微核测定法是检测染色体损伤的一种快速简便的经典细胞遗传学方法。近十几年来, 许多学者在动物实验上证明了:在一定的剂量范围内辐射剂量与外周血淋巴细胞微核(LMN)率呈线性关系^[1]。蒋本荣^[2]在对人离体外周血照射的实验中也证明有这种线性关系。这种剂量效应关系在复杂而动态变化人体的整体照射(AR)中是否还存在, 关系能否用LMN去估计放射性事故发生后受照工作人员的辐射生物剂量。本文利用白血病患者进行异体骨髓移植前的全身均匀照射的条件; 进行离体照射(LR)与AR的LMN计数。欲阐述在人体的AR与LR有同样的效应, 为微核法用于估算辐射剂量提供一些依据。

一 材料与方法

1.色者条件和实验分组

选6名经多程化疗达缓解期的白血病患片。见表 1。在照射前5分钟抽静脉血4ml, 分两份:一份为照前组; 另一份为离体组。照射后即抽静脉血2ml为整体组。

2.辐照条件

采用飞利浦SL-750直线加速器产生的8 MVX射线照射患者及离体血。全身照射剂量为60cGy。剂量率为理4cGy/分, 射野均匀度 < ±5%, 全身照射剂量均匀度 < ±6%。为比较AR与LR的效应, 照前抽静脉血(肝索抗凝)2ml, 装于玻璃试管中; 置于与剂最参考点脐部平行的人体一侧的皮肤上, 采用双侧位水平对穿照射。试管与患者同时照射。试管中血接受的剂量与脐部相同。

3.微核标本制备和观察

(1) 标木制备:取全血0.3ml加入1640培养基中(RPMI1640液4ml, 新生牛血清1ml, PHA及肝素适量), pH7.2-7.4, 37℃恒温培养40小时, 加入松胞素-B, 终浓度为6μg/ml, 70小时终止培养, 收获细胞。细胞液移入离心管中以1600转/分离心10分钟, 去上清, 加0.075MKC1低渗液3ml, 混匀, 1600转/分, 离心10分钟, 去上清, 重复固定10分钟, 离心后沉淀物涂片, 干后Giemsa染色。

(2) 结果观察:采用盲法阅片。观察标准:观察胞体较大, 胞质丰富, 胞浆完整的双核淋巴细胞。微核的标准是游离于胞质中, 与主核完全分开。如有重叠或相切者, 必须看到各自的完整核膜，呈圆形或椭圆形。微核着色与主核一致或略浅, 大小为主核的1/3以下。每个患若均有照前、离体及整体三管标本, 对每管标本至少计数2000个双核淋巴细胞, 记录其中LMN细胞数及LMN数, 然后计算LMN细胞及LMN的千分率。本组资料根据微核泊松分布的假没, 统计学采用μ检验。

二 结果与分析

1.60cGyAR和LR后微核率的结果见表 2和表 3。

从表 2和表 3可以看出, LMN细胞率照前, AR及LR组的平均数分别为18‰, 38‰, 37‰。LMN率在三组的平均数分别为20‰, 43‰, 42‰。60cGy AR及LR的LMN细胞率和LMN率与照前组比较; 均有非常显著性差异(P < 0.01)。

2.仅由60cGy的AR和LR产生的微核率的结果见表 4和表 5。

由表 4及表 5可见, 除去其它引起微核升高的因素, 仅由60cGy的AR和LR产生的LMN细胞率的平均数分别为20‰, 19‰。产生的LMN率的平均数都为2‰。仅由60cGy的AR产生的LMN细胞率和LMN率与仅由60cGy的LR的比较无显著性差异(P>0.1)。

三 讨论

1970年Countryman^[3]首次建立了X射线照射后LMN剂量效应曲线。直至胞质分裂阻断微核法问世后^[4], 才在动物体及人外周离体血的实验中发现了较好的剂量效应曲线。本实验利用白血病异体骨髓移植前进行全身照射60cGy的条件, 进行AR与LR的LMN细胞率及LMN率的比较, 证实了两者无显著性差异。说明在全身受60cGy的照射时, AR与LR诱发的LMN细胞率及LMN率相同。

本实验在第二次全身照射710cGy后, 曾试检测4例患者的微核。结果均因涂片双核细胞过少而无法计数。我们认为检测失败的原因有两个方面。一方面大概是由于患者接受多程化疗和放疗及化疗中曾用高剂量的抗增殖潜力的皮质激素类药物如氟美松。另一方面患者受到二次照射剂量为60cGy的全身照射, 使患者体内白细胞减少, 而且绝大多数细胞失去了复制功能。本实验初步表明了多程化疗及两次照射剂量为60cGy及710cGy的全身照射, 有可能超出了胞质分裂阻断微核法的试用检测范围。

本文由卫生部工业卫生实验所白玉书研究员指导, 特此致谢