生白饮采用中药和当地民族药物为主选药组方而成, 功能主治:益气固本, 养血生津, 用于白细胞减少症, 免疫功能低下等出现的眩晕、神疲乏力、纳差者。经过多年来的临床治疗观察, 对多种因素所致白细胞减少症有较好疗效^[1]。为探讨该制剂对动物的骨髓保护、修复受损造血机能的作用, 我们观察了生白饮口服液对⁶⁰Coγ照射和环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的影响, 现报到如下。

1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 药品

生白饮(shengbaiyin)口服液由湖北民族学院医学院中药研究所、附属医院中医药教研室提供, 批准文号鄂药制字(2001)第MZ020-024号, 产品批号050601, 每毫升含生药2g(2.0g/ml); 环磷酰胺(Cyclophosphamide)由上海华联制药有限公司提供, 国药准字H31021703, 产品批号030910;鲨肝醇(BatilolTablets)由中外合资江苏鹏鹞药业有限公司提供, 国药准字H20023248, 产品批号0310201。

1.1.2 试剂与仪器

TNF、IL-6试剂盒(解放军总医院科技开发中心放免所); RPMI1640培养液(U.S.A.14072);MTT(四甲基偶氮唑盐, Sigam公司提供); PBS液(武汉亚法生物技术有限公司); 淋巴细胞分离液(比重1.077±0.001, 上海试剂三厂); 植物血凝素(PHA950117, 广州医药工业研究所); Elx800型酶标仪(美国); GC-1200γ放射免疫计数器(中国安徽科大创新股份有限公司)。

1.1.3 动物

昆明小鼠, 体重(20±2)g, ♀♂兼用, 由湖北省实验动物中心提供。

1.2 方法 1.2.1 实验方法

将小鼠随机分成6组, 每组15只, 即正常组、病理模型组、生白饮口服液小、中、大剂量组(给药剂量按临床成人每日量的3~7倍折算约为40.00、60.00、80.00g/kg.bw/d)、阳性对照药鲨肝醇组(0.14g/kg.bw/d)。将各组动物(除正常对照组外)进行腹腔注射环磷酰胺50g/kg, 1次/d, 共7d, 制成化疗白细胞减少症模型(白细胞下降至(2.00~3.00_×10⁹/L), 次日起持续ig给药, 每日1次, 共10d。参照^[2]将各组动物(除正常对照组外)进行⁶⁰Coγ射线一次性全身均匀照射, 照射剂量率为3.89×10^-2Gy·kg^-1, 距离0.80m, 受照剂量为6Gy。从照射后24h起持续ig给药, 每日1次, 共10d。正常组、病理模型组ig给等容量体积生理盐水。

1.2.2 指标检测及方法

造血功能指标测定:白细胞计数、骨髓有核细胞数, 按常规测定计数; 血淋巴细胞转化实验:心室取血抗凝用RPMI1640对倍稀释, 加等量淋巴细胞分离液, 经2000r/min离心20min, 分离淋巴细胞并洗涤3次, 加入适量RPMI1640培养液进行细胞计数, 稀释细胞至8×10⁶个/L。取细胞悬液加入经灭菌处理的96孔微量细胞培养板内, 每个样本6孔, 每孔180μl, 其中3孔加20μl植物血凝素, 另3孔加20μl培养液作对照组, 每孔总量为200μl; 另设3孔作空白对照组。将培养板置37℃体积分数5%的CO₂培养箱里培养72h。采用MTT比色法测定小鼠淋转指数^[3]; 细胞因子检测:TNF、Il-6分别于造摸后5d、10d取外周血按试剂盒操作说明作放免方法检查。

1.2.3 数据分析

实验数据采用SPSSFORWINDOWS10.0软件进行t检验统计处。

2 结果 2.1 生白饮对⁶⁰Coγ射线和环磷酰胺致病理小鼠外周血白细胞计数的影响

与正常组比较, 小鼠造摸后5d白细胞数仍然下降明显(P < 0.01), 随后逐渐回升; 生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组均能促进病理小鼠白细胞的恢复, 于造摸后5d、10d与病理模型组比较差异显著(P < 0.05或0.01)(见表 1)。

2.2 生白饮对⁶⁰Coγ射线和环磷酰胺致病理小鼠骨髓有核细胞数的影响

与正常组比较, 小鼠造摸后5d骨髓有核细胞数降低明显(P < 0.01), 随后逐渐升高; 生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组小鼠骨髓有核细胞数, 于灌胃治疗后5d、10d均高于病理模型组(P < 0.05或0.01), 结果提示生白饮能促进病理小鼠骨髓造血机能的恢复(见表 2)。

2.3 生白饮对⁶⁰Coγ射线和环磷酰胺致病理小鼠外周血淋巴细胞转化的影响

与正常组比较, 小鼠造摸后淋转指数明显下降(P < 0.01);生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较, 于治疗后5d、10d淋转指数均升高(P < 0.05或0.01), 且表现出剂量依赖关系, 结果提示生白饮具有刺激淋巴细胞转化、增强免疫力的作用(见表 3)。

2.4 生白饮对⁶⁰Coγ射线和环磷酰胺致病理小鼠IL-6的影响

与正常组比较, 小鼠造摸后血中IL-6活性降低(P < 0.01);生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较, 于治疗后5d、10dIL-6活性明显增高(P < 0.05或0.01), 结果提示生白饮具有激活细胞因子和调节免疫功能的作用(见表 4)。

2.5 生白饮对⁶⁰Coγ射线和环磷酰胺致病理小鼠TNF的影响

与正常组比较, 小鼠造摸后TNF活性降低(P < 0.01), 后逐渐回升; 生白饮3个剂量组及鲨肝醇治疗组与病理模型组比较, 于治疗后5d、10dTNF活性增高(P < 0.05或0.01), 且表现出剂量依赖关系(见表 5)。

3 讨论

白细胞减少症按中医辨证属"虚劳、血虚症"范围, 临床对于肿瘤患者治疗, 无论化疗还是放疗, 均存在不同程度的免疫系统及造血系统的双重抑制副作用。因此, 研究对放化疗有减毒作用的中药复方是提高恶性肿瘤治疗效果的重要途径之一。复方中药生白饮合剂采用中药和当地民族药物为主选药组方而成, 主要由黄芪、苡仁、鸡血藤、炮山甲、号桐杆、荞麦七、北三七、女贞子、山芋、黄精等多味中药组成的验方。本研究表明中药复方生白饮合剂能拮抗⁶⁰Coγ射线照射和环磷酰胺对骨髓的抑制作用, 明显改善外周血象, 刺激机体的造血能力, 其作用不逊于鲨肝醇。同时, 研究还表明生白饮不仅能单独刺激小鼠淋巴细胞的转化, 而且还诱导小鼠细胞因子的释放, 实验中病理小鼠血液中IL-6、TNF活性表现出明显降低, 在用生白饮治疗后第5天、10天具有显著升高IL-6、TNF水平。白细胞介素-6是一种主要由免疫活性细胞分泌的多功能因子, 不仅具有免疫调节及抗肿瘤作用, 且能促进细胞的增殖分化、加速血小板的再生, 具有显著的造血调控作用^[4~6]; 并有研究报道TNF对白细胞计数和血小板计数的减少有促进恢复的作用^[7]。此结果提示复方中药生白饮合剂对化疗、放疗的免疫及造血系统的双重抑制副作用均存在良好效果, 有较好的直接的应用前景和开发价值。关于该复方中药制剂改善造血功能的机制, 中医理论认为放化疗作为一种热毒之邪, 伤阴耗气, 使患者在得到治疗的的同时, 也现出了气阴两虚之证, 因此益气养血、温补肾阴、肾阳是减轻放化疗毒副反应的基本治则^[8]。黄芪重补脾肺之气, 气生则血生; 鸡血藤、号桐杆活血补血以生血; 荞麦七不仅助苡仁健脾消食以生血, 同时清热解毒, 有助肿瘤消散; 炮山甲渗透力强, 以利诸药达病所; 北三七益气补血; 黄精、女贞子、山芋温补脾肾、养阴生津, 以强其本。全方共奏温肾健脾、益气养血生精之功效。