尼尔雌醇是一种新型的甾体雌激素类药物, 临床上主要用于缓解更年期综合症, 预防绝经后的骨质疏松症, 具有长效、强效、副作用低等优点。辐射防护剂一般可分为氨巯基类化合物、色胺类化合物、多糖类、雌激素类等几种。本实验拟用尼尔雌醇对小鼠的辐射防护作用进行研究。

1 材料与方法 1.1 动物选择

LACA小鼠, 日龄30天左右, 体重16~20g, 雌雄各半, 购自军事医学科学院实验动物中心。

1.2 药物配制

尼尔雌醇购自北京四环制药二厂。实验前, 将尼尔雌醇配成0.5mg/ml的混悬液, 再用双蒸水梯度稀释成所需浓度, 现用现配。

1.3 照射条件

小鼠照射在北京市辐照中心进行, 钴源。吸收剂量为6.0~8.2Gy, 剂量率为1.0Gy/min。

1.4 量效及时效试验

分别于照前24小时、6小时、1小时给予动物不同剂量的尼尔雌醇, 观察动物体重变化情况(用体重变化百分数表示, 即(几天体重-0天体重/0天体重× 100 %), 30天存活率及平均活存时间。同时设立单纯照射组及正常对照组, 照射吸收剂量为8.2Gy。

1.5 指标观察试验

选择照前6小时给予小鼠2mg/kg的尼尔雌醇作为实验组, 设立单纯照射组及正常对照组。半数动物吸收剂量为6.0Gy, 半数动物吸收剂量为8.2Gy。

1.5.1 脾脏系数

即脾重/动物体重。

1.5.2 胸腺系数

即胸腺重/动物体重。

1.5.3 白细胞总数

眼眶取血, 常规计数。

1.5.4

骨髓DNA含量测定:取小鼠双侧股骨, 计数骨髓有核细胞数。骨髓细胞用PBS洗2次, 加入细胞裂解液(Lysie液, 用前加0.3mg/ml Proteinase K, 0.7 % SDS及100μgRNlseA), 65 ℃, 30分钟, 加入少量5MNaCl, 混匀, 离心, 3000rpm, 15分钟, 上清中加入2V无水乙醇, 倒转几次, 吸出DNA, 离心, 干燥, TE溶解, 于260nm及280nm处测量OD值, 计数DNA含量, 用10⁷骨髓有核细胞数所含的DNAμg数表示骨髓DNA含量。

1.5.5 脾结节形成试验(CFU-S)

LACA小鼠给予8.0Gy全身照射后, 于尾静脉输入0.2ml含有1 ×10⁵个骨髓有核细胞的细胞悬液, 9天后杀死受体小鼠, 取出脾, Bouin氏液固定后, 计数脾结节数, 以脾结节数/脾表示小鼠脾结节形成能力。

2 结果 2.1 量效及时效试验

动物单纯照射后, 最初几日体重明显下降, 精神状态较差, 于11日内动物基本死亡, 平均存活时间为8.75 ±2.53天。未照射组小鼠, 体重持续上升, 观察期(30天)内无动物死亡。照前给予尼尔雌醇, 最初几日受照小鼠体重下降缓慢, 和单纯照射组相比差别显著(P < 0.05), 随着时间延长, 差别逐渐减少, 但给药各组均未能显著提高小鼠平均活存时间。

2.2 指标观察试验

结果见附表。照前给予尼尔雌醇, 未能明显提高小鼠的脾脏、胸腺系数, 白细胞总数、骨髓DNA含量和脾结节形成能力和单纯照射组相比无明显差别(P > 0.05)。

3 讨论

早在1943年, Treadwell等曾报道:雌二醇苯甲酸酯对小鼠辐射损伤有防护作用, 1963年, 钱振超等研究发现, 小鼠受5Gy照射前10天, 每只小鼠注射50、200及800μg雌二醇后, 可分别提高存活率31 %、34.4 %及42 %。另有报道:雌三醇也具有辐射防护作用。进一步的研究表明:

雌激素对急性放射病的辐射防护作用与其他类型有效防护剂相似, 能提高受照动物的存活率, 延迟放射病症状的出现时间, 减轻症状的严重程度, 对骨髓有核细胞、造血干细胞和祖细胞都有明显的辐射防护作用, 并促进它们的恢复^[1]。

尼尔雌醇是我国研制的新型长效雌激素药物, 人用剂量为2mg/次, 2次/月。口服后, 尼尔雌醇在血中浓度于6小时左右达峰值, 然后迅速下降, 24小时仅为峰值的2/5左右, 72小时基本消失。尼尔雌醇在体内代谢, 可形成雌三醇醚、炔雌三醇、雌三醇等产物^[2]。本次实验选用LACA小鼠, 对尼尔雌醇的抗放效果进行了初步的研究, 发现尼尔雌醇使小鼠在照后最初几日内体重下降缓慢, 但未能提高小鼠存活率及平均存活时间, 对放射引起的小鼠脾脏及胸腺系数下降, 白细胞总数及骨髓DNA含量降低等均无明显的防护作用, 表明尼尔雌醇对小鼠的辐射防护作用不很明显, 这可能与动物种属、尼尔雌醇的化学结构及照射剂量大小等有关。