尤其是在肿瘤化疗中白细胞降低是临床常见的症状, 大多数患者在常规应用化疗药物治疗中, 出现白细胞总数下降及骨髓受到抑制等临床症状。E838是一种新型辐射防护剂, 在以往我们进行的药效学实验已证实: E838具有放射防护效价高^[1]、毒副作用小的特点, 能显著提高受照射小鼠30d存活率和保护指数, 为探讨E838对动物的骨髓保护、造血机能及升白作用, 我们利用IRM-2小鼠作为模型, 观察了E838对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的影响。

1 材料与方法 1.1 材料

动物与药品   IRM-2近交系小鼠由我所自己培育, 雌雄兼用, 体重为22 ~ 24g。饲料为清洁级全价鼠料, 由北京科奥协力饲料有限公司提供。环磷酰胺(CY)由为上海华联制药有限公司产品, 批号为050110。茜草双酯由山东方明制药有限公司生产, 批号为040421。

1.2 方法

将动物随机分5组, 每组10只, 雌雄各半。实验设模型组、E838低、中、高(100、150、200μg /0.2ml)浓度组, 阳性对照茜草双酯(2.5mg/0.2ml)组, 连续5d腹腔注射E838和茜草双酯, 每次0.2ml /只, 于第3天开始给药的同时腹腔注射Cy (100mg/kg), 连续3d ^[2], 模型组腹腔注射等容量体积茶油。

1.3 观察指标 1.3.1 白细胞计数

花板于末次给药后第3天眼眶取20μl血加入0.38ml白细胞稀释液, 破坏红细胞后, 滴入计数盘中, 在显微镜下计数一定范围内的白细胞数。

1.3.2 骨髓有核细胞计数

将小鼠颈部脱椎处死, 取小鼠1侧股骨, 用白细胞稀释液冲洗骨髓腔, 收集骨髓细胞制成悬液, 用台盼蓝鉴定细胞活性在95%以上, 电子显微镜下计数骨髓有核细胞数。

1.3.3 脾结节(colong forming unit of spleen, CFU-S)、脾指数、胸腺指数

无菌条件下取各小鼠脾脏、胸腺称重, 按公式计算脾指数、胸腺指数。脾指数=脾重(mg)/鼠重(g), 胸腺指数=胸腺重(mg)/鼠重(g)。将脾脏放人Bouin液内24h后, 肉眼计数脾脏表面的结节数(CFU-S)。

1.4 统计方法

数据统计结果用x±s表示, 两组比较用t检验。

2 结果 2.1 E838对IRM-2小鼠造血功能的影响结果(表 1)

E838三个剂量组的白细胞数、骨髓有核细胞数和CFU-S与对照组比较均有所增加, 中、高剂量组的骨髓有核细胞数量和白细胞数与对照组比较, 差异有显著性(P < 0.05), 同时中、高剂量组的白细胞数和高剂量组的CFU-S数均高于茜草双酯组, 高剂量组的CFU-S和白细胞数增加明显。

2.2 E838对IRM-2小鼠免疫功能的影响结果(表 2)

E838三个剂量组的胸腺指数和脾重指数虽有一定的增加, 但只有高剂量组的脾重指数与对照组和茜草双酯组比较, 经统计学处理, 差异有显著性(P < 0.05)。

3 讨论

近年由于细胞动力学、药效学、生物治疗学的长足进步, 肿瘤化疗也取得了重要进展, 但几乎所有的抗癌药物均可导致不同程度的WBC下降, 其毒副反应大大限制它的效应。骨髓抑制是化疗药物最常见的限制性毒副反应, 抗肿瘤药物作用于癌细胞增殖周期的不同环节, 抑制DNA分型增殖能力, 从而起到对肿瘤的治疗作用, 但在杀死大量肿瘤细胞的同时, 亦也杀死不少正常骨髓细胞^[3], 环磷酰胺属于细胞周期非特异性化疗药物, 对增殖周期中各期细胞均有杀灭作用^{[4, 5]}, 由于机体大部分白细胞寿命较短, CY的杀灭作用首先通过外周血白细胞反映出来^[6]。因此WBC减少故常造成延迟化疗, 药物减量或终止化疗, 影响化疗的正常进行。从本实验结果可以看出E838三个剂量组均能促进小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞数的恢复, 外周血白细胞和CFU-S的水平与E838剂量呈相关关系, 其中高剂量组效果更为显著, 明显表现出其调节造血系统、升高白细胞、刺激机体的造血能力, 并通过胸腺促进骨髓造血细胞增殖。提示E838具有全面调节机体的免疫力作用。综上表明, E838对化疗所致免疫力低下及造血系统损伤有较好的治疗效果, 其机制可能与提高免疫力有关。