昆明—无毛(Kun Ming Hairless简称KM-HL)鼠是近交系小鼠, 它不同于裸鼠的一种皮肤和毛发结构发生遗传变异的新品系^[1]。该鼠有胸腺且可在普通环境中生长, 其各项生理指标比KM(昆明)鼠和ICR鼠等封闭群系稳定^[2]。

1 材料与方法: 1.1 材料

KM-HL小鼠是本所动物室自己繁殖培育; KM (昆明)鼠购于北京动物所; 动物许可证号:SCXK-京-2004- 0001, ICR鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司, 动物许可证号:京动许字2002-0603;肉瘤S₁₈₀、宫颈癌U₁₄和肝癌H₂₂均由天津医药研究所提供; ¹³⁷Cs源为本所提供, T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司), OLYMPUS电子显微镜和1/1000电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司), 冰醋酸, 高氯酸等试剂。

1.2 方法 1.2.1 直接接种S₁₈₀、U₁₄、H₂₂腹水癌

取KM-HL小鼠15只, 体重20 ~ 24g, 雌雄各半, 随机分为3组, 5只/组, 用腹水型肿瘤移植法^[3], 分别取生长较好S₁₈₀、U₁₄、H₂₂腹水癌传种鼠, 消毒后用1ml灭菌针管取出肿瘤细胞溶液, 分别直接注射KMHL鼠腹腔内, 每只小鼠注射0.2 ~ 0.4ml, 6 ~ 8d后腹腔有明显的积液, 可抽出癌液直接传种。

1.2.2 稀释后接种S₁₈₀、U₁₄、H₂₂实体瘤

KM-HL鼠, KM鼠, ICR鼠各取30只, 雌雄各半, 体重20 ~ 25g, 按鼠种分为3组, 10只/组, 用悬液的方法接种^[4], 将生长较好的S₁₈₀、U₁₄、H₂₂腹水癌分别取出腹水癌液, 按1:3的比例用生理盐水稀释后, 肿瘤细胞计数为:S₁₈₀:3 ×10⁷ /ml; U₁₄:3 ×10⁷ /ml; H₂₂:2.7 ×10⁷/ ml, 分别接种于KM-HL、KM、ICR小鼠右上肢腋窝皮下, 每只鼠接种0.2ml, 接种后饲养9 d, 第10天将小鼠脱臼处死, 取出实体肿瘤称重。

1.2.3 辐照致免疫功能下降

取KM-HL小鼠12只, 体重22 ~ 24g, 雌雄各半, 随机分为2组, 6只/组, 分对照组和照射组, 对照组不照射, 照射组将小鼠放在周围有孔的照射盒里, 用¹³⁷Cs-γ射线一次全身性照射6.5Gy, 剂量率为:0.80645 Gy/ min, 照射后饲养4d, 第5天脱臼处死后, 测定免疫指标及其他生理指标。

1.2.3.1 白细胞(white blood cell, WBC)

小鼠辐照后第5天眼眶取血, 20μl/鼠, 用白细胞稀释液稀释后, 电子显微镜计数WBC数。

1.2.3.2 生理指标

小鼠辐照后第5天称体重, 然后将小鼠脱臼处死取肝脏、脾脏、胸腺称重, 取一侧股骨计数股骨有核细胞, 用Bouin氏液固定脾并计数脾结节数, 脾和胸腺可按下式计算脾系数和胸腺系数。

1.2.3.3 骨髓DNA含量

小鼠辐照后第5天处死取一侧股骨, 用0.005mol/LCaCl₂将骨髓全部冲入离心管中, 离心沉淀蛋白, 加0.2mol/LHClO₄溶解, 过滤后在紫外可见分光光度计268nm处测定吸光度(OD值), 骨髓DNA含量用吸光度(A)/只(股骨)表示。

2 结果 2.1 接种肿瘤的比较

对于宿主KM-HL鼠接种S₁₈₀、U₁₄和H₂₂肿瘤后, 无论取腹腔液直接接种还是按1:3比例稀释后再接种肿瘤都能生长较好, 宿主肿瘤成活性很高, 无排斥性, 结果见表 1。

2.2 辐照后各项指标的比较

KM-HL鼠采用¹³⁷Cs-γ射线一次性全身性照射6.5Gy后, 其白细胞(WBC)、骨髓DNA含量、脾脏、胸腺和体重都受损较重差异有显著性(P < 0.01), 脾脏、胸腺用脾系数(mg/g)和胸腺系数(mg/g)来表示见表 2、3、4。

2.3 统计学方法

数据用SPSS10.0统计分析, 组间比较采用t检验, 结果用“x±s”表示。

3 讨论

实验动物在生命科学领域内, 在药效学研究和抗肿瘤药物的筛选中都具有广泛的意义, 对于实验动物的鉴定需要积累大量的实验数据, 本课题研究了KM-HL鼠对肿瘤细胞、对射线的敏感性, 用以说明使用KM-HL鼠的广泛意义所在。直接取原癌液接种于KM-HL鼠的腹腔内形成腹腔癌液或是将原液稀释后接种于KM-HL鼠右上肢腋下的皮下肿瘤都能生长得很好, 说明宿主KM-HL鼠对肿瘤细胞很敏感, 无排斥性; 当KM-HL鼠受到辐照后, 免疫系统、血液、造血系统等几项生理指标都有所下降, 并显示差异有显著性(P < 0.01), 表明¹³⁷Cs- γ射线对KM-HL鼠可造成免疫功能低下, 因此该鼠可作为抗肿瘤药物的筛选和提高免疫功能药效学研究的实验用鼠。