电离辐射能损害人类免疫和造血功能,如何防止或治疗辐射损害一直引起人们的关注,进行了大量研究[1, 2]。某些传统中药或其提取活性成分已经证实具较好的抗辐射作用。本研究在淫羊藿活性成分淫羊藿甙(ICA)对小鼠辐射损伤的防护作用的实验基础上,进一步开展了其免疫学促进功能的探讨,以期为临床应用打下良好的基础。现报道如下。
1 材料与方法 1.1 实验动物BALB/C小鼠,18~20 g,雌雄各半,山东医科大学动物中心提供。
1.2 ICA沈阳药科大学徐缓清教授提供,配制成1mg/ml。
1.3 辐射方法60Co照射,剂量率10cGy/min,剂量共8Gy,山东省农科院辐照中心。
1.4 实验方法辐射小鼠15只,照射6 h后灌喂,每次ICA 0.2ml,连续9d。对照组灌以N.S0.2ml/次。
1.5 小鼠吞噬功能以腹腔吞噬百分率和吞噬指数表示。
1.6 脾脏淋巴细胞转化功能无菌条件下取出小鼠脾脏,以RPMI 1640制成细胞浓度为1×106/ml。每孔加样本100 μl,6复孔。前3孔加入刀豆素A 50 μl,后3孔加入RPMI 1640 50 μl做对照。加盖后于37℃培养。56h后加入3H-TdR,每孔3.7 ×104Bq (1 μCi)继续培养至72h。以常规方法进行β-液体闪烁仪测定。转化能力以平均值(cpm)表示。
1.7 NK细胞活性测定效应细胞制备:上述方法制备小鼠脾脏单个细胞悬液,低渗法消除红细胞,含10%小牛血清RPMI1640液洗涤两次后,调细胞数为1~107/ml。靶细胞制备:生长旺盛的YAC-1细胞以10%小牛血清的RPMI 1640液洗涤后,调浓度为2×105/ml。取40孔板,在实验孔中加入效应细胞和靶细胞各10μl,效靶比例为50:1。设效应细胞对照孔。样品均为3复孔。混匀后于37℃,5%CO2条件下培养24 h,然后加入MTT20μl/孔,继续培养4 h,然后离心,2 000 rpm 10 min弃部分上清,每孔加入100μl 100%DMSO, 振荡,溶解,10 min后以酶标仪测定570 nm的0D值。
结果列于表 1,结果表明用药后第6天后,各实验组NK细胞活性均明显高于用药前活性(P < 0.05)。
表 2提示,ICA灌胃6d后,可以明显促进实验小鼠腹腔吞噬功能。
3 讨论ICA是从淫羊藿甙中提取的活性成分,已经证实其对肿瘤细胞有明显的诱导分化或诱导凋亡作用[3, 4]。但关于它的造血及免疫调节作用的研究报告较少。本文则进行了ICA对辐射小鼠免疫促进作用的动物实难研究。主要目的是为寻找新的抗辐射活性成分。ICA的抗辐射实验结果表明,BALB/C小鼠以致死剂量60Co照射后,连续灌喂ICA药物,与生理盐水对照组相比,第6天后可以明显促进或提高小鼠腹腔吞噬百分率和吞噬指数,用药后第6天后,各实验组NK细胞活性均明显高于用药前活性(P < 0.05)。而脾脏淋巴细胞转化功能亦均明显高于用药前对应值(P < 0.05)。提示ICA可发生免疫调节作用,并可成为发挥抗肿瘤作用的机制之一。至于其具体的机制,尚需进一步研究。
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