中国辐射卫生  2002, Vol. 11 Issue (1): 5-6  DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2002.01.004

引用本文 

孙元明, 李进, 王芹, 唐卫生, 王知权. G显带法验证FISH分析X射线工作者染色体易位畸变[J]. 中国辐射卫生, 2002, 11(1): 5-6. DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2002.01.004.
SUN Yuan-ming, LI Jin, WANG Qin, et al. Experimental Observation of G Banding Verifying X-ray Workers' Chromosome Translocation Detected by FISH[J]. Chinese Journal of Radiological Health, 2002, 11(1): 5-6. DOI: 10.13491/j.cnki.issn.1004-714x.2002.01.004.

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收稿日期：2001-05-14
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G显带法验证FISH分析X射线工作者染色体易位畸变
孙元明 , 李进 , 王芹 , 唐卫生 , 王知权     
中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所, 天津 300192
收稿日期：2001-05-14
作者简介：孙元明(1962~), 男, 辽宁人, 副研究员, 主要从事辐射生物剂量学研究.
摘要：目的 FISH是分析染色体畸变的有效方法, 该方法的准确性受多种因素影响, 用G显带方法验证FISH对早先X射线工作者染色体易位分析。方法 对X射线工作者同时采用两种方法分析染色体易位, 进行统计学分析比较。结果 两种方法分析染色体易位率有很好相关性。结论 FISH方法是分析X射线工作者染色体易位率进行剂量重建的可行方法。
关键词：荧光原位杂交    G显带    X射线工作者    染色体畸变    
Experimental Observation of G Banding Verifying X-ray Workers' Chromosome Translocation Detected by FISH
SUN Yuan-ming , LI Jin , WANG Qin , et al     
Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Tianjin 300192, China
Abstract: Objective FISH is the most effective way of detecting chromosome aberration and many factors affect its accuracy.G-banding is used to verify the results of early X-ray workers' chromosome translocation examined by FISH. Methods The chromosome translocations of early X-ray workers have been analysed by FISH (fluorescence in situ hybridization) and G-banding, yields of translocation treated with statistics. Results The chromosome aberrations frequencies by tow methods are closely related. Conclusion FISH is a feasible way to analyse chromosome aberrations of X-ray workers and reconstruct dose.
Key words: FISH    G-banding    X-ray Worker    Chromosome Aberration    

中国医用X射线工作者是长期从事X射线临床诊断的职业受照群体。早期X射线工作人员每天都有繁重临床工作, 当时辐射防护条件简陋, 他们因受到稳定和长期的小剂量低剂量率的X射线照射而有辐射损伤累积。电离辐射对人体远后效应主要表现致突、致畸、致癌为代表的躯体损伤及遗传变异, 在分子生物学上主要表现在基因突变(碱基置换、移码、大小片段丢失)和染色体畸变(染色体型畸变、单体型畸变、染色体分离异常)。荧光原位杂交(Fluorescent in situ hybridization, FISH)是近年来发展起来新技术, 是分析染色体畸变和基因突变的最有效方法, 但是在使用中有多种因素(如标本是否新鲜、染色体周围胞浆、变性液的pH值和变性时间等)影响它的精确性。用FISH(Fluorescent in situ hybridization)和G显带法同时分析早期X射线工作者染色体易位畸变, 观察FISH的准确性。

1 材料和方法 1.1 实验对象

医院中早期从事医用X射线工作人员, 男性, 平均放射工龄为32.7 a(22~44 a)。

1.2 细胞培养、制片和G显带

按本实验室的常规方法[1]。

1.3 荧光原位杂交程序

用4号和7号全染色体探针(美国Oncor公司产品), 根据该公司操作程序略加改进。

1.4 染色体略变的识别标准和记录

用Nikon荧光显微镜在100 ×视野中检查中期细胞, 用组滤片可同时观察FITC和PI荧光, 然后用PI来复核。正常中期中有两对绿色荧光染色体, 根据其大小和着丝粒的位置可区别为4 #和7 #染色体。双色(绿色/红色)染色体上有一个着丝粒(用Giemsa校正)为完全易位, 不完全易位或插入, 均计为一次畸变; 双色染色体有两个着丝粒者, 记为双着丝粒; 双色或只带绿色荧光无着丝粒, 是无着丝粒断片; 如伴有易位或双着丝粒提体有无着丝粒断片者, 只记易位或双着丝粒, 无着丝粒断片不单独计数。

2 结果和讨论

用FISH和G显带方法分析X射线工作者染色体易位畸变结果见表 1。

表 1 用FISH和G显带法分析X射线工作者染色体易位畸变结果

用全染色体探针4#和7 #经FISH分析X射线工作者外周血淋巴细胞染色体易位以Fp/cell表示, 根据Lucas[2]推荐的公式将Fp换算为全基因组易位率FG, 两者的关系是FG=Fp/2.05fp(1 -fp), fp代表靶染色体在基因组中的份额。4 #和7 #全染色体的相对长度分别为6.49和5.43, 所有染色体的相对长度为100.14[3], 4 #和7#占全染色体的fp值为0.12。

以FISH检出的易位率作为函数关系式因变量Y, G显带检出的易位率为自变量X, 进行直线回归方程处理[4]。得出直线回归方程是:

回归直线斜率为0.56, 相关系数为0.75, 相关系数经t检验0.002 < P < 0.005。表明FISH和G显带两种方法检出染色体易位率有很好相关性。但表中FISH检出易位率比显带法分析结果略高。

X射线工作者是长期受到小剂量X射线照射的职业受照者, 对他们染色体畸变观察以稳定性易位为主。我们曾用FISH方法对X射线工作者染色体畸变进行了分析[5], 并据此估算了他们受照剂量[6]。为充分证实FISH分析染色体畸变的准确性, 对同一X射线工作者又用G显带方法进行了分析。结果表明两种方法分析的染色体易位率具有很好相关性, 进一步证实用FISH方法分析X射线工作者染色体易位率进行剂量重建是可行的。

参考文献
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Lucas J.N, Awa A, Straume T, et al. Rapid translocation frequency analysis in human decades after exposure to ionizing radiation[J]. Int J Radiat Biol, 1992, 62(1): 53. DOI:10.1080/09553009214551821
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杨树勤. 卫生统计学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1997: 98.
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王知权, 孙元明, 李进, 等. 用荧光原位杂交快速检测医用诊断X线工作者染色体结构重排及其剂量估算的探讨[J]. 中华放射医学与防护杂志, 1998, 18(4): 168.
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孙元明, 李进, 王晓琳, 等. FISH方法对X射线工作者受照剂量重建的研究[J]. 中华放射医学与防护杂志, 2000, 20(3): 179. DOI:10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2000.03.010